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量分别为 52. 8%、 83. 5%、 99. 0%, RSD 分别为 0. 46%、
0. 99%、 0. 48%。批号为 20050927 的维生素 C 阴道缓释片
0. 5、 1. 0、 2. 0 h 的 释 放 量 分 别 为 53. 7%、 85. 0%、
99. 0%, RSD 分别为 0. 50%、 0. 92%、 0. 62%, 批号为
20050928 的维生素 C 阴道缓释片 0. 5 、 1. 0、 2. 0 h 的释放量
分别 为 52. 0%、 83. 1%、 98. 7%, RSD 分别为 0. 61%、
0. 78%、 0. 65%。
2. 8　均一性试验
取批号为 20050927 的维生素 C 阴道缓释片 , 按上述释
放条件 , 每次 6 片 , 共 6 次 , 测定 0. 5、 1. 0 、 2. 0 h 的释放
度 , 其平均释放度分别为 52. 9%、 83. 9%、 99. 3%, RSD
分别为 0. 43%、 0. 27%、 0. 24%。
2. 9　样品释放度测定
取本品 6 片 , 照释放度测定法[ 3]附录74 , 采用溶出度测定
法[ 3]附录73第二法装置 , 以 0. 1 mol L - 1盐酸溶液 900 m L为
释放介质 , 温度为 37 ℃±0. 5 ℃, 转速为 100 r min - 1 ,
依法操作 , 在 10 min 、 30 min、 1. 0 h 、 1. 5 h 、 2. 0 h 分别取
溶液 10 mL , 过滤 , 并及时在释放杯中补充相同体积 、 相同
温度的释放介质 , 精密量取续滤液 2 mL , 置 50 mL 容量瓶
中 , 用 0. 1 mo l L - 1盐酸溶液稀释至刻度 , 摇匀 , 作为供
试品溶液;另取维生素 C 对照品适量 , 用 0. 1 mo l L - 1盐
酸溶液溶解并稀释制成含维生素 C 约 10 μg m L - 1的溶液 ,
作为对照品溶液。取上述 2 种溶液 , 照紫外-可见分光光度
法[ 3]附录22 , 在 243 nm 波长处分别测定吸收度 , 计算维生素
C 阴道缓释片的释放度。以样品释放时间为横坐标 , 以每个
取样点 6 片样品的累积百分释放度的平均值为纵坐标 , 作累
积释放曲线。 3 批样品和国外对照片累积释放曲线见图 1。
3　讨论
维生素 C 具有共轭双键 , 其稀盐酸溶液在 243 nm 波长
处有最大吸收 , 故利用此紫外吸收特征对本品的释放度测定
方法进行研究[6-7] 。测定方法学考察结果表明:空白辅料对
样品测定无干扰 , 该方法的线性范围 、 稳定性 、 精密度 、 回
收率等均能符合规定要求。本品释放度范围的制订是根据国
图 1　维生素C阴道缓释片的累积释放曲线
外对照片的释放特性而确定的 , 本品的释放情况与国外对照
片基本一致。
预试验发现:以 0. 1 mol L - 1盐酸 900 m L 为释放介
质 , 转速为 100 r min - 1 , 浆法和转篮法对释放度的影响结
果相差不大 , 因片剂首选浆法 , 故本品释放度的测定方法选
用浆法。
释放度为缓释给药系统重要的质控指标。目前有关阴道
缓释制剂的质量分析报道不多。本文释放度所采用的测定方
法简单 , 测定结果准确 , 能有效地反映维生素 C 阴道缓释片
的质量 , 为阴道缓释给药系统的质量控制提供了一定的参考。
参考文献
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(收稿日期:2006 - 06- 16　　修回日期:2006 - 08 - 11)
田基黄药材的质量研究
彭维 , 吴钉红 , 杨立伟 , 王永刚 , 李沛波 , 苏薇薇 (中山大学广州现代中药质量研究开发中心 , 广州　510275)
摘要:目的　建立田基黄药材的薄层色谱鉴别法以及其中槲皮苷和异槲皮苷 HPLC 含量测定方法 , 考察不同产地 、
不同采收期的药材质量。方法　以槲皮苷 、 异槲皮苷为对照品 , 采用聚酰胺薄膜层析法对田基黄药材进行定性;采
用高效液相色谱法 , 以 Merck lichroCART RP-18e (250 mm ×4. 0 mm , 5 μm) 为色谱柱 , 乙腈-磷酸盐缓冲液 pH
=3 (18∶82) 为流动相 , 检测波长为 350 nm 进行定量。结果　加样回收率槲皮苷 97. 79%、 RSD为 1. 53%, 异槲
