全 文 ：·药物与临床·
亮叶杨桐叶乙酸乙酯部位抗炎镇痛作用的研究▲
李星宇 袁志林 兰太进 韦 韡 刘 元*
(广西壮族自治区中医药研究院，南宁市 530022)
▲基金项目:广西企业科技特派员专项项目 (桂科产
09321001)，广西区卫生厅医药科研计划项目(Z2009174)，广西
壮药质量标准(第二卷)标准研究项目(MZY2010044)
* 通讯作者
【摘要】 目的 观察亮叶杨桐叶乙酸乙酯部位( LY) 的抗炎和镇痛作用，为进一步开发亮叶杨桐叶的药用价值提供参
考。方法 以巴豆油致小鼠耳肿胀法、冰醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性亢进法和大鼠棉球肉芽肿慢性炎症法，观察 LY
的抗炎作用;以小鼠热板法、大鼠足趾机械刺痛法和大鼠尾部辐射热刺激法，观察 LY 的镇痛作用。结果 与模型组比较，
LY( 0． 42 g /kg) 能显著抑制化学刺激引起的小鼠耳肿胀( P ＜ 0． 05) 和小鼠腹腔毛细血管通透性增高( P ＜ 0． 01) ，同时能显
著抑制大鼠棉球肉芽组织增生( P ＜ 0． 01) ; 与模型组比较，LY( 0． 42 g /kg)可明显抑制热刺激( P ＜ 0． 05) 和机械刺激引起的
疼痛( P ＜ 0． 05) ，对尾部辐射热刺激引起的疼痛无明显抑制作用( P ＞ 0． 05)。结论 LY对急慢性炎症和高位中枢参与的疼
痛有良好的抑制作用。
【关键词】 亮叶杨桐叶;乙酸乙酯部位;抗炎;镇痛
【中图分类号】 Ｒ 282 【文献标识码】 A 【文章编号】 1673-7768( 2014) 04-0456-04
Study on the anti-inflammation and analgesic effect of ethyl acetate extract from adinandra nitida leaves
LI Xing-yu，YUANG Zhi-lin，LAN Tai-jin，WEI Wei，LIU Yuan
( Guangxi Institute of Chinese Medicine ＆ Pharmaceutical Science，Nanning 530022，China)
【Abstract】 Objective To study the anti-inflammatory and analgesic effect of ethylacetate extract from Adinandra Nitida
leaves( LY) ，and provide a reference for the further development of medicinal value． Method The acute inflammatory models of
the auricle swelling in mice induced by croton oil and the increase of capillary permeability in mice induced by acetic acid，and the
chronic inflammatory model of the granuloma in rat induced by cotton ball were used to evaluate the anti-inflammatory effect of LY．
The hot-plate test( 55℃ ) in mice，mechanical stimulation and radiant heat flick test in rat were used to evaluate the analgesic effect
of LY． Ｒesult Compared with model group，LY( 0． 42 g /kg) was significantly inhibited the swelling of mice auricle( P ＜ 0． 05)
and the permeability of the blood capillary in abdominal cavity of mice ( P ＜ 0． 05) ，and reduced the weight of rat cotton pellet
granuloma( P ＜ 0． 01) ． Compared with model group，LY( 0． 42 g /kg) was significantly inhibited pain reaction induced by hot-plate
