全 文 ：［收稿日期］ 20140805(017)
［第一作者］ 彭亮，在读硕士，从事中药质量控制研究，Tel:15079048763，E-mail:602982740@ qq． com
［通讯作者］ * 陈杰，硕士，副教授，从事中药质量与开发研究，Tel:15979019631，E-mail:813680107@ qq． com;
* 李诒光，博士，主任中药师，从事中药质量评价与开发研究，Tel:15979019136，E-mail:lyg@ jzjt． com
猴耳环叶 HPLC指纹图谱
彭亮1，陈杰1* ，李诒光2* ，饶毅1，魏惠珍1，眭荣春1，袁桂平3
(1. 江西中医药大学，南昌 330006;2. 江中药业股份有限公司，南昌 330096;
3. 江西省食品药品检验所，南昌 330046)
［摘要］ 目的:建立猴耳环叶的 HPLC指纹图谱。方法:色谱条件为 Odyssll C18色谱柱(4. 6 mm × 250 mm，5 μm);流动相
甲醇-0. 5%磷酸水梯度洗脱，柱温 35 ℃，流速 1 mL·min －1，检测波长 273 nm，进样量 10 μL。结果:采用 UPLC /DAD/Q-TOF-
MS xevo G2 Q-Tof LC-MS对 15 个共有峰中的 6 个色谱峰进行初步归属，确定为没食子酸、木犀草苷、没食子酸乙酯、(－)-
(2S)-5，3，4，5-四羟基黄烷-7-没食子酸酯和 7，4-二-O-没食子酰基特利色黄烷、槲皮苷，10 批猴耳环叶的相似度均在 0. 97
以上。结论:该方法符合方法学要求，可用于猴耳环叶的全面质量评价。
［关键词］ 猴耳环;高效液相色谱法;指纹图谱
［中图分类号］ Ｒ284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2015)03-0063-04
［doi］ 10. 13422 / j． cnki． syfjx． 2015030063
HPLC Fingerprint Spectrum of Archidendron clypearia Leaves PENG Liang1，CHEN Jie1* ，LI Yi-guang2* ，
ＲAO Yi1，WEI Hui-zhen1，SUI Ｒong-chun1，YUAN Gui-ping3 (1. Jiangxi University of Traditional Chinese
Medicine，Nanchang 330006，China;2. Jiangzhong Pharmaceutical Corporation，Nanchang 330096，China;
3. Jiangxi Provicial Institute for Drug and Food Control，Nanchang 330046，China)
［Abstract］ Objective:To establish the HPLC fingerprint of Archidendron clypearia leaves． Method:
The chromatographic fingerprint was obtained with Odyssll C18 column (4. 6 mm × 250 mm，5μm)and gradient
eluted with methanol and 0. 5% phosphoric acid． The column temperature was maintained at 35 ℃，and the flow
rate was 1 mL·min －1 ． The detection wavelength was 273 nm. The injection volume was 10 μL． Ｒesult:Six
chromatographic peaks among 15 common peaks were identified by UPLC /DAD /Q-TOF-MS xevo G2 Q-Tof LC-MS
and be intended to be gallic acid， galuteolin， gallic acid ethyl ester，(－ )-(2S)-5，3，4，5-
tetrahydroxyflavan-7-gallate，7， 4-O-di-gallyoltricetiflavan， quercitrin． The similarities of ten batches of
Archidendron clypearia leaves were above 0. 97. Conclusion:The method accordance with the requirements of the
methodology and can be used for the full quality evaluation of Archidendron clypearia leaves．
［Key words］ Archidendron clypearia leaves;HPLC;fingerprint spectrum
