全 文 ：书第 31 卷 第 4 期
2015 年 8 月
哈 尔 滨 商 业 大 学 学 报(自然科学版)
Journal of Harbin University of Commerce (Natural Sciences Edition)
Vol． 31 No． 4
Aug． 2015
收稿日期:2014 － 04 － 04．
基金项目:国家自然科学基金(NO． 30970300)
作者简介:王宗伟(1987 －)，男，硕士，研究方向:中药资源开发与生物技术．
通讯作者:王振月(1956 －)，男，教授，博士生导师，研究方向:中药资源开发与生物技术．
大孔树脂纯化毛脉酸模乙酸乙酯部位的研究
王宗伟1，郭 美1，王宗权2，贾力维1，王振月1
(1． 黑龙江中医药大学 药学院，哈尔滨 150040;2． 河北以岭医药集团 医药研究院，石家庄 050035)
摘 要:筛选富集纯化毛脉酸模乙酸乙酯部位(白藜芦醇、白藜芦醇苷、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、
大黄酚苷)成分的最佳树脂，优化大孔树脂纯化目标成分的最佳工艺．以白藜芦醇、白藜芦醇苷、大黄
素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄酚苷的吸附率和解吸率为评价指标，筛选树脂，并优化了吸附和洗脱条
件． D101 树脂对毛脉酸模乙酸乙酯部位成分具有较好的吸附分离性能．最佳工艺条件为，毛脉酸模
乙酸乙酯部位样品溶液 1 BV，吸附流速为 2 BV·h －1，先用 2 BV水洗涤，再用 20%、50%、75%、95%
乙醇各 2． 5、5、2． 5、5 BV 进行梯度洗脱，流速 2 BV·h －1，合并 50%和 95%乙醇洗脱液，即为纯化部
位．纯化后目标成分纯度提高到 49． 85%，说明采用 D101 树脂分离纯化毛脉酸模乙酸乙酯部位成分
是可行的．
关键词:毛脉酸模;大孔树脂;富集纯化;乙酸乙酯部位
中图分类号:Ｒ284 文献标识码:A 文章编号:1672 － 0946(2015)04 － 0417 － 04
Study on ethyl acetate extract from Ｒumex gmelini Turcz purified by macroporous resin
WANG Zong-wei1，GUO Mei1，WANG Zong-quan2，JIA Li-wei1，WANG Zhen-yue1
(1． School of Pharmacy，Heilongjiang University of Chinese Medicine，Harbin 150040，China;
2． Hebei Yiling Pharmaceutical Group，Medicine Institute，Shijiazhuang 050035，China )
Abstract:To choose the optimum macroporous resin for enrichment and purification of ethyl
acetate extract from Ｒumex gmelini Turcz，the adsorption rate and desorption rate of resvera-
trol，polydatin，rheum emodin，aloe － emodin，chrysophanol and chrysophamol monoglyco-
side were used as evaluation indicators． The adsorption and elution conditions were optimized
at the same time． As a result，D101 macroporous resin was chosed for its better performance
of adsorption and separation and the best process conditions were screened out． The sample
solution of ethyl acetate was 1 BV，adsorption flow rate was 2BV·h －1，after washed by 2BV
water，using 2． 5BV 20% alcohol，5BV 50% alcohol，2． 5BV 75% alcohol and 5BV 95%