( P ＜ 0． 05) and mechanical stimulation ( P ＜ 0． 05) ，but had no obvious inhibition on pain reaction induced by tail radiant heat
( P ＞ 0． 05) ． Conclusions LY has strong anti-inflammatory and analgesic activities．
【Key words】 Adinandra Nitida Leaves; Ethylacetate extract; Anti-inflammatory; Analgesia
亮叶杨桐(Adinandra nitida Merr． ex Li)系山茶科
(Theaceae)杨桐属(Adinandra)植物，主要分布于我国广
东、广西、贵州等省区，资源丰富［1］。其叶为我区常用瑶
药之一，在民间有着悠久的饮用历史，具有消炎、解毒、
止血和降压等多种功效［2］。本研究旨在观察亮叶杨桐
叶乙酸乙酯部位(LY)的抗炎和镇痛作用，为进一步开
发亮叶杨桐叶的药用价值提供参考。
1 材料与方法
1． 1 材料
1． 1． 1 受试药物 LY 干膏:由本所自行提取，亮叶杨
桐叶乙醇回流提取浓缩，乙酸乙酯萃取，浓缩干燥后得
到 LY干膏(以山茶苷 A、槲皮苷和芹菜素合计总黄酮含
量达 50% 以上);阿司匹林肠溶片，50 mg /片，批号:
091201，购自桂林南药股份有限公司;醋酸地塞米松片，
0． 75 mg /片，批号:081215，购自天津药业集团新郑股份
有限公司;盐酸曲马多片，50 mg /片，批号:09032112，购
自多多药业有限公司。以上药品均用蒸馏水配制成所
需浓度药液(LY为混悬液)供动物灌胃给药。
1． 1． 2 动物 昆明种小鼠，SPF 级;Wistar 大鼠，SPF
级，均由广西医科大学实验动物中心提供。动物许可证
号:SCXK桂 2009-0002。
1． 1． 3 主要试剂 巴豆油，本所自行提取，提取时间:
20101220，配成 2%巴豆油合剂(蒸馏水 ∶ 无水乙醇 ∶ 乙
654 Internal Medicine of China，Aug． 2014，Vol． 9，No． 4
DOI:10.16121/j.cnki.cn45-1347/r.2014.04.004
醚 ∶ 巴豆油 = 0． 5 ∶ 2 ∶ 7． 3 ∶ 0． 2)，现配现用;无水乙醇，
500 ml /瓶，批号:20101113，购自广东光华化学厂有限公
司;冰醋酸，批号:20090323，购自广东光华化学厂有限
公司;乙醚，500 ml /瓶，批号:20100308，购自国药集团化
学试 剂 有 限 公 司;依 文 思 蓝，10 g /瓶，批 号:
WC20070607，购自国药集团化学试剂有限公司。
1． 1． 4 主要实验仪器 UV-2550 型紫外可见分光光度
计，由日本岛津生产;TDL-5-A 型低速离心机，由上海安
亭科学仪器厂生产;耳肿打孔器，由原阳县振华教学仪
器厂生产;FA1004 型电子分析天平，由上海精科公司生
产;SW-CJ-2FD型洁净工作台，由苏州安泰空气技术有
限公司生产;YXQ-LS-50-SⅡ型立式压力蒸汽灭菌器，由
上海博迅实业有限医疗设备厂生产。39 型热盘痛觉测
定仪，由美国健康医疗仪器国际公司生产;2395 型机械
式疼痛刺激记录仪，由美国健康医疗仪器国际公司生
产;33 型闪尾刺激记录仪，由美国健康医疗仪器国际公
司生产。
1． 2 方法
1． 2． 1 LY抗炎作用
1． 2． 1． 1 LY 对巴豆油致小鼠耳肿胀的影响 取昆明
种雄性小鼠 30 只，随机分为 3 组，每组 10 只，包括模型
组、阿司匹林组和 LY 组。阿司匹林组和 LY 组按剂量
每日灌胃 1 次，模型组同时给予等量蒸馏水灌胃，连续
3 d。最后一次给药后 30 min，各鼠右耳用 2%巴豆油合
剂耳致炎，0． 05 ml /只，以左耳作空白对照。4 h 后将小
鼠断颈椎处死，剪下两耳，用直径 9 mm打孔器打下圆耳
片，以分析天平称取小鼠左右耳重量，以其差值作为炎
性肿胀程度。
1． 2． 1． 2 LY 对冰醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性
亢进的影响 昆明种小鼠 30 只，雌雄各半，随机分为
3 组，每组 10 只，包括模型组、阿司匹林组和 LY 组。阿