猴耳环主要分布于我国西南及浙江、福建、台
湾、广东、海南、广西、西藏等地。具有清热解毒、凉
血消肿、止泻等作用，临床上主要用于上呼吸道感
染、急性咽喉炎、急性扁桃体炎、急性胃肠炎等［1］。
现代研究发现猴耳环叶主要含有没食子酸、槲皮苷、
没食子酸乙酯和(－)-(2S)-5，3，4，5-四羟基黄
烷-7-没食子酸酯等成分［2-3］，具有抗炎、抗菌、抗病
毒和抗氧化等作用［4］。
目前猴耳环叶的质量控制主要以单一成分作为
定性、定量的考察指标［5］，这与中药所含化学成分
复杂，发挥药效时多成分、多靶点协同作用的特性不
甚吻合。中药指纹图谱是一种综合的、可量化的质
量控制手段，其基本属性是整体性和模糊性，这与
中医理论的整体性原则和中药作用机制的模糊性是
相对应的［6］，因此中药指纹图谱是目前中药质量评
价较合理的方法。为进一步评价猴耳环叶质量，本
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研究建立了猴耳环叶 HPLC 指纹图谱，运用 UPLC /
DAD /Q-TOF-MS 对共有峰中的部分色谱峰进行了
归属，并对 10 批猴耳环叶 HPLC 指纹图谱进行分
析，以便能够更加全面的体现不同批次药材之间的
质量差异，为猴耳环叶药材质量的综合评价和道地
药材 GAP 实施进一步提供依据。
1 材料
1. 1 仪器 LC-20AT 型液相色谱仪(日本岛津)，
Acquity UPCL，xevo G2 Q-Tof 液质联用仪(包括
2489UV /Uisible Detector，美国 Waters);CP225D 型
电子天平(Sartorius)，AB204-N 型精密分析天平
(Mettler Toledo公司)。
1. 2 试药 猴耳环叶原药材经江西省食品药品检
验所袁桂平主任中药师鉴定，为豆科植物猴耳环的
叶 Archidendron clypearia，药材来源见表 1。没食子
酸对照品(批号为 110708-201106，中国食品药品检
定研究院)。乙腈为色谱纯，水为娃哈哈纯净水，甲
醇等其他试剂均为分析纯。
表 1 不同批次猴耳环叶样品来源及采收时间
Table 1 Different batches of Archidendron clypearia
No． 产地 /批次 采收日期 No． 产地 /批次 采收日期
S1 北粤山区-1 2012-07-12 S6 北粤山区-6 2012-08-27
S2 北粤山区-2 2012-09-22 S7 北粤山区-7 2012-08-18
S3 北粤山区-3 2012-07-15 S8 北粤山区-8 2012-06-21
S4 北粤山区-4 2012-06-29 S9 从化太平 2012-08-02
S5 北粤山区-5 2012-07-05 S10 增城中新 2012-07-25
2 方法与结果
2. 1 对照品溶液的制备 取没食子酸对照品适量，
精密称定，以甲醇溶解并稀释，得到 49. 28 mg·L －1
的没食子酸对照品溶液。
2. 2 供试品溶液的制备 取本品粉末(过二号筛)
约 0. 2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入
50%乙醇 50 mL，称定质量，回流提取 1. 5 h，放冷，
再称定质量，用 50%乙醇补足减失的质量，摇匀，滤
过，取滤液，即得。
2. 3 色谱条件 Odyssll C18色谱柱(4. 6 mm × 250
mm，5 μm)，柱温 35 ℃，以甲醇(A)-0. 5%磷酸(B)
为流动相梯度洗脱(0 ～ 10 min，10% ～ 25% A;10 ～
60 min，25% ～ 47% A)，检测波长 273 nm，流速 1
mL·min －1，进样量 10 μL。
2. 4 质谱条件 离子源 ESI(负离子模式)，干燥温
度 250 ℃，干燥流速 800 L·h －1，雾化器流速
50 L·h －1，离子源温度 100 ℃，扫描质核比范围
100 ～ 1 000。
2. 5 方法学考察
2. 5. 1 精密度试验 取同一供试品溶液(增城中
新样品)，按 2. 3 项下色谱条件，连续进样 6 次，以没
食子酸峰为参照峰，结果各共有峰的相对保留时间
ＲSD ＜0. 3%，相对峰面积 ＲSD ＜1. 3%，表明仪器精
密度良好。
2. 5. 2 稳定性试验 取本品(增城中新样品)，按
2. 2 项下制成供试品溶液，分别在 0，2，4，8，12，24 h
进样，以没食子酸峰为参照峰，结果各共有峰的相对
保留时间 ＲSD ＜ 0. 3%，相对峰面积 ＲSD ＜ 2. 3%，
表明供试品溶液在 24 h内稳定性良好。
2. 5. 3 重复性试验 取本品(增城中新样品)6
份，按 2. 2 项制成供试品溶液，按 2. 3 项下色谱条件
测定，以没食子酸峰为参照峰，结果各共有峰的相对
保留时间 ＲSD ＜ 0. 3%，相对峰面积 ＲSD ＜ 1. 4%，
表明该方法重复性好。
2. 6 指纹图谱的建立与共有指纹峰的指认
2. 6. 1 指纹图谱的建立 按 2. 2 项下制备 10 批猴
耳环叶药材供试品溶液，依次进样，记录高效液相色