alcohol to perform the gradient elute in due order with the flow rate of 2 BV·h －1 ． The elute
of 50% alcohol and 95% alcohol were combined to get the depuration that the purity of target
compositions were raised to 49． 85% ． This paper illustrated that the D101 macroporous resin
was viable for purification ethyl acetate extract from Ｒumex gmelini Turcz．
Key words:Ｒumex gmelini Turcz;macroporous resin;enrichment and purification;ethyl
acetate extract
毛脉酸模为蓼科酸模属植物．现已从毛脉酸模
根中分离得到大黄素、大黄酚、大黄酚苷、芦荟大黄
素、白藜芦醇、白藜芦醇苷等多种成分［1 － 2］．白藜芦
醇、白藜芦醇苷具有抗肿瘤［3］、保肝、抗炎抗氧化
等多种药理作用;大黄素、大黄酚、大黄酚苷、芦荟
大黄素等蒽醌类化合物具有抗菌消炎、保肝利
胆［4］、泻下、抗癌［5］、抗病毒［6］等药理作用，课题组
前期研究表明毛脉酸模 50%乙醇提取物能明显抑
制 S180实体瘤和 H22实体瘤的生长
［7］，毛脉酸模乙
酸乙酯部位具有抗肿瘤活性，毛脉酸模中二苯乙烯
类成分对 HepG2、Hela、MCF － 7 三种肿瘤细胞的
体外生长具有抑制作用［8］，通过二苯乙烯类成分
诱导后 HepG2 细胞的 2 474 个肿瘤相关基因中，发
现有 GADD153，HPＲG等 5 个基因表达明显上调，
PＲL －1，PAI － 1 等 9 个基因明显下调，说明二苯乙
烯类成分能改变细胞周期进程、细胞增殖、细胞凋
亡、血管生成等相关基因的表达来发挥抗肿瘤活
性［9］．药效组分学研究表明单一成分不能反映毛
脉酸模功效的有效部位，对于开发新药乙酸乙酯部
位成分十分复杂，制剂体积较大，为进一步减少服
用剂量、便于携带，有必要对有效成分进行富集，制
备其有效部位．本文以白藜芦醇、白藜芦醇苷、大黄
素、大黄酚、大黄酚苷、芦荟大黄素 6 种成分作为考
察指标，从 3 种树脂中筛选出富集纯化毛脉酸模乙
酸乙酯部位的最佳树脂并优化大孔树脂纯化目标
成分的最佳工艺条件．
1 仪器、材料和试剂
1． 1 主要仪器
电热鼓风干燥箱(BGZ － 246 型，上海博讯)，
粉碎机(WND －200 型，浙江省兰溪市伟能达电器
有限公司)，超声波清洗器(KQ － 300E 型，昆山市
超声仪器有限公司)，电子天平(LT501E 型，常熟
市天量仪器有限责任公司)，分析天平(AL204，梅
特勒 －托利多仪器有限公司)，恒温水浴锅(AH －
S6 型，江苏省金坛市医疗仪器厂)，高效液相色谱
仪(waters600)，waters2487 检测器，Waters 717plus
Autosampler，旋转蒸发仪(Ｒ －210 型，BUCHI)等．
1． 2 主要材料与试剂
毛脉酸模根 2012 年采自于黑龙江中医药大学
药用植物园，经黑龙江中医药大学中药资源与开发
教研室主任王振月教授鉴定为毛脉酸模的根，将该
药材用粉碎机粉碎后备用． 正丁醇(AＲ)沈阳市化
学试剂厂，大孔树脂 D101、AB －8、X －5(天津市汇
达化工有限公司)，石油醚(AＲ)天津市富宇精细
化工有限公系，乙酸乙酯(AＲ)天津市富宇精细化
工有限公系，无水乙醇(AＲ)天津永大化学试剂有
限公司．白藜芦醇对照品、白藜芦醇苷对照品、大黄
素对照品、大黄酚对照品、大黄酚苷对照品、芦荟大
黄素对照品(中国科学院成都生物研究所)等．
2 方法与结果
2． 1 6 种成分测定
2． 1． 1 色谱条件
色谱柱为 Gemini C18 5 μm 110A (250 × 4． 6
mm);流动相为色谱甲醇 － 0． 1%磷酸水 50 min，
流速 1． 0 mL /min;检侧波长为 303 nm(用于测定白
藜芦醇和白藜芦醇苷)和 254 nm(用于测定大黄
素、大黄酚、大黄酚苷、芦荟大黄素)，进样量 10
μL．
2． 1． 2 标准曲线的制备
分别精密吸取对照品溶液(白藜芦醇 0． 068 g /
