全 文 ：大理学院学报
JOURNAL OF DALI UNIVERSITY
第13卷 第10期 2014年10月
Vol.13 No.10 Oct. 2014
［DOI］10. 3969 / j. issn. 1672-2345. 2014. 10. 003
诃子为使君子科植物诃子或绒毛诃子的干燥
成熟果实，具有涩肠止泻、敛肺止咳、降火利咽之功
效〔1〕。诃子在中国民间应用广泛，主要含有诃子酸、
没食子酸、没食子酸乙酯、鞣花酸及强心甾体皂苷、
β-谷甾醇等，具有抗菌作用、抗氧化作用〔2-6〕，据晶
诛本草上记载，诃子对诸病均有疗效。微毛诃子为
诃子的变种，现国内外对其研究较少，且仅有的少
数文献都集中于微毛诃子的干燥成熟果实，其中庞
锦江等的研究表明炙诃子对乙酰胆碱诱发的气管
平滑肌收缩有明显的抑制作用〔7〕，但未见有关微毛
诃子及其变种的树皮醇取液半数致死量的研究及
对动物肠肌作用的研究报道。本实验观察的是诃
子的原变种微毛诃子（T.chebula Retz. var. tomentella
（Kurz.）clarke. 1. c.），通过先测定微毛诃子树皮提取
液对小鼠的半数致死量，然后根据微毛诃子树皮提
取液对小鼠的半数致死量制定相应浓度观察其对动
物肠肌的作用，并对微毛诃子树皮醇取液与组胺（H）
受体的关系进行了探讨，为微毛诃子树皮的临床应
用及进一步的基础研究提供理论依据。
1 材料
1.1 药品及试剂 微毛诃子变种的树皮（产地：云
微毛诃子树皮醇提取液半数致死量的测定及对肠肌的作用
李代航，朱万芸，段素英，赖 泳*
（大理学院药学与化学学院，云南大理 671000）
［摘要］目的：研究微毛诃子树皮醇提取液对小鼠的半数致死量（LD50）以及在体肠肌的影响，并且观察其对豚鼠离体肠肌的影
响。方法：按Bliss法设计实验，对小鼠灌胃给药，观察5 d内小鼠的毒性反应和死亡情况，以小鼠急性死亡率为指标，测定微毛
诃子提取液对小鼠的LD50；采用炭末推进实验观察药物对在体肠肌的影响；以豚鼠离体肠肌收缩幅度、张力为指标，采用离体
标本运动实验法观察微毛诃子树皮醇提液对豚鼠离体肠肌的影响及其作用机制。结果：微毛诃子树皮提取液小鼠灌胃给药的
LD50为5.69 g/kg，LD50的95%的可信限为4.60~7.05 g/kg；微毛诃子树皮的醇提液对小鼠在体肠肌和豚鼠离体肠肌都具有明显的
舒张作用，且组胺对微毛诃子树皮的醇提液的抑制作用具有拮抗作用。结论：微毛诃子树皮的醇提取液具有一定的毒性，同时
微毛诃子树皮醇提液能在一定程度上抑制肠肌的收缩，且作用机制可能与阻断组织胺受体有关。
［关键词］微毛诃子；半数致死量；肠肌
［中图分类号］R285.5 ［文献标志码］A ［文章编号］1672-2345（2014）10-0010-04
Fuzz Myrobalan Bark Alcohol Extract Determination of Median Lethal Dose and Its Effect on Intestinal
Muscle
LI Daihang, ZHU Wanyun, DUAN Suying, LAI Yong*
（College of Pharmacy and Chemistry, Dali University, Dali, Yunnan 671000,China）
〔Abstract〕Objective: To research the micro-ethanol extract of terminalia bark median lethal dose in mice (LD50) and the influence ofintestinal muscle in vivo, and observe the effect on the intestinal muscle of Guinea pig in vitro. Methods: The experiments were
designed according to Bliss. Intragastric administration and observation on the toxicity and deaths of 5 d were done in mice. With acute
mortality in mice as indicators, determination of extract of terminalia LD50 for mice was done; charcoal powder and advancingexperimental studied the effects of drugs on the intestinal muscle; based on isolated Guinea pig intestinal smooth contraction and
tension indicator, isolated specimen movement experiment was observed by micro-terminalia bark alcohol extract on isolated intestinal
muscle of Guinea pigs and its mechanism of action. Results: The LD50 of terminalia bark extract in mice was 5.69 g/kg. Its 95%confidence limit was 4.60-7.05 g/kg. Minimally the ethanol extract of terminalia bark on mice intestinal muscle in vivo and in vitro in
Guinea pigs has marked the vasodilator effect of intestinal muscle and histamine inhibitory effect of ethanol extract of minimal
terminalia antagonism. Conclusion: Alcohol extract of terminalia bark has some toxicity, while micro-terminalia bark alcohol extract
to a certain extent inhibits intestinal muscle contractions, and mechanism of action of histamine receptor-related.