皮苷 97. 23%、 RSD 为 2. 06%。结论　本方法简便 、 快速 , 专属性强 , 分离度好 , 重现性好。
关键词:槲皮苷;异槲皮苷;田基黄;聚酰胺薄膜层析法;高效液相色谱法
中图分类号:R917　　　　文献标识码:A　　　　文章编号:1672 - 2981 (2006) 05 - 0340 - 03
　　作者简介:彭维 , 女 , 副研究员 , 主要从事药品质量控制技术研究　　Tel:(020) 84110808
Cen t ral South Pharmacy. October 2006 , Vol. 4 No. 5　中南药学 2006年 10月第 4卷第 5期
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Quality study of Hypericum japonicum Thunb. (Tianjihuang)
Peng Wei , Wu Ding-hong , Yang Li-w ei , Wang Yong-gang , Li Pei-bo , Su Wei-w ei (Guangzhou Quality Research
and Development Center o f Traditional Chinese Medicine , Sun Yat-sen University , Guangz hou　510275)
ABSTRACT:OBJECTIVE　T LC and H PLC methods w ere established to investig ate the quality of Hypericum japoni-
cum Thunb. (T ianjihuang) herbs with different habitats and co llection dates. METHODS　Quercitrin and isoquer-
citrin were identified by T LC , and Quercit rin and isoque rcitrin w ere determined by H PLC. RESULTS　The sensitivity
and repetition of this method were good. The recove ry of quer citrin w as 97. 79% with RSD o f 1. 53%, and the recov-
e ry o f isoquer citrin w as 97. 23% with RSD of 2. 06%. CONCLUSIONS　This method is simple and reproducible.
KEY WORDS:que rcitrin;Isoquercitrin;T ianjihuang (H ypericum j aponicum Thunb.);H PLC
　　田基黄 (又名地耳草), 为藤黄科金丝桃属植物田基黄
Hypercum japonicum Thunb. 的干燥全草 , 具有清热利湿 、
解毒消肿 、 散瘀止痛的功效 , 用于治疗急 、 慢性肝炎[ 1] 。田
基黄药材主要含有槲皮苷和异槲皮苷等黄酮类成分[2-3] , 原
标准收载于中国药典 1977 年版一部[ 4] , 无薄层色谱鉴别及
含量测定项。本文采用聚酰胺薄膜层析法鉴别田基黄药材中
的槲皮苷及异槲皮苷 , 采用高效液相色谱法测定其中槲皮苷
及异槲皮苷的含量 , 专属性强 , 灵敏度 、 准确度高 , 可对田
基黄药材进行质量监控 , 为其质量评价提供科学依据。
1　样品 、 仪器与试药
瑞士 CAMAG 公司薄层自动点样仪 、 薄层成像系统 、
薄层板加热器 、 双槽展开缸 (20 cm×20 cm)。
美国 DIONEX高效液相色谱仪 (P680四元梯度泵 、 真空
脱气机 、 自动进样器 、 PDA —100 检测器及 Chromeleon 工作
站)。槲皮苷对照品 (Quercitrin , 编号 83389-2083225 , 含量
97. 5%)、 异 槲 皮 苷对 照 品 ( Isoquercitrin , 编 号 17793-
2444885 , 含量 92. 0%) 均由美国 Fluka公司提供, 乙腈为色
谱纯, 高纯水 , 乙醇 、 甲醇为分析纯。田基黄药材为自采及
购买, 经中山大学生命科学学院廖文波教授鉴定为藤黄科金
丝桃属植物田基黄 Hypericum japonicum Thunb. 的干燥全
草。
2　方法与结果
2. 1　对照品溶液的制备
精密称取减压干燥至恒重的槲皮苷对照品 、 异槲皮苷对