司匹林组和 LY组灌胃给药，模型组同时给予等量蒸馏
水灌胃，给药 45 min 后，各鼠依次尾静脉注射 1． 0%依
文思蓝生理盐水溶液 0． 05 ml /10 g。随即腹腔注射
0． 7%冰醋酸生理盐水溶液，0． 2 ml /只。20 min 后脱颈
椎处死，剪开腹部皮肤肌肉，用约 8 mL 生理盐水分数次
洗涤腹腔，将洗涤液收集到刻度离心管，定容至 10 mL。
以 3 000 rpm，离心 15 min，取上清液在 590 nm波长下测
定吸光度，并做标准曲线，根据回归方程求出各组小鼠
腹腔渗入的染料量。
1． 2． 1． 3 LY 对大鼠棉球肉芽肿的影响 SD 大鼠
30 只，随机分为 3 组，每组 10 只，包括模型组、醋酸地塞
米松组和 LY组。在乙醚浅麻醉无菌条件下作腹部切口
将灭菌棉球(20 mg /个)植入大鼠两侧腹股沟下，随即缝
合。从手术当日起各组灌胃给药 1 次，连续给药 8 d。
末次给药 1 h后处死大鼠，剥离并取出棉球肉牙肿组织，
比较棉球肉牙肿组织重量差异。
1． 2． 2 LY镇痛作用
1． 2． 2． 1 LY 对小鼠的镇痛作用(热板法) 设定热盘
痛觉测定仪温度为 55℃，当热板温度达到预设温度后开
始实验。选取体重在 18 ～ 22 g雌性小鼠，依次取 1 只放
于热板上，以小鼠置于热板到出现舔后足现象所需时间
作为该鼠的痛阈值，选择痛阈值在 5 s 和 30 s 之间的小
鼠作为实验小鼠。选取实验小鼠 50 只，随机分成 5 组，
每组 10 只，分别为模型组、盐酸曲马多组和 LY 高剂量
组、中剂量组、低剂量组(根据小鼠急性毒性试验结果
LY最大给药量为 6． 85 g /kg，本实验设 LY 最大剂量约
为急性毒性试验剂量的 1 /4)。给药前各组均测定痛阈
值，小鼠按实验用药分组灌胃给药，给药后 60 min、
90 min、120 min分别测定小鼠痛阈值。若 60 s 仍无反
应，将小鼠取出，其痛阈值按 60 s计算。
1． 2． 2． 2 LY对大鼠的镇痛作用(机械刺激法) 取 SD
大鼠，180 ～ 280 g，雌雄各半，随机分成 3 组，每组 10 只，
分别为模型组、盐酸曲马多组和 LY 组。分别置于测试
笼内，让大鼠保持直立状态，鼠足踩于测试笼的格栅上，
将智能机械刺痛仪的探针由格栅下方穿入，刺痛受试大
鼠的足趾底部，以大鼠抬足作为到达痛阈的指标，读取
其压力值作为给药前的基础痛阈，然后按实验用药分组
灌胃给药，并于给药后 30、60、120、180 min 测出各时间
的痛阈值，比较给药前后痛阈值的变化。
1． 2． 2． 3 LY 对大鼠的镇痛作用(辐射热刺激法) 取
SD大鼠，SPF级，180 ～ 280 g，雌雄各半，置于大鼠固定
器中，鼠尾自然下垂于智能辐射热源仪上，鼠尾尖部与
智能辐射热源仪凹槽尖端对齐。设置智能辐射热源仪
的光照强度 I = 60，以辐射热源仪开始照射鼠尾到尾部
移动或甩尾所需时间作为该鼠的痛阈值。筛选出基础
痛阈值在 4． 0 ～ 8． 0 s 的大鼠，按体重平均分成 3 组，每
组 10 只，分别为模型组、盐酸曲马多组和 LY 组。各组
灌胃给药后 30、60、120、180 min测出各时间段的痛阈均
值。测试中，若照射 12． 5 s仍不甩尾，即中断照射，痛阈
值以 12． 5 s计算。
1． 3 统计学处理 数据采用 SPSS 13． 0 统计软件处理，
计量资料采用 x ± s 表示，比较采用 t 检验分析，以
P ＜ 0． 05 为差异具有统计学意义。
2 结 果
2． 1 LY对巴豆油致小鼠耳肿胀的影响 与模型组比
较，LY(0． 42 g /kg)对巴豆油所致小鼠耳肿胀有显著抑
制作用(t = 2． 127，P = 0． 047)。见表 1。
754内 科 2014 年 08 月 第 9 卷 第 4 期
表 1 LY对巴豆油所致小鼠耳肿胀的影响 (n，x ± s)
组别 n 剂量 耳肿胀度(mg)抑制率(%)
模型组 10 － 30． 3 ± 3． 75 －
阿司匹林组 10 100 mg /kg 25． 8 ± 3． 02 14． 8
LY组 10 0． 42 g /kg 27． 2 ± 2． 68 10． 2
2． 2 LY对冰醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性亢进
的影响 依文思蓝标准曲线见表 2，以 OD 值作为横坐
标(X)，依文思蓝浓度为纵坐标(Y)，可得出标准曲线的