L、白藜芦醇苷 0． 090 g /L、大黄素 0． 110 g /L、大黄
酚 0． 101 g /L、大黄酚苷 0． 198 g /L、芦荟大黄素
0． 105 gL)2、5、10、15、20 μL 进样测定，分别以白
藜芦醇、白藜芦醇苷、大黄素、大黄酚、大黄酚苷、芦
荟大黄素的进样量(g)为横坐标，峰面积积分值为
纵坐标绘制标准曲线． 回归方程为白藜芦醇 Y =
2 126 872X － 4 190，r = 0． 999 9(n = 5);白藜芦醇
苷 Y = 1 837 899X － 1 732 369，r = 0． 999 8(n = 5);
大黄素 Y = 1 289 995X － 137 050，r = 0． 999 8(n =
5);大黄酚 Y = 1 678 624X － 218 861，r = 0． 999 9(n
= 5);大黄酚苷 Y = 782 251X － 200 028，r = 0． 999 9
(n = 5);芦荟大黄素 Y = 1 629 439X － 14 062，r =
0． 999 9(n = 5)结果表明:白藜芦醇、白藜芦醇苷和
大黄素、大黄酚、大黄酚苷、芦荟大黄素进样质量分
别在 0． 136 ～ 1． 360、0． 180 ～ 1． 800、0． 220 ～ 2． 200、
0． 202 ～ 2． 020、0． 396 ～ 3． 960、0． 210 ～ 2． 100 μg 与
峰面积积分值呈良好的线性关系．
2． 2 样品溶液的制备
取毛脉酸模药材干燥根，粉碎后加入 8 倍量的
50%乙醇，加热回流提取 3 次(时间为 3、2、1 h)，
趁热滤过，合并滤液，蒸干并研成粉末，取 50%乙
醇提取物粉末，加入 60 倍量蒸馏水溶解，依次用石
油醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇萃取，得毛脉酸模乙
酸乙酯部位．取乙酸乙酯部位粉末适量加少量乙醇
助溶并用水稀释到适宜浓度，备用．
2． 3 树脂的筛选
分别取处理后的 D101、AB － 8、X － 5 树脂各
10 g置 250 mL量瓶中，加入取供试品溶液(测定
·814· 哈 尔 滨 商 业 大 学 学 报 (自 然 科 学 版 ) 第 31 卷
白藜芦醇、白藜芦醇苷、大黄素、大黄酚、大黄酚苷、
芦荟大黄素的质量浓度分别为 2． 15、1． 33、1． 32、
2． 99、0． 95、1． 55 mg /mL)各 100 mL．振摇，放置 24
h，将吸附后树脂过滤，滤液定容，用 HPLC 法测定
滤液中各成分的含量，计算树脂吸附溶液中各成分
的吸附量;将吸附后的树脂装入树脂柱中，将吸附
的成分用 95%乙醇洗脱至洗脱液近无色，定容，测
定各成分的解吸量，计算解吸率．
表 1 3 种树脂对 6 种成分的吸附性能
树脂
吸附量 /(mg·g － 1)
A B C D E F
AB － 8 18． 67 9． 59 8． 65 17． 59 6． 38 4． 82
X － 5 12． 36 5． 68 12． 03 24． 35 6． 85 12． 58
D101 19． 25 10． 36 11． 24 25． 34 7． 58 13． 67
注:A －白藜芦醇;B －白藜芦醇苷;C －大黄素;D －大黄酚;E
－大黄酚苷;F －芦荟大黄素 (下同)
表 2 3 种树脂对 6 种成分的解析性能
树脂
解析率
A B C D E F
AB － 8 77． 5 79． 2 62． 3 72． 5 74． 6 60． 8
X － 5 59． 6 60． 4 86． 2 88． 1 81． 5 79． 4
D101 79． 6 87． 5 85． 4 89． 2 80． 5 84． 1
由表 1、2 可以看出，综合考虑以上 3 中大孔树
脂的吸附和解析性能，选择 D101 富集纯化毛脉酸
模乙酸乙酯部位(白藜芦醇、白藜芦醇苷、大黄素、
大黄酚、大黄酚苷、芦荟大黄素)的含量．
2． 4 动态吸附 －洗脱
2． 4． 1 最大上样量的考察
取经预处理的 D101 型湿树脂 20 mL，湿法装
柱，取上柱液(测得白藜芦醇、白藜芦醇苷、大黄
素、大黄酚、大黄酚苷、芦荟大黄素的质量浓度分别
为 2． 12、1． 31、1． 28、2． 89、0． 91、1． 52 mg /mL)以 2
BV·h －1的流速上样，按柱体积(每份 20 mL)收集
流出液，依次标号，测定其中流出液(白藜芦醇、白
藜芦醇苷、大黄素、大黄酚、大黄酚苷、芦荟大黄
素)的量，再绘制泄漏曲线．见图 1.