〔Key words〕terminalia chebula Retz；lethal dose；myenteric
10
总第130期 第13卷李代航，朱万芸，段素英，等 微毛诃子树皮醇提取液半数致死量的测定及对肠肌的作用
南临沧，由大理学院生药教研室张德全副教授鉴
定）；NaC1、95％乙醇、HCl均为市售分析纯；蒸馏水
（自制）；消旋山莨菪碱片（开封制药集团有限公司，
批号：20130501）；组胺（上海丽珠东风生物制药，编
号：1703）。参考文献方法〔8〕配制台氏液［1 000 mL
台氏液含：NaCl 8.0 g、10% KCl 2.0 mL（0.2 g）、10%
MgSO4 · 7H2O 2.6 mL（0.26 g）、5% NaH2PO4 · 2H2O
1.3 mL（0.065 g）、NaHCO3 1.0 g、1 mol/L CaCl2 1.8 mL
（0.2 g）、葡萄糖 1.0 g］。
1.2 动物 昆明种小鼠，体重 18～22 g，由大理学
院动物实验中心提供，合格证号: SCXK（滇）2010-
0003。健康豚鼠由大理学院动物实验中心提供，合
格证号：SCXK（滇）2010-0003。
1.3 仪器 BL-420E+生物机能实验系统（成都泰盟
电子有限公司）。
2 方法与结果
2.1 微毛诃子树皮醇提取液及消旋山莨菪碱溶液
的制备
2.1.1 微毛诃子树皮醇提取液的制备 诃子树皮
粗粉40 g，加0.5％的盐酸乙醇溶液140 mL于水浴中
回流1 h，趁热过滤，残渣再用0.5％的盐酸乙醇溶液
140 mL，置于水浴中回流1 h，趁热过滤，合并2次滤
液，减压浓缩至每1 mL相当于生药量1 g〔9〕。
2.1.2 消旋山莨菪碱溶液的制备 按照人与小鼠
药量比 1：50的比值，取规格为 5 mg/片的消旋山莨
菪碱配成0.025 g/kg的溶液。
2.2 半数致死量的测定 取小鼠 15只，按性别分
类后，根据体重随机分成 5组，每组 3只；微毛诃子
树皮醇提取液分成剂量等比级数 1：0.5。禁食不禁
水 12 h后，各组均按 0.03 mL/g一次灌胃，给药后记
录动物的及时反应并连续观察3 d。可推测小鼠灌
胃微毛诃子树皮醇提取液为 0%的剂量（Dn）为
2.650 g/kg，为100%的剂量（Dm）为10.623 g/kg。根据
预实验结果，按Bliss法设计，在含Dm（10.623 g/kg）~
Dn（2.650 g/kg）的剂量（含Dm和Dn）范围内设 5个
剂量组（N），根据公式计算剂量比值为 1.415。取
小鼠150只，适应性饲养7 d后，均衡随机分成5组，
雌雄各半，每组30只；分别为：给药1组（2.650 g/kg）、
给药 2组（3.750 g/kg）、给药 3组（5.300 g/kg）、给药 4
组（7.500 g/kg）、给药 5组（10.623 g/kg）。禁食不禁
水12 h后，各组均按0.03 mL/g连续5 d灌胃，给药后
记录动物的及时反应并连续观察5 d。结果合并后
见表1。
表1 微毛诃子树皮醇提取液半数致死量正式试验
的实验结果
组别
给药 1组
给药 2组
给药 3组
给药 4组
给药 5组
剂量/（g/kg）
2.650
3.750
5.300
7.500
10.623
动物数/只
30
30
30
30
30
死亡数/只
4
11
13
19
30
死亡率/%
13.33
