全 文 ：文章编号: 1000-0496( 2000) 01-0026-02
　　 　山东省卫生厅资助课题
狼毒大戟水提物对小鼠致突变作用的实验研究
刘　萍1　杜　娟 2　于丽华 3　崔　日希 1　郝丽娜4　王淑娥 1
(山东医科大学　 1卫生化学教研室　 2附属医院　3毒理研究室　 4安丘市中医院 )
内容提要　目的 :探讨狼毒大戟水提物是否具有致突变作用。方法:实验用昆明种近交小鼠为实验对
象 ,采用传统的毒理学实验方法 ,以微核出现率和精子畸变率为观察指标 ,在高 ( 360g /kg )、中 ( 180g /kg )、低
( 30g /kg )剂量下 ,进行了初步观察。 结果:中、高剂量组与阴性对照组间有显著性差异 ( P < 0. 01, P <
0. 005) ,低剂量组与阴性对照组间无显著性差异 (P> 0. 10)。结论:提示狼毒大戟水提物在较高剂量下有致
突变作用 ,但在低剂量下 ( 10倍于治疗剂量 )无明显毒性。
关键词　狼毒大戟 ;突变 ;小鼠 ,近交系
中图分类号　 R979. 1　　文献标识码　 A
EFFECT OF WATER EXTRACT OF EUPHORBIA FISHERIAN A
STEAD ON DEV ELOPIN G MU TAT ION IN M ICE
LIU Ping , DU Juan, YU Li-hua, et al
( Dept. of Public Health Chemist ry, Shandong Medical Univ ersi ty )
ABSTRACT　 Objective: To investigate the potential ef fect of Euphorbia Fisheriana Stead ( EFS) on
developing mutation.Methods: The present study w as perfo rmed in inbred Kunming mice, using the t raditional
toxicological method based on observing ratios of micronucleus and sperm abnormi ty ( RM S) . The mice w ere
randomly divided into 5 groups: negativ e control (Ⅰ ) and positiv e control (Ⅱ ) , low dosage (Ⅲ ) , medium
dosage (Ⅳ ) , and high dosage (Ⅴ ) , and the EFS ex t ract 30g /kg , 180g /kg, 360g /kg w ere administered to
g roupsⅢ , Ⅳ , Ⅴ respectively. Results: The results showed that high and medium dosages could significant ly
increase RM S as compared to negativ e controls( P < 0. 01, P < 0. 005) , but similar result couldnt be observed in
g roupⅢ ( P> 0. 10) . Conclusion: The reuslt s indicate that EFS can cause mutation in medium and high
dosage, w hereas low dosage( 10 times higher than that used in t reatment ) is obviously secure.
KEY WORDS　 Eupho rbia Fisheriana Stead; M utation; Mice, inbred strains
　　近年来 ,国内外医药界对抗肿瘤药物的研究日
益广泛 ,某些中草药因其疗效显著 ,毒副作用小而日
益引起人们的重视。实验证明 ,狼毒大戟水提取物对
于多种移植性肿瘤均具有显著抑制作用 [1 ]。 能抑制
小鼠移植肿瘤 S-180细胞的生长、集落形成及小鼠
白血病 P308细胞的生长 ,并和剂量呈正相关 [ 2]。其抗
癌作用机理是通过对癌细胞的直接作用而发挥的 ,
故其在抑制肿瘤细胞的同时 ,可能对正常细胞也有
损伤。本实验以狼毒大戟为代表 ,以昆明种近交系小
鼠为实验对象 ,采用传统的毒理学研究方法 ,对狼毒
大戟水提物的毒性作用进行了初步研究。
1　材料与方法