图 1 6 种成分的泄漏曲线
由结果可知，在第 2 份时已有成分达到泄漏
点，综合考虑(白藜芦醇、白藜芦醇苷、大黄素、大
黄酚、大黄酚苷、芦荟大黄素)的泄露点，所以确定
最大上样量为 1 BV，即 20 mL．
2． 4． 2 上样速率考察
取经预处理的 D101 型湿树脂 20 mL，湿法装
柱，选择流速分别为 1、2、3 BV·h －1不同流速上样
对树脂吸附量的影响． 结果表明，在 3 BV·h －1流
速时，会使提早泄漏;流速 1 BV·h －1时总上柱量
并没有很明显的提高，考虑到工作效率，选择 2 BV
·h －1进行上样．
2． 4． 3 洗脱剂洗脱体积分数的考察
取经预处理的 D101 型湿树脂 20 mL，湿法装
柱，取上柱液 20 mL 以 2 BV·h －1的流速上样，先
用 2BV 的水、10% 乙醇、20%乙醇洗脱后，再分别
用 6 BV 的 10%、30%、50%、75%、95%乙醇以 2
BV·h －1的速度洗脱，收集洗脱液，测定其中白藜
芦醇、白藜芦醇苷、大黄素、大黄酚、大黄酚苷、芦荟
大黄素的量，计算洗脱率．
表 3 洗脱液体积分数对动态洗脱性能的影响
乙醇体积分数
%
洗脱剂
BV
洗脱率 /%
白藜芦醇 白藜芦醇苷 大黄素 大黄酚 大黄酚苷 芦荟大黄素
0 2 － － － － － －
10 2 － － － － － －
20 2 － 0． 31 － － － －
30 6 0． 25 45． 35 － － － －
50 6 41． 43 37． 28 0． 32 0． 11 43． 56 30． 51
75 6 － － 0． 05 0． 08 0． 54 3． 25
95 6 － － 71． 34 68． 35 25． 32 23． 65
·914·第 4 期 王宗伟，等:大孔树脂纯化毛脉酸模乙酸乙酯部位的研究
由表 3 可知，各有效成分主要集中在 30%、
50%、95%乙醇洗脱液中．将水、10%、20%、75%乙
醇洗脱液回收溶剂后称重均有一定质量，说明有杂
质被洗脱下来．因此选择水、20%、50%、75%、95%
乙醇进行洗脱，合并 50%、95%乙醇洗脱液为纯化
部分．
2． 4． 4 洗脱溶剂体积的考察
取经预处理的 AB －8 型湿树脂 20 mL，湿法装
柱，取上柱液 20 mL 以 2 BV·h －1的流速上样，先
用 3 BV 的水洗脱后，用 20%乙醇洗脱考察，至杂
志质量无变化后，再用 50%乙醇洗脱，分部收集洗
脱液(每份 20 mL)，再用 75%乙醇，至杂志质量无
变化，再用 95%乙醇洗脱，分部收集洗脱液(每份
20 mL)，分别以 50%、95%乙醇洗脱液的各成分质
量浓度为考察指标，绘制洗脱曲线．
结果表明 20%、75%洗脱液体积为 2． 5 BV 时
杂志质量无变化，由图 2、3 表明:当洗脱剂用量为
5 BV时 50%、95%目标成分基本洗脱完成;洗脱液
用量为 20%、50%、75%、95%乙醇各 2． 5、5、2． 5、5
BV进行梯度洗脱．
图 2 50%洗脱液的洗脱曲线
图 3 95%洗脱液的洗脱曲线
2． 4． 5 洗脱流速的考察
按上述吸附条件进行动态吸附后，先用 3 BV
水洗涤，再用 20%、50%、75%、95%乙醇各 2． 5、5、
2． 5、5 BV进行梯度洗脱，分别以 1、2、3 BV·h －1的
流速进行洗脱，测定并计算 50%和 95%乙醇洗脱
液中各成分的洗脱率． 结合表 4、5 综合考虑，流速