36.67
43.33
63.33
100.00
将表 1数据输入BL-420E+生物机能实验系统
计算出 LD50为 5.69 g/kg，LD50的 95 %的可信限为
4.60~7.05 g/kg。
2.3 微毛诃子树皮醇提液对小鼠在体肠肌的影响
昆明种小鼠50只，均衡随机分为5组，每组10只，分
别灌服NaCl、微毛诃子树皮醇提液低剂量组（1.875
g/kg）、中剂量组（3.750 g/kg）、高剂量组（7.500 g/kg）
剂量和消旋山莨菪碱溶液（0.025 g/kg），1次/d，连续
6 d，末次给药前禁食不禁水12 h，给药10 min后，各
组按0.2 mL/只灌服炭末混悬液（阿拉伯胶10%，活性
炭 5%），20 min后脱颈椎处死小鼠，打开腹腔，分离
肠系膜，剪取上端至幽门，下端至胃部，至于方盘
内，测量小肠全长及炭末混悬液在肠内的推进距
离，计算炭末推进百分率，数据用（均数±标准差）表
示，采用组间 t检验进行统计学处理〔10〕。见表2。
表2 微毛诃子树皮醇提取液对小鼠在体肠肌的
影响（xˉ ± s,n = 10）
组别
NaCl组
微毛诃子树皮醇提液低剂量组
微毛诃子树皮醇提液中剂量组
微毛诃子树皮醇提液高剂量组
消旋山莨菪碱溶液
剂量/
（g/kg）
0.000
1.875
3.750
7.500
0.025
推进百分率/%
73.15 ± 12.26
47.80 ± 17.52*
21.87 ± 12.79*#
46.42 ± 16.10*
50.90 ± 21.48*
注：与生理盐水组比较*P ＜ 0.05；与消旋山莨菪碱组
比较#P＜ 0.05。
11
大理学院学报总第130期 医学
结果表明微毛诃子提取液低、中、高3个剂量组
及消旋山莨菪碱溶液组与生理盐水组比较有明显
的抑制小鼠肠推进作用（P＜0.05），且微毛诃子提取
液中等剂量时对肠推进的抑制作用最强。微毛诃
子树皮醇提液低、中、高3个剂量组对肠推进的抑制
作用均强于消旋山莨菪碱溶液组，且微毛诃子树皮
醇提液中剂量组与消旋山莨菪碱溶液组比较有明
显的抑制小鼠肠推进作用（P＜0.05）。
2.4 微毛诃子树皮醇提液对豚鼠离体肠肌的影响
2.4.1 标本制备 取健康豚鼠，棒击致死，剖开腹
腔，迅速剪取离回盲部 1 cm处回肠放入营养液中，
洗去内容物，剪除肠管周围的脂肪和结缔组织后剪
成1.0~1.5 cm左右待用。
2.4.2 实验前准备 打开HW-400恒温平滑肌浴
槽，使浴槽内温度保持为（37±0.5）℃。打开 BL-
420E+生物机能实验系统，调零，定标，增益调节G =
50，时间常数T = DC，滤波调节F = 30 Hz，扫描速度
S = 8.00/div。取标本，两端对角穿线，下端系于L型
钩上固定，上端连接拉力换能器后将其放在盛有
20 mL台试液的恒温浴管中，通入混合气 60～80个
气泡/min。标本负荷 2 g，平衡 30 min，待试验系统
稳定后，开始实验〔11-12〕。
2.4.3 微毛诃子树皮醇提液对离体肠肌的影响
等收缩波形稳定后，先描记15 min正常的肠平滑肌
收缩曲线，再逐次向浴槽中加入微毛诃子树皮醇提
液0.1 mL，等到肠张力基本无变化后，记录5 min肠
平滑肌收缩曲线，重复实验。每种药物完成后，立
即用新鲜台氏液冲洗 3次，待肠段管舒缩恢复正常
后才可进行下一次给药，无法恢复正常舒缩的肠段
