全 文 ：生 物 灾 害 科 学  2013,  36(3):  284­287                                                                http://xuebao.jxau.edu.cn 
Biological Disaster Science, Vol. 36, No. 3, 2013                                                                        swzhkx@163.com 
收稿日期：2013­08­01 
作者简介：赵旭东，男，工程师，硕士，主要从事食品质量检验工作，E­mail: zhaoxudong79@163.com。 
DOI：10.3969/j.issn.2095­3704.2013.03.012 
泰国榴莲上棕榈疫霉的分离和鉴定
赵旭东 1 ，张慧丽 2 
（1. 临沂市产品质量监督检验所，山东 临沂 276000；2. 宁波出入境检验检疫局，浙江 宁波  315012）
摘要：在对来自泰国的榴莲检验中分离到 1 株引起榴莲果皮和果肉变色、软腐的病原真菌。通过形态鉴定和核糖
体 ITS区 DNA序列测定以及系统发育分析，最终将该病菌鉴定为棕榈疫霉(Phytophthora palmivora)。
关键词：榴莲；棕榈疫霉；分离；鉴定
中图分类号：S667.9  文献标志码：A  文章编号：2095­3704（2013）03­0284­04 
Isolation and Identification of Phytophthora palmivora 
from Imported Thailand Durian 
ZHAO Xu­dong 1 , ZHANGHui­li 2 
(1. Linyi Institute of Product Quality Supervision & Inspection, Linyi 276000, China; 
2. Exit­Entry Inspection and Quarantine Bureau of Ningbo, Ningbo 315012, China) 
Abstract: The  pathogenic  fungus was  isolated  from  imported Thialand Durian, which  could infect Durian 
fruit and made the fruit black and rot. According to the morphological characteristics and the neighbor­joining tree 
based on ITS sequence analysis, the isolated strain was finally identified as Phytophthora palmivora. 
Key words: Durian; Phytophthora palmivora; isolation; identification 
棕榈疫霉(Phytophthora  palmivora)是一种寄主
范围十分广泛的病原真菌， 能侵染包括果树、 林木、
花卉等在内的 138 种植物 [1] ， 引起番木瓜茎基腐病、
柑桔根腐病、菠萝心腐病、番木瓜疫病、可可黑荚
病 [1­6] 。在引进种子、苗木检疫中，棕榈疫霉往往被
列为禁止携带的有害生物。
本文通过形态特征的观察和分子生物学方法对
分离到的菌株进行了鉴定， 现将鉴定结果报道如下： 
1  材料和方法 
1.1  供试材料
送检的进口泰国榴莲。 
1.2  病原菌的分离
对榴莲样品进行检查时，发现榴莲果实果皮上
有褐色斑点，剖检后发现里面果肉变色、软腐，用
灭菌的解剖刀切取内果皮上病健交界处的组织，约 
5  mm×5  mm，置于 PDA平板上，25℃培养，每天
观察，待长出菌落后挑取边缘菌丝纯化。菌株编号
为 15520。 
1.3  形态学鉴定
观察病原菌在 PDA平板上的菌落形态， 并在显
微镜下观察病原菌的菌丝和孢子囊形态， 测量大小。 
1.4  分子生物学鉴定 
1.4.1  病原菌总 DNA 的提取 收集分离培养到的
菌丝，在 King Fisher mL核酸自动化提取仪上使用
2013 年第 3期 赵旭东等：泰国榴莲上棕榈疫霉的分离和鉴定 ·285· 
TANBead Plant DNA Auto Kit 提取病原菌总 DNA。 
1.4.2  ITS 区 PCR 扩增 用通用引物 ITS1/ITS4 扩
增总DNA， 序列为 ITS1： 5＇ ­TCCGTAGGTGAACCT 
GCGG­3＇ ， ITS4： 5＇ ­TCCTCCGCTTATTGATATGC 
­3＇ 。引物由英潍捷基（上海）贸易有限公司合成。 
50 μL PCR 反应体系 （各试剂的终浓度）： 1.0×buffer、 
1.5  mmol/L  MgCl2、0.2  mmol/L  dNTP、引物各 
0.2 µmol，1.25 U Taq 聚合酶、模板 DNA 5 µL、用 
ddH2O 使终体积达到  50  μL。使用 GeneAmp  PCR 
System 9700 PCR 仪（ABI公司）进行 PCR 反应。
循环条件： 94℃预变性 3 min， 94 ℃变性 30 s， 55℃