谱图，60 min内有 15 个吸收峰是 10 批猴耳环叶药
材共有的，见图 1。
Ｒ. 共有模式;S1 ～ S10. 样品
图 1 10 批猴耳环叶 HPLC指纹谱重叠及共有模式指纹谱
Fig． 1 Fingerprint overlap and generated mutual mode fingerpint
spectrum of 10 batches of Archidendron clypearia leaves
2. 6. 2 共有指纹峰的标定 对 10 批猴耳环叶药材
HPLC-FPS测定结果进行比较分析，发现 15 个特征
峰是 10 批猴耳环叶药材共有的，且 15 个特征峰的
峰面积总和大于总峰面积的 90%，因此确定这 15
个峰为特征指纹峰。以没食子酸峰为参照峰，计算
各共有峰的相对保留时间和相对峰面积，结果见表
2，3。
2. 6. 3 部分特征峰的确认 为确认猴耳环叶特征
峰的化学信息，采用 UPLC /DAD /Q-TOF-MS xevo G2
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表 2 10 批猴耳环叶指纹图谱中共有峰的相对保留时间
Table 2 Ｒelative retention time of common peaks in fingerprint spectrum of 10 batches of Archidendron clypearia
No．
相对保留时间
S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 ＲSD /%
1 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 0. 00
2 1. 872 1. 873 1. 873 1. 873 1. 871 1. 873 1. 868 1. 873 1. 872 1. 873 0. 09
3 2. 089 2. 090 2. 090 2. 091 2. 088 2. 090 2. 085 2. 090 2. 089 2. 091 0. 08
4 2. 132 2. 135 2. 132 2. 134 2. 133 2. 135 2. 128 2. 134 2. 132 2. 135 0. 10
5 2. 344 2. 345 2. 345 2. 346 2. 344 2. 345 2. 339 2. 345 2. 344 2. 346 0. 09
6 2. 406 2. 406 2. 407 2. 407 2. 405 2. 406 2. 401 2. 408 2. 406 2. 408 0. 08
7 2. 576 2. 577 2. 578 2. 578 2. 576 2. 577 2. 570 2. 577 2. 575 2. 577 0. 09
8 3. 190 3. 189 3. 192 3. 193 3. 189 3. 189 3. 183 3. 192 3. 190 3. 194 0. 10
9 3. 395 3. 392 3. 395 3. 396 3. 392 3. 393 3. 384 3. 395 3. 393 3. 397 0. 11
10 3. 536 3. 533 3. 537 3. 537 3. 536 3. 534 3. 526 3. 537 3. 542 3. 539 0. 12
11 3. 678 3. 675 3. 677 3. 679 3. 676 3. 675 3. 666 3. 680 3. 676 3. 681 0. 11
12 4. 424 4. 426 4. 417 4. 421 4. 425 4. 416 4. 404 4. 429 4. 414 4. 432 0. 19
13 4. 995 4. 992 4. 994 4. 997 4. 991 4. 991 4. 990 4. 996 4. 990 4. 999 0. 06
14 5. 401 5. 398 5. 401 5. 403 5. 386 5. 398 5. 404 5. 403 5. 398 5. 407 0. 11
15 5. 671 5. 670 5. 671 5. 674 5. 411 5. 666 5. 675 5. 675 5. 668 5. 676 1. 46
表 3 10 批猴耳环叶指纹图谱中共有峰的相对峰面积
Table 3 Ｒelative peak areas of common peaks in fingerprint spectrum of 10 batches of Archidendron clypearia
No．
相对峰面积
S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 ＲSD /%
1 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 0. 00
2 0. 071 0. 073 0. 074 0. 068 0. 067 0. 065 0. 069 0. 067 0. 071 0. 074 4. 55