弃去。见表3。
表3 微毛诃子醇提液对豚鼠离体肠肌的影响
（xˉ ± s,n = 10）
组别
微毛诃子树皮醇提液 1组
微毛诃子树皮醇提液 2组
微毛诃子树皮醇提液 3组
浓度/
（g/mL）
0.25
0.50
1.00
张力平均值/g
给药前
1.992 ± 0.360
1.982 ± 0.328
1.938 ± 0.260
给药后
1.718 ± 0.377*
1.616 ± 0.277#
1.519 ± 0.320#
注：每组分别与给药后比较*P ＞ 0.05，每组分别与给
药后比较#P＜ 0.05。
由表 3可知，当微毛诃子树皮醇提液的浓度为
0.25 g/mL时，微毛诃子醇提液对豚鼠离体肠肌具有
一定的抑制作用，但差异无统计学意义（P > 0.05），
而当微毛诃子树皮醇提液的浓度为0.5 g/mL、1 g/mL
时，微毛诃子醇提液对豚鼠离体肠肌的抑制作用明
显，且差异具有统计学意义（P＜0.05），结果表明微
毛诃子树皮醇提液对离体肠肌的蠕动具有抑制作
用，且随着浓度的增加，微毛诃子树皮醇提液对离
体肠肌的抑制作用加强。
2.5 微毛诃子树皮醇提液作用机制的探究 待肠
肌收缩稳定后，记录一次肠肌的正常运动曲线；然
后加入0.4 mL的1 g/mL的微毛诃子树皮醇提液，记
录一次肠肌的张力变化曲线；换液，然后加入0.3 mL
的 0.1 g/L的组胺，记录一次肠肌的张力变化曲线；
换液，待肠肌收缩稳定后，先加入 0.4 mL的 1 g/mL
的微毛诃子树皮醇提液，待波峰降至最低点时，立
即加入0.3 mL的0.1 g/L的组胺，重复实验。每种药
物完成后，立即用新鲜台氏液冲洗3次，待肠段管舒
缩恢复正常后才可进行下一次给药，无法恢复正常
舒缩的肠段弃去〔13〕。见表4及图1。
表4 微毛诃子醇提液对组胺诱导豚鼠离体肠肌
收缩的影响（xˉ ± s,n = 10）
组别
正常
微毛诃子树皮醇提液
组胺
微毛诃子树皮醇提液+组胺
剂量
—
1 g/mL
0.1 g/L
1 g/mL+0.1 g/L
最大张力平均值/g
1.904 ± 0.0542
1.333 ± 0.459
3.048 ± 0.117*#
2.032 ± 0.280
注：与正常组比较*P < 0.05，与微毛诃子醇提液+组胺
比较#P < 0.05。
图1 微毛诃子醇提液加组胺后对豚鼠离体肠肌的影响
由表4可知，当向正常蠕动的肠肌加入组胺后，
肠肌收缩且与正常组比较差异具有统计学意义
（P < 0.05）；先加入微毛诃子后立刻加入组胺时肠
肌收缩，与只加入组胺组相比收缩程度降低（P <
12
总第130期 第13卷李代航，朱万芸，段素英，等 微毛诃子树皮醇提取液半数致死量的测定及对肠肌的作用
0.05），说明组胺对微毛诃子树皮提取液对肠肌的抑
制作用具有一定的拮抗作用。
3 讨论
随着社会的发展，中药的无创伤性治疗和整体
性的治疗观念越来越受人们的重视，然而中药的安
全性问题一直阻碍了中药的发展。本次实验对中药
微毛诃子树皮醇提液的毒性进行了研究，根据
LD50 < 5 g/kg为大毒，5~16 g/kg为有毒，16~50 g/kg
为小毒，>50 g/kg为无毒的标准依据〔14〕，本次实验的
毛诃子的LD50为 5.69 g/kg，可见毛诃子树皮的醇提
液具有一定的毒性；另外，我们还对微毛诃子的树皮
醇提液进行了小鼠的在体和离体研究，研究的结果