照品适量 , 分别加甲醇制成含槲皮苷 111. 0 μg mL - 1 、 异
槲皮苷 126. 0 μg mL - 1的溶液。
2. 2　供试品溶液的制备
取田基黄药材粗粉 0. 5 g , 精密称定 , 置 100 m L 具塞
三角瓶中 , 加 60%乙醇超声处理 (功率 360 W , 频率 35
kHz) 3次 , 每次 20 mL , 10 min , 过滤 , 合并滤液 , 减压
回收溶剂至干。精密加入 50%甲醇 10 m L 使溶解 , 用微孔
滤膜 (0. 45 μm) 过滤 , 取续滤液 , 即得。
2. 3　薄层色谱法鉴别田基黄药材
吸取上述供试品溶液 、 槲皮苷和异槲皮苷对照品溶液各
1 μL , 分别点于同一聚酰胺薄膜上 , 以甲酸乙酯-丙酮-水-冰
醋酸 (5∶4∶0. 8∶0. 4) 为展开剂 , 展开 , 取出 , 晾干 , 喷
以三氯化铝试液 , 60 ℃加热烘干后 , 置紫外光灯 (365 nm)
下检视。对 10 批田基黄药材进行薄层鉴别 , 供试品色谱中 ,
在与对照品色谱相应的位置上 , 显相同的黄绿色荧光斑点
(见图 1)。
图 1　田基黄药材薄层色谱图
1:a 槲皮苷 , b异槲皮苷;2～ 11:药材供试品
2. 4　田基黄药材中槲皮苷和异槲皮苷的含量测定
2. 4. 1　检测波长的确定依据　分别取槲皮苷 、 异槲皮苷对
照品溶液及供试品溶液适量 , 注入液相色谱仪测定。采用二
极管阵列检测器扫描槲皮苷 、 异槲皮苷色谱峰紫外吸收光谱
图 , 槲皮苷最大吸收峰在 204 、 256、 350 nm 处 , 异槲皮苷
的最大吸收峰在 204、 256、 355 nm 处。 故选 204 、 256 、
350 、 355 nm 4 个波长同时检测 , 结果发现在 204 、 256 、
355 nm 处 , 杂质峰有一定干扰 , 分离度不如 350 nm 好。故
最终确定检测波长为 350 nm。
2. 4. 2 　色谱条件　色谱柱:Merck lichr oCART RP-18e
(250 mm ×4. 0 mm , 5 μm);流动相:乙腈-磷酸盐缓冲液
(称取磷酸二氢钾 6. 8 g , 溶解至水 1 000 mL 中 , 加磷酸调
pH 3. 0 , 即得) (18∶82);流速为1 mL min- 1 ;柱温为室
温;检测波长为 350 nm。
2. 4. 3　线性关系考察及线性范围　取上述槲皮苷对照品溶
液 , 分别进样 2. 5 、 5、 10、 20、 30、 40 μL;异槲皮苷对照
品溶液 , 分别进样 2. 5、 5 、 10 、 15 、 20 μL。按上述色谱条
件进行分析 , 以进样量 C (μg) 为横坐标 , 峰面积值 A 为纵
坐标 , 进行回归分析 , 计算回归方程为:槲皮苷:A =
26. 561 C- 1. 982 6 , r=0. 999 1;异槲皮苷:A =27. 683 C-
0. 741 3 , r=0. 999 1。结果表明:槲皮苷进样量在 0. 278 ～
4. 440 μg 线性关系良好 , 异槲皮苷进样量在 0. 315 ～ 2. 520
μg线性关系良好。
2. 4. 4　精密度试验　精密吸取两种对照品溶液各 10 μL , 在
上述选定的色谱条件下, 连续进样 6 次 , 测定 , 槲皮苷、 异
槲皮苷峰面积的 RSD分别为 0. 59%、 0. 82% (n=6)。
中南药学 2006年 10月第 4卷第 5期　Cen t ral South Pharmacy. Octob er 2006 , Vol. 4 No. 5
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图 2　田基黄药材高效液相色谱图
A. 槲皮苷对照品;B. 异槲皮苷对照品;C. 田基黄药材;
1. 槲皮苷;2. 异槲皮苷
2. 4. 5　稳定性试验　精密吸取同一供试品溶液各 10 μL ,
分别在 0 、 1、 3 、 6 、 12 、 24 、 48 h 进样 , 测定槲皮苷 、 异
槲皮苷色谱峰 , 结果表明 , 供试品溶液在 48 h 内保持稳定 ,
RSD分别为 1. 55%和 1. 13% (n=7)。
2. 4. 6　重复性试验　精密称取同一批号的样品各 6 份 , 分
别按供试品溶液制备方法操作 , 精密吸取各供试品溶液各
10 μL , 分别注入高效液相色谱仪 , 测定。结果样品中槲皮
苷平均含量为 0. 432%, RSD=1. 82% (n=6);异槲皮苷平
均含量为 0. 260%, RSD=1. 55% (n=6)。