3 0. 192 0. 213 0. 199 0. 196 0. 190 0. 183 0. 194 0. 208 0. 191 0. 193 4. 50
4 0. 069 0. 069 0. 061 0. 068 0. 066 0. 067 0. 068 0. 068 0. 063 0. 061 4. 79
5 0. 186 0. 203 0. 206 0. 196 0. 181 0. 197 0. 196 0. 209 0. 198 0. 194 4. 32
6 0. 187 0. 176 0. 183 0. 178 0. 181 0. 171 0. 164 0. 169 0. 185 0. 173 4. 23
7 1. 309 1. 301 1. 314 1. 293 1. 328 1. 317 1. 334 1. 373 1. 376 1. 323 2. 10
8 0. 125 0. 129 0. 123 0. 128 0. 118 0. 112 0. 129 0. 131 0. 127 0. 118 4. 97
9 2. 952 3. 195 3. 182 3. 171 3. 153 3. 217 3. 187 3. 207 3. 260 3. 160 2. 59
10 0. 146 0. 147 0. 140 0. 145 0. 140 0. 150 0. 142 0. 148 0. 144 0. 136 2. 98
11 2. 553 2. 664 2. 560 2. 460 2. 449 2. 681 2. 642 2. 667 2. 619 2. 612 3. 22
12 0. 272 0. 248 0. 273 0. 278 0. 251 0. 266 0. 254 0. 265 0. 245 0. 256 4. 42
13 0. 255 0. 253 0. 263 0. 274 0. 235 0. 262 0. 256 0. 242 0. 255 0. 238 4. 76
14 1. 514 1. 529 1. 521 1. 536 1. 518 1. 519 1. 526 1. 530 1. 493 1. 489 1. 02
15 0. 115 0. 111 0. 114 0. 105 0. 101 0. 113 0. 118 0. 105 0. 112 0. 108 4. 82
Q-Tof LC-MS对 15 个共有峰中的 6 个色谱峰进行了
指认，结果见表 4。
2. 7 相似度评价 根据国家药典委员会颁布的
《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2004A 版)，
计算 10 批猴耳环叶药材的相似度分别为 0. 995，
0. 998，0. 995，0. 997，0. 978，0. 988，0. 988，0. 984，
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表 4 猴耳环叶指纹图谱中共有峰的指认
Table 4 Identify results of common peaks in fingerprint spectrum of Archidendron clypearia leaves
峰号 保留时间 /min 准分子离子峰［M + H］－ 分子式 化合物
1 7. 904 C7H6O5 没食子酸
6 18. 997 447. 094 5 C21H20O11 木犀草苷
7 20. 329 197. 045 0 C9H10O5 没食子酸乙酯
9 26. 794 441. 083 5 C22H18O10 (－)-(2S)-5，3，4，5-四羟基黄烷-7-没食子酸酯
11 29. 039 593. 092 3 C29H21O14 7，4-二-O-没食子酰基特利色黄烷
14 42. 647 C21H20O11 槲皮苷
0. 995 和 0. 993。由结果可知，10 批猴耳环叶药材
的相似度均 ＞ 0. 97，表明药材质量稳定，差异较小。
3 讨论
在参考文献［7-8］的基础上，本实验曾用甲醇-水、
甲醇-0. 5%磷酸、乙腈-水、乙腈-0. 5%磷酸为流动相
进行梯度洗脱。结果表明，以甲醇-0. 5%磷酸为流
动相进行梯度洗脱，各色谱峰的峰形和分离度均优
于其他流动相系统。
本实验通过对提取溶剂、提取方法、提取时间进
行考查，确定以 50%乙醇为溶剂，回流提取 1. 5 h为
最佳提取条件。采用 HPLC-UV 检测分析发现，在
273 nm波长处指纹峰较多，多数特征成分的响应值
较大，而且基线较平稳，故选择 273 nm 波长作为指
纹图谱检测波长。
本实验对 10 批猴耳环叶药材指纹图谱进行相
似度评价分析，结果表明药材质量稳定，能较全面反
映药材的品质。鉴于本实验的样品出自其主产地广
东，其他省份的药材质量还有待研究。
［参考文献］
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［责任编辑 顾雪竹］
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