1. 1　实验动物　昆明种近交系小鼠 ,体重 18～ 35g , 2～ 3月
龄 ,山东医科大学实验动物中心提供。
1. 2　主要药品及仪器　狼毒大戟 ,由济南市医药公司提供 ,
经本校中草药教研室鉴定为大戟科狼毒大戟 ;磷酸盐缓冲液
pH= 6. 8;无水乙醇 ; 2%伊红染液 ; Giesma染液 ;灭活小牛血
清 ;环磷酰胺溶液: 取瓶装环磷酰胺 200mg ,蒸馏水配制成
2mg /ml。离心机 LX J-2型 ,上海医疗器械三厂提供 ;调压变
第 38卷第 1期
2 0 0 0年 3月　　　　　　
山　东　医　科　大　学　学　报
ACT A ACADEM IAE MEDICINAE SHANDONG
　　　　　　 Vol. 38 No. 1
Mar.　 2000
压器 TDGC型 ,上海沪东电控设备厂产 ;真空泵 DOA-V130-
BN型 ,美国 Waters公司产 ;显微镜 XSP-18B型 ,江苏江南
光学仪器厂产。
1. 3　实验方法
1. 3. 1　狼毒大戟的提取　取狼毒大戟干燥饮片 500g ,掰
碎 ,加蒸馏水 2500ml,浸泡 20min,大火煮沸后文火加热煮沸
15min,双层纱布滤去药渣 ,离心过滤 ,弃沉淀 ,取上清液浓缩
至最大浓度 9kg /L ,置冰箱内备用。
1. 3. 2　最大耐受剂量 ( M TD )实验　取 20g左右小鼠 14
只 ,雌雄各半 ,按小鼠的最大灌胃容量 0. 4ml /10g的剂量灌
胃给予 9kg /L狼毒大戟水提物 [3 ] ,给药后 ,分笼饲养 ,观察
1w,记录小鼠死亡情况。
1. 3. 3　微核实验　取 50只小鼠 , 2～ 3月龄 ,体重 18～ 25g ,
随机分为 5组 ,每组 10只 ,雌雄各半。Ⅰ 组为阴性对照 ,给予
蒸馏水 ;Ⅱ 组为阳性对照 ,给予环磷酰胺 50mg /kg腹腔注
射 ;Ⅲ 、Ⅳ、Ⅴ组为低、中、高剂量组。分别以 30、 180、 360g /kg
灌胃给予狼毒大戟水提物。 连续给药 2次 ,初次给药前禁食
4～ 6h,两次给药间隔 24h ,于第二次给药后 6h处死小鼠 ,取
双侧股骨 ,用 2ml注射器吸取小牛血清 1ml,将针头插入一
端骨髓腔少许 ,冲洗入离心管内。 然后 ,用滴管吹打骨髓团
块 ,使其成为细胞悬液后 ,以 1000r /min离心 6min,弃去上
清液 ,留少许血清和沉淀 ,用滴管吹打混匀。 涂片、晾干后用
甲醇固定 15min,用新鲜配制的 Giem sa染液染色 10～
15min,冲洗干净后晾干 ,置油镜下观察 ,每只小鼠计数 1000
个嗜多染红细胞的微核数。
1. 3. 4　精子畸变实验　 50只雄性小鼠 , 3月龄 , 30～ 35g ,随
机分成 5组 ,各组用药同微核实验 ,连续给药 5d, 1次 /d,灌
胃前禁食 4～ 6h,灌胃后禁食 2～ 3h。 4w后处死 ,取小鼠双侧
附睾剪碎于盛有磷酸盐缓冲液的表面皿中 ,擦镜纸单层过
滤 ,离心 5min( 1500r /min) ,吸取多余上清液至剩余 0. 5ml,
用吸管吹打离心管底部直至与上清液混匀 ,涂片 ,乙醇固定
10min,再洗去多余染液并晾干 ,每只小鼠计数 1000个精子 ,
观察形态并计算精子畸形率。
1. 3. 5　数据处理　微核实验进行两样本率比较的 U检验。
精子畸变实验采用 χ2检验。
2　结　果
2. 1　 MTD实验　所用狼毒大戟水剂的最大浓度
为 9kg /L,小鼠的最大灌胃量为 0. 4ml /10g ,故小鼠
的最大灌胃剂量为 9kg /L× 0. 4m l/10g= 360g /kg。
用此剂量灌胃后 ,实验结束时无一只死亡 ,说明小鼠
对狼毒大戟水提物的最大耐受剂量大于 360g /kg。
2. 2　微核实验结果　狼毒大戟水提物在 180g /kg
及 360g /kg两剂量给药时 ,具有明显的致突变作用 ,
表现为微核出现率高 ,与阴性对照组相比较有显著
性差异 ( P < 0. 01) ,但低剂量组 ( 30g /kg )无致突变
作用 ,与阴性对照组无显著性差异 ( P> 0. 10)。所有
剂量组与阳性对照组间均有显著性差异 ( P <
0. 001)。 结果见表 1。
表 1　微核实验结果
组　别 剂量 ( g /kg ) 微核数 (个 ) 微核率 (‰ )
阴性对照 - 30 3. 0
阳性对照 - 460 46. 0
低剂量组 30 31 3. 1
中剂量组 180 91 9. 1
高剂量组 360 89 8. 9
　　 P < 0. 01　 P < 0. 001 v s阴性对照
2. 3　精子畸变实验结果　 50只小鼠实验结束时还
剩 37只:阴性对照组 10只 ,阳性对照组 8只 ,低剂