均表明微毛诃子树皮的醇提液对肠肌的收缩具有一
定的抑制作用，这说明微毛诃子的树皮在缓解由于
肠肌紧张引起的腹痛等方面具有潜在的应用价值。
微毛诃子树皮的醇提液中具有许多的化合物，
微毛诃子树皮的醇提液对肠肌的收缩具有一定的
抑制作用，然而微毛诃子树皮的醇提取液具有一定
的毒性，说明在微毛诃子树皮的醇提液的化合物
中，有些成分是有毒的，有些成分是对肠肌紧张引
起的腹痛等方面的疾病具有一定治疗作用的，希望
以后研究者能利用现在的天然药物化学的技术和
方法，对微毛诃子树皮中的成分进行提取，以期发
现无毒且具有活性的物质应用于临床。
在实验的最后，我们就微毛诃子树皮是否作用
于H受体进行了机制探讨，结果我们发现组胺对微
毛诃子提取液对肠肌的抑制作用具有拮抗作用，这
说明微毛诃子的作用位点可能与H受体有关，但具
体是与H1或H2或两者均有关这就还需要更多的实
验来验证，并且微毛诃子除了与H受体外，与其它
受体是否有关这还有待科研工作者们进行进一步
的研究和探讨。
［参考文献］
〔1〕国家药典委员会.中华人民共和国药典:一部〔S〕.北京：
中国医药科技出版社，2010:173.
〔2〕刘芳，秦红飞，刘松青.诃子化学成分与药理活性研究进
展〔J〕.中国药房，2010，23（7）:670-672.
〔3〕张海龙，裴月湖，华会明.诃子化学成分及药理活性的研
究进展〔J〕.沈阳药科大学学报，2001，18（6）:452-455.
〔4〕刘玉梅，宋宝安，杨松，等.诃子化学成分与生物活性的
研究进展〔J〕.贵州大学学报：自然科学版，2007，24（2）：
209-211.
〔5〕连红，黄庆柏，赵余庆.中药诃子的化学成分与生物活性
研究进展〔J〕.亚太传统医药，2008，4（6）:46-48.
〔6〕罗光伟，陈建江.诃子的药理作用研究进展〔J〕.云南中医
中药杂志，2010，33（11）:78-80.
〔7〕庞锦江，郑天珍，张小郁，等.生炙诃子对气管平滑肌收缩
活动的影响〔J〕.中药材，2001，24（2）:120-122.
〔8〕赖泳，彭芳.药理学实验指导〔M〕.昆明:云南科技出版社，
2011：113．
〔9〕蔡小华，谢兵，粟丽.诃子树皮化学成分的预试验〔J〕.应
用化工，2008，37（10）：1129-1134.
〔10〕方春生，王成军，李辉.高河菜对动物消化道运动功能的
影响〔J〕.中国民族医药杂志，2006，27（3）:113-114.
〔11〕邹国栋，张东，高洪波，等.诃子提取液对家兔离体肠平滑
肌的影响〔J〕.中国民族医药杂志，2010，11（11）:46-48.
〔12〕吕小满，徐芳雄，彭芳.紫红獐牙菜对在体及离体肠肌的
影响〔J〕.大理学院学报，2006，5（8）:73-75.
〔13〕赖泳，张梅，李代航，等.微毛诃子树皮提取液对大鼠离
体子宫影响的研究〔J〕. 大理学院学报，2013，12（12）:
1-4.
〔14〕杜贵友，方文贤.有毒中药现代研究与合理应用〔M〕.北
京：人民卫生出版社，2003:44.
［基金项目］云南省重点产业创新工程基金资助项目（2008IF012）
［收稿日期］2014-06-13 ［修回日期］2014-07-10
［作者简介］李代航，药学专业2010级本科生.
*通信作者：赖泳，教授.
（责任编辑 李 杨）
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