2. 4. 7　加样回收率试验　精密称取已测知槲皮苷 、 异槲皮
苷含量的样品适量 , 分别精密加入一定量的对照品 , 按供试
品溶液的制备及色谱条件项下操作 , 计算回收率 (见表 1～
2)。结果田基黄药材中槲皮苷平均回收率 97. 79%, RSD为
1. 53%;异槲皮苷平均回收率 97. 23%, RSD 为 2. 06%。
表 1　槲皮苷加样回收试验结果
称样量
(g)
原有量
(mg)
加入量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
RSD
(%)
0. 250 4 1. 081 7 1. 110 2. 186 6 99. 54
0. 253 9 1. 096 8 1. 110 2. 155 2 95. 35
0. 254 7 1. 100 3 1. 110 2. 193 3 98. 47 97. 79 1. 53
0. 255 3 1. 102 9 1. 110 2. 198 3 98. 69
0. 253 2 1. 093 8 1. 110 2. 168 5 96. 82
0. 252 1 1. 089 1 1. 110 2. 175 6 97. 89
2. 4. 8　样品测定　按上述供试品溶液的制备方法和测定条
件 , 测定了 18 批田基黄药材中槲皮苷 、 异槲皮苷 , 结果见
表 3。
3　讨论
根据上述不同产地 、 不同采收期的 18批田基黄样品中
表 2　异槲皮苷加样回收试验结果
称样量
(g)
原有量
(mg)
加入量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
RSD
(%)
0. 250 4 0. 651 0 0. 630 1. 283 0 100. 31
0. 253 9 0. 660 1 0. 630 1. 261 3 95. 42
0. 254 7 0. 662 2 0. 630 1. 273 7 97. 06 97. 23 2. 06
0. 255 3 0. 663 8 0. 630 1. 262 5 95. 03
0. 253 2 0. 658 3 0. 630 1. 280 3 98. 73
0. 252 1 0. 655 5 0. 630 1. 265 6 96. 85
表 3　田基黄药材中槲皮苷 、 异槲皮苷的含量
批号 产地 采集期 槲皮苷含量(%)
异槲皮苷含量
(%)
1 广西桂林 2002年 8月 0. 578 0. 162
2 广西梧州 2002年 7月 0. 982 0. 313
3 广西百色 2002年 6月 0. 347 0. 165
4 广西贺县 2002年 9月 0. 292 0. 127
5 广西来宾 2002年 8月 0. 432 0. 260
6 广西玉林 2002年 7月 0. 290 0. 209
7 广西都安 2002年 6月 0. 310 0. 080
8 广西浦北 2003年 7月 0. 818 0. 228
9 广西南宁 2003年 7月 0. 769 0. 471
10 广西南宁 2003年 8月 1. 067 0. 487
11 广西钦州 2003年 1月 0. 166 0. 078
12 广东花都 2003年 7月 0. 365 0. 133
13 广东花都 2003年 8月 0. 262 0. 099
14 湖南郴州 2003年 7月 0. 231 0. 125
15 福建龙岩 2003年 8月 0. 293 0. 089
16 江西市售 0. 582 0. 105
17 江苏市售 0. 353 0. 200
18 河南市售 0. 514 0. 104
槲皮苷 、 异槲皮苷的含量测定结果 , 可知田基黄中槲皮苷的
含量均高于异槲皮苷。考虑到中药材的化学成分较复杂 , 不
同产地 、 不同采收期田基黄药材中槲皮苷 、 异槲皮苷的含量
变异较大 , 暂定本品按干燥品计算 , 槲皮苷和异槲皮苷总量
≥0. 4%。
采用 RP-HPLC 法测定田基黄中槲皮苷 、 异槲皮苷的含
量 , 分离效果好 , 线性 、 稳定性 、 重现性 、 回收率等方法学
考察均符合含量测定的要求 , 本方法为控制田基黄药材的质
量提供了依据。
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(收稿日期:2006 - 03- 03　　修回日期:2006 - 05 - 10)
Cen t ral South Pharmacy. October 2006 , Vol. 4 No. 5　中南药学 2006年 10月第 4卷第 5期