回归方程为 Y = 18． 903X － 0． 3168，r = 0． 999 6。见表 2。
与模型组比较，LY(0． 42 g /kg)对冰醋酸所致小鼠
腹腔 毛 细 血 管 通 透 性 亢 进 有 明 显 的 抑 制 作 用
(t＇= 6． 653，P ＜ 0． 01)。见表 3。
2． 3 LY对大鼠棉球肉芽肿的影响 与模型组比较，LY
(0． 42 g /kg)对大鼠棉球肉芽肿形成有明显的抑制作用
(t = 3． 726，P = 0． 002)。见表 4。
表 2 依文思蓝标准曲线
浓度(ug /mL) 1． 0 2． 0 4． 0 6． 0 8． 0 10． 0
OD值 1 0． 066 0． 126 0． 221 0． 332 0． 444 0． 542
OD值 2 0． 075 0． 116 0． 235 0． 334 0． 449 0． 541
表 3 LY对冰醋酸所致小鼠腹腔毛细血管
通透性亢进的影响 (x ± s，n = 10)
组别 剂量 OD值
腹腔渗透量
(ug /mL)
模型组 － 0． 41 ± 0． 04 7． 42 ± 0． 71
阿司匹林组 100 mg /kg 0． 39 ± 0． 11 7． 06 ± 1． 76
LY组 0． 42 g /kg 0． 19 ± 0． 09 3． 31 ± 1． 82
表 4 LY对大鼠棉球肉芽肿的影响 (x ± s，n = 10)
组别 剂量 肉芽肿重(g) 抑制率(%)
模型组 － 0． 47 ± 0． 14 －
醋酸地塞米松组 1． 5 mg /kg 0． 16 ± 0． 024 64． 7
LY组 0． 42 g /kg 0． 28 ± 0． 08 40． 7
2． 4 LY对小鼠的镇痛作用( 热板法) 与给药前比较，
除 LY中剂量(0． 85 g /kg)在小鼠给药后 60 min 可显著
提高其痛阈值水平(P ＜ 0． 05)外，其余各剂量在小鼠给
药后各时间段未能显著性提高痛阈值水平(P ＞ 0． 05);
与模型组比较，LY各剂量在小鼠给药后 60 min 均可显
著提高其痛阈值水平(P ＜ 0． 05)，同时低剂量组
(0． 42 g /kg)在小鼠给药后 90 min时仍可显著提高其痛
阈值水平(P ＜ 0． 05)。见表 5。
表 5 LY对小鼠的镇痛作用(热板法) (x ± s，n = 10)
组别 剂量 给药前痛阈值(s)
给药后不同时间痛阈值(s)
60 min 90 min 120 min
模型组 － 12． 08 ± 3． 42 13． 31 ± 4． 90 12． 38 ± 6． 32 12． 60 ± 5． 60
盐酸曲马多组 150 mg /kg 13． 65 ± 5． 86 41． 42 ± 15． 14△▲ 26． 22 ± 15． 14△# 18． 71 ± 5． 72#
LY高剂量组 1． 69 g /kg 13． 57 ± 5． 65 19． 92 ± 8． 45 15． 74 ± 3． 96 15． 20 ± 4． 29
LY中剂量组 0． 85 g /kg 13． 06 ± 6． 64 27． 08 ± 17． 09* # 17． 28 ± 12． 96 20． 20 ± 10． 85
LY低剂量组 0． 42 g /kg 14． 50 ± 7． 58 24． 39 ± 14． 88 28． 73 ± 20． 41▲ 27． 51 ± 18． 85
注:与给药前比较，* P ＜ 0． 05，#P ＜ 0． 01;与模型组比较，△P ＜ 0． 05，▲P ＜ 0． 01。
2． 5 LY对大鼠的镇痛作用( 机械刺激法) 与给药前
及模型组比较，LY(0． 42 g /kg)可显著提高小鼠给药后
各时间段痛阈值水平(P ＜ 0． 05)，见表 6。
表 6 LY对大鼠的镇痛作用(机械刺激法) (x ± s，n = 10)
组别 剂量 给药前痛阈值(GＲ)
给药后不同时间痛阈值(GＲ)
30 min 60 min 120 min 180 min
模型组 － 46． 0 ± 13． 9 38． 3 ± 7． 50 44． 9 ± 11． 3 41． 4 ± 61． 0 45． 6 ± 8． 40
盐酸曲马多组 150 mg /kg 43． 6 ± 12． 4 103． 0 ± 16． 0#▲ 122． 9 ± 42． 1#▲ 89． 1 ± 31． 9#▲ 96． 7 ± 26． 1#▲
LY组 0． 42 g /kg 48． 8 ± 11． 0 73． 0 ± 20． 0#▲ 64． 8 ± 22． 1＊△ 90． 1 ± 41． 4#△ 80． 9 ± 26． 0#▲