在 2 BV·h －1，洗脱效率最佳．
表 4 3 种流速对 50%乙醇中 6 种成分洗脱率的影响
洗脱率
/%
50%乙醇洗脱液
1 BV·h －1 2 BV·h －1 3 BV·h －1
白藜芦醇 41． 25 42． 15 40． 86
白藜芦醇苷 68． 58 79． 67 64． 26
大黄素 － － －
大黄酚 － － －
芦荟大黄素 25． 26 26． 24 25． 97
大黄酚苷 32． 24 34． 52 34． 68
表 5 3 种流速对 95%乙醇中 6 种成分洗脱率的影响
洗脱率
/%
95%乙醇洗脱液
1 BV·h －1 2 BV·h －1 3 BV·h －1
白藜芦醇 － － －
白藜芦醇苷 － － －
大黄素 68． 64 69． 58 70． 24
大黄酚 70． 18 71． 24 73． 88
芦荟大黄素 24． 38 26． 57 27． 03
大黄酚苷 33． 24 34． 74 33． 82
2． 5 大孔树脂纯化结果
取 3 份样品溶液，按选择的 D101 大孔树脂最
佳纯化条件，上样，洗脱，洗脱液浓缩，结晶，过滤，
真空干燥得到富集后产物，产物的得率为36． 02%，
产品中白藜芦醇、白藜芦醇苷、大黄素、大黄酚、大
黄酚苷、芦荟大黄素的量从 25． 24% 提高到
49． 85% ．
3 结 语
本实验选择 3 种大孔吸附树脂，考察其对白藜
芦醇、白藜芦醇苷、大黄素、大黄酚、大黄酚苷、芦荟
大黄素的吸附率和解吸率，最终选择 D101 大孔吸
附树脂纯化毛脉酸模乙酸乙酯部位的成分富集．提
取工艺为:样品溶液最大上样量为 1 BV，先用 2 BV
水洗涤，再用 20%，50%，75%，95%乙醇各 2． 5、5、
2． 5、5 BV 进行梯度洗脱，流速 2 BV·h －1，合并
50%和 95%乙醇洗脱液，即为纯化的总有效部位，
经 D101 树脂处理后，毛脉酸模乙酸乙酯部位的质
量降低为处理前的 36． 02%，总有效成分(白藜芦
醇、白藜芦醇苷、大黄素、大黄酚、大黄酚苷、芦荟大
黄素)的量从 25． 24%提高到 49． 85%，纯度提高了
1． 98 倍．
(下转 425 页)
·024· 哈 尔 滨 商 业 大 学 学 报 (自 然 科 学 版 ) 第 31 卷
K15M比 HPMC K4M 的粘度较适合，释放度较小，
选择 HPMC K4M为亲水凝胶骨架材料． 雅克宜是
水性丙烯酸树脂，具完全配方包衣系统的优点且很
容易配制，能在 30 min内溶于水，并在胃内的常态
及高胃酸 pH 环境中提供肠溶保护． 以水作为溶
剂，无毒害、成膜迅速、均匀、光滑、包衣效果好，综
合考察决定以雅克宜作为包衣材料．在肠溶包衣试
验中，进风温度对包衣质量的影响相对较大，温度
过高，易使包衣液迅速干燥，不易形成连续均匀的
膜;温度过低时，易使干燥太慢，导致粘连及气泡现
象，从而影响包衣外观及质量．
未经包衣处理的槐果碱缓释片芯，在释放度实
验的前 2 h以人工胃液为释放介质，而后的 12 h均
以脱气蒸馏水为释放介质的条件下进行释放度实
验，结果 14 h 累积释放度仅是包衣缓释片累计释
放度的 1 倍，为了使其释放缓慢所以需要对制备的
缓释片芯进行包衣处理．
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·524·第 4 期 商立新，等:槐果碱缓释片的制备及工艺优选