量组 9只 ,中剂量组 7只 ,高剂量组 3只。精子畸形
多为香蕉形、无钩、胖头和无定形 ,双头、双尾未见。
结果见表 2。中、高剂量组与阴性对照组相比有显著
性差异 ( P < 0. 005) ,低剂量组与之相比无显著性差
异。
表 2　精子畸形变实验结果
组　别 剂量
( g /kg )
小鼠数
(只 )
观察精子
总数 (个 )
畸形数
(个 )
畸形率
(‰ )
阴性对照 - 10 10000 130 13. 0
阳性对照 - 8 8000 580 72. 5
低剂量组 30 9 9000 135 15. 0
中剂量组 180 7 7000 290 41. 4
高剂量组 360 3 3000 157 52. 3
　　 P < 0. 005 v s阴性对照
3　讨　论
文献报道用镇江产的狼毒大戟灌胃测得小鼠急
性毒性 ( LD50 )水提物为 ( 803± 224) g ,醇提取物为
( 172± 7) g[4 ]。而本实验狼毒大戟水提物浓缩到最大
粘稠度时为 9kg /L,按小鼠的最大灌胃容量 0. 4m l/
10g灌胃无一只死亡 ,得出最大灌胃剂量为 360g /
kg ,而没能测出其确切的 LD50 ,与文献报道不同 ,可
能与狼毒的不同提取方法有关。
本研究结果表明 ,在高 ( 360g /kg )、中 ( 180g /
kg )剂量时 ,狼毒大戟水提物对小鼠具有明显的致
突变作用 ,对生殖细胞产生明显的毒性 ,随剂量的增
加有增加的趋势 ,但剂量反应关系不明显。在精子畸
变实验中 ,中、高剂量组逐渐死亡 , 4周后分别剩 7
只和 3只 ,死亡只数随剂量的增加而增加 ,说明狼毒
(下转 31页 )
27刘　萍 ,等 . 狼毒大戟水提物对小鼠致突变作用的实验研究
失仍可继续存在 ,超声乳化组与囊外摘除组差异无
显著性。
因此人们在改进超声乳化手术的同时 ,越来越
重视如何将超声乳化术对内皮的不良影响减到最低
程度。 粘弹剂可避免器械或晶体与内皮细胞的直接
接触 ,减少术中内皮细胞的损伤。但在前房操作过程
中 ,粘弹剂除了会产生垂直作用于角膜内皮的压力
外 ,当与角膜平面相平行运动或操作时 ,粘弹剂会产
生作用于角膜内皮的牵拉力而损伤内皮 [7 ]。 由于术
中所用灌注液的种类、冲洗时间及速率都对内皮产
生影响 , McCarey等分别用 4种不同的液体长时间
灌注角膜内皮 ,虽可引起内皮细胞的水肿 ,细胞连接
解离 ,但这种改变是可逆的 ,其中平衡盐液的成份与
房水最接近 ,对内皮的损害较小。 Beesley等对人眼
供体角膜在排除了晶体碎片和探头损伤情况下评价
冲洗灌注和超声对内皮的影响 ,发现灌注和超声
15min,对内皮无明显损害。 近年来 ,许多新的仪器
和手术方式的设计旨在进一步减轻对内皮的损害 ,
Patel等关于囊间 ( intercapsular)超乳方法的报告称 ,
近乎完整的前囊膜对内皮有明显保护作用 ,术后内
皮丢失率仅为 3. 9% , Hayashi和 Mendonca等报告
的小孔超声乳化可明显减少超声能量并缩短乳化时
间 ,内皮丢失率仅为 ( 4. 3± 3. 4)%。
白内障术后手术源性散光与手术切口的大小、
位置和缝线有密切关系 ,角膜缘 12mm切口造成的
手术源性散光是 6mm巩膜隧道切口的 2～ 4倍。本
组结果显示 ,超声乳化术后再扩大切口至 5. 5～ 6. 0
mm植入 PMM A人工晶体 ,术后早期仍有明显散
光 ,屈光状态在 1月左右稳定 ,只有 3. 2mm切口的
白内障超声乳化摘除及折叠人工晶体植入才是真正
意义上的小切口手术 ,才能体现愈合快 ,对角膜曲率
影响小 ,视功能早期恢复的优点。
(收稿日期　 1998-12-15)
参　考　文　献
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(上接 27页 )
大戟可能有蓄积毒性 ,有待于进一步探讨。 在低剂量
时未见有毒性。
我们曾用 3g /kg剂量的狼毒大戟对抗 L615小鼠
T淋巴细胞白血病 ,可使患鼠生命延长率达 43% ,本
实验所设计的低剂量 ( 30g /kg )已达该剂量的 10倍 ,
此剂量并未对小鼠产生致突变作用 ,说明狼毒大戟水
提物在低剂量时是一种安全可靠的药物 ,即使剂量增
至 360g /kg其毒性也远远低于治疗剂量下的环磷酰
胺。李征用狼毒煎剂 1. 5～ 30g /kg试用于临床治疗晚
期恶性肿瘤均有显著疗效 ,未发现有任何不良反
应 [5 ] ,临床应用与本实验结果一致。
(收稿日期　 1998-12-18)
参　考　文　献
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