注:与给药前比较，* P ＜ 0． 05，#P ＜ 0． 01;与模型组比较，△P ＜ 0． 05，▲P ＜ 0． 01。
2． 6 LY对大鼠的镇痛作用( 辐射热刺激法) 与给药
前或模型组比较，LY 均未能提高小鼠给药后各时间段
的痛阈值水平(P ＞ 0． 05)。见表 7。盐酸曲马多组阳性
镇痛作用显著(P ＜ 0． 01)。
表 7 LY对大鼠的镇痛作用(辐射热刺激法) (x ± s，n = 10)
组别 剂量 给药前痛阈值(s)
给药后不同时间痛阈值(s)
30 min 60 min 120 min 180 min
模型组 － 5． 21 ± 0． 37 4． 77 ± 0． 68 4． 69 ± 0． 81 4． 90 ± 0． 40 4． 63 ± 0． 96
盐酸曲马多组 150 mg /kg 5． 46 ± 0． 84 9． 92 ± 3． 01* # 10． 88 ± 2． 45* # 10． 91 ± 2． 64* # 11． 09 ± 2． 30* #
LY组 0． 42 g /kg 5． 64 ± 1． 14 5． 06 ± 0． 46 5． 29 ± 0． 46 5． 09 ± 0． 62 5． 89 ± 1． 13
注:与给药前比较，* P ＜ 0． 01;与模型组比较，#P ＜ 0． 01。
854 Internal Medicine of China，Aug． 2014，Vol． 9，No． 4
3 讨 论
亮叶杨桐叶包含黄酮类、茶多酚、多糖、氨基酸及生
物碱等多种成分，是自然界植物中含黄酮类最高的植物
之一［2］。从亮叶杨桐叶中已分离得到多种黄酮类化合
物，包括芹菜素、山茶苷 A、槲皮苷和长梗冬青苷等［3］，
目前认为亮叶杨桐叶主要通过黄酮类成分发挥药理作
用［4 ～ 6］。为此，本研究以黄酮类含量大于 50%的 LY 为
受试药物，观察其抗炎镇痛作用。
由于 LY是亮叶杨酮叶的乙酸乙酯萃取物，在观察
抗炎作用前，本研究首先对其进行了急性毒性的预实
验，未能得出半数致死量(LD50)，因此前期试验中改为
对其最大给药量的测定，结果显示，在给予小鼠 1 d 内
2 次灌胃给药 6． 85 g /kg后即刻及其后 7 d内，小鼠未出
现中毒症状及死亡情况。根据小鼠最大给药量的测定
结果，并结合小鼠抗炎镇痛预试验结果，本研究设定抗
炎实验中 LY 的给药剂量为 0． 42 g /kg，结果显示 LY 能
显著抑制巴豆油引起的小鼠耳肿胀(P ＜ 0． 05)和冰醋
酸引起的小鼠腹腔毛细血管通透性增高(P ＜ 0． 05)，说
明其对化学刺激导致的早期炎症反应如组织水肿、毛细
血管通透性亢进及炎性物质渗出等有一定的抑制作用。
同时，本提取物可显著抑制大鼠棉球肉芽组织的增生
(P ＜ 0． 01)，说明其对慢性炎症有一定的抑制作用，可
有利于减少受损组织粘连及机化等病变的程度和范围。
本研究以小鼠热板法、大鼠足趾机械刺痛法和大鼠
尾部辐射热刺激法 3 种用于镇痛药筛选的经典方法评
价其镇痛作用，结果显示小鼠热板法实验中 LY 未显示
出较好的量效关系，可能是由于 LY 高(1． 69 g /kg)、中
(0． 85 g /kg)剂量药液浓度过稠，小鼠灌胃给药后药物
黏附在消化道表面不易被胃肠吸收所致，而 LY 低剂量
(0． 42 g /kg)则能在小鼠给药后 60 min和 90 min时显著
提高其痛阈值水平(P ＜ 0． 05);在大鼠足趾机械刺痛实
验中，LY(0． 42 g /kg)与给药前或模型组比较，均可显著
性提高小鼠给药后各时间段的痛阈值水平(P ＜ 0． 05)。
上述 2 个实验表明 LY(0． 42 g /kg)对高位中枢参与的疼
痛有明显的抑制作用。在大鼠尾部辐射热刺激法的实
验中，LY(0． 42 g /kg)与给药前或模型组比较，均未能提
高小鼠给药后各时间段的痛阈值水平(P ＞ 0． 05)，这表
明 LY(0． 42 g /kg)对初级脊髓反射参与的疼痛未有抑
制作用。综上所述，LY 对急慢性炎症和高位中枢参与
的疼痛有明显的抑制作用，具有进一步研究开发的价
值，同时也为进一步研究其活性成分提供了方向，但其
作用机制尚需进一步研究。
参 考 文 献
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(收稿日期:2014-04-10 修回日期:2014-06-04)
(上接第 382 页)
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