退火 30 s， 72℃延伸 1.5 min， 30 次循环； 最后 72℃
延伸 10 min。 反应终止后， 取 PCR 产物 5 μL， 10 g/L 
琼脂糖凝胶电泳检测稳定电压  10  V/cm，电泳 
30  min，电泳结束后用 EB 染色 10  min，凝胶成像
仪分析结果。 
1.4.3  序列测定和系统发育分析  PCR  产物的纯
化和测序由上海英潍捷基生物技术有限公司完成。
将所得序列与 GenBank 中核酸数据进行 BLAST 分
析，用 ClustalX1.8.3 软件聚类分析后，利用 MEGA 
5.03  软件选用  Kimura2­parameter  距离模型进行 
Neighbor­joining分析生成系统发育树，发育树用自
展（Bootstrap）分析法进行检验，共循环 1 000次。 
2  结果与分析 
2.1  病害症状
初期榴莲果皮表面有棕色斑点，之后棕色病斑
迅速扩展，连成一片，表面还会有白色菌丝长出。
剖开发病处果皮， 病部果皮和果肉变色， 略带粉色，
散发着酒精味。 
2.2  病原菌形态特征
从内果皮上直接进行病原菌的分离，很容易就
可以获得纯的菌株。 菌株在 PDA上生长缓慢， 菌落
圆形，形态均匀，白色，气生菌丝中等旺盛。厚垣
孢子，球形直径 36.5 μm、顶生或间生，可大量产生。
孢子囊梨形或卵形，少数椭圆形，大小(42~71)  μm 
×(32~39)  μm孢子囊乳突明显，高 4.1  μm，孢子囊
易脱落，具短柄，柄长 5.1 μm。 
2.3  序列测定和系统发育分析
通用引物  ITS1/ITS4 扩增产物经过纯化、测序
后得到的序列长度为 1 209 bp。序列与 GenBank中
核酸数据进行 BLAST分析后，从中选取 30 株不同 
a、外部症状，b、内部症状，c、菌落形态，d、孢子形态
图 1  病害症状及培养物形态 
a  b 
d c
·286· 生 物 灾 害 科 学 第 36卷第 3期
种类的疫霉，以 Pythium catenulatum 作为外群，利
用 MEGA 5.03 软件分析生成系统发育树见图 2，从
图 2 中可以看出，15520与棕榈疫霉（Phytophthora 
palmivora） DQ182748， HQ23479， FJ801918， 
GU259469 处于同一分支，其亲缘关系最近。 
3  小结与讨论
综合病原菌的形态特征与 ITS区PCR扩增和序
列测定的结果，将该病菌鉴定为棕榈疫霉（P. 
palmivora）。该病菌随着果实进行传播，病菌的存
活率高， 深圳市 2009 年从泰国榴莲上截获该有害生
物 [7] ，并且由于植物产品调运频繁，果皮随意丢弃，
很容易造成病菌的扩散，加之该病菌寄主广泛，一
旦定植，就会造成严重的危害。新西兰和澳大利亚
曾分别对泰国榴莲进行风险评估，新西兰将榴莲上
的棕榈疫霉列为控制性有害生物，澳大利亚把榴莲
上的棕榈疫霉视为有风险的潜在有害生物 [8­9] 。 在我
国，棕榈疫霉虽然未列入检疫性有害生物名录，但
在引进种子、苗木检疫中，棕榈疫霉往往被列为禁
止携带的有害生物。李今中等 [10] 对台湾进境水果有
害生物风险分析中将莲雾、木瓜、椰子上的棕榈疫霉
列为高风险的有害生物。因此应当加强水果上  P. 
palmivora的检疫，以保护我国农林业生产的安全。
参考文献： 
[1] Chee K H. Host  of Phytophthora palmivora[J].  Rev Appl 
Mycol, 1969, 48: 337­344. 
图 2 系统发育树状图
2013 年第 3期 赵旭东等：泰国榴莲上棕榈疫霉的分离和鉴定 ·287· 
[2]  李永忠, 杨媚, 周而勋,  等. 番木瓜茎基腐病初步研究 
[J]. 广东农业科学, 2007(12): 60­61. 
[3]  张镜,  黄志远,  欧阳秩.  柑桔根腐病病原真菌鉴定[J]. 
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[7]  程颖慧, 王颖, 章桂明. 进口泰国榴莲上棕榈疫霉的分
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from Thailand[S]. 2007. 
[9]  AQIS.  Final  import  risk  analysis  on  the  importation 
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[10] 李今中, 张晓燕, 陈艳. 台湾进境水果有害生物风险分
析研究[J]. 中国农学通报, 2009, 25(22): 228­235. 
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全国种群生态与全球变化领域专家戈峰研究员回母校作报告 
2013 年 10 月 17 日，我校 80 级校友、我国种群生态与全球变化领域专家、中国科学院动物研究所农
业虫害鼠害综合治理研究国家重点实验室主任戈峰研究员应邀回母校作题为“动物对全球气候变化的响
应”的学术报告。
戈峰研究员介绍了全球气候变化给地球带来的显著后果，阐述了动物对全球气候变暖的响应特征，重
点就昆虫对大气 CO2浓度升高的响应作了详尽阐述，预示全球变暖将导致未来害虫发生格局复杂多变，使
有害生物综合治理工作面临更大挑战。