全 文 ：安 徽 化 工
ANHUI CHEMICAL INDUSTRY
第 36卷，第 2期
2010年 4月
Vol．36，No．2
Apr.2010
地锦草为大戟科植物地锦（Euphorbia humifusa
willd）或班地锦（Euphorbia～macilatal）干燥的全草[1]，具
有清热解毒、利湿退黄、活血止血的功效，目前临床多用
于治疗菌痢、肠炎、病毒性肝炎等[2]。药理研究证实，槲皮
素、山柰素等黄酮类化合物是地锦草抗菌、止血、抗氧化
的主要活性成分[3，4]。有关地锦草中总黄酮含量测定方法
的报道不多，主要是采用以芦丁为对照的经典
NaNO2-Al （NO3）3-NaOH 比色法[5，6]。本文通过对
NaNO2-Al（NO3）3-NaOH 比色法、直接扫描法和以槲皮
素为对照的A13+络合法[7，8]三种方法进行比较，探讨了
地锦草总黄酮含量测定方法的可行性，为地锦草生药及
成药中总黄酮的含量测定提供了依据。
1 实验仪器和药品
UV-240 型紫外 - 可见分光光度计（日本岛津公
司）；BP210S型电子天平（德国Sartorius公司）；AD-2自
动电子天平（美国 PE 公司）；800 型离心沉淀器（220
伏，4000转/分，上海手术器械厂）。
芦丁对照品（中国药品生物制品检定所，批号:
0080-9705）；槲皮素对照品（中国药品生物制品检定所，
批号:100081-200406）；地锦草（分别购自合肥和义堂中
药饮片有限责任公司、安徽中医学院国医堂、安徽中医
学院第一附属医院药房、省立药房）；聚酰胺（14~30目，
中国人民解放军八三三零五部队701厂），所用试剂均
为分析纯。
2 方法与结果
2.1 测定方法的比较
2.1.1 对照品溶液的制备
精密称取120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品、槲
皮素对照品，分别加入甲醇配成0.2mg/mL、0.15mg/mL
的溶液，作为对照品溶液。
样品溶液的制备:精密称取1g地锦草粗粉，加入
100mL70%乙醇加热回流1.5h，提取2次，合并提取液，
减压回收乙醇，水液离心（2500 r/min，15 min），取上清
液，加石油醚（60~90℃，1∶1）脱脂3次，每次25mL，弃
去石油醚液，水液用水饱和正丁醇（1∶1）萃取5次，每
次 25 mL，合并正丁醇液，置水浴上蒸干，残渣加适量
50%乙醇溶解并上聚酰胺柱（2g，湿法装柱，内径2cm）。
以40mL水洗脱，弃去洗脱液，继用100mL95%乙醇洗
脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解并定容至50mL
量瓶中，作为样品溶液。
2.1.2 NaNO2-Al（NO3）3-NaOH法[5，6]
取芦丁对照品溶液和样品溶液各3mL，分别置25
mL量瓶中，各加水至6mL，加5％亚硝酸钠溶液1.0
mL，使混匀，放置6min，加10％硝酸铝溶液1.0mL，摇
匀，放置6min，加10％氢氧化钠溶液10mL，再加水至
刻度 摇匀，放置15min，以试剂空白为参比，在380～
700nm范围扫描。结果表明，芦丁对照品溶液在500nm
处有最大吸收，而样品溶液在此范围内无最大吸收。说
明以芦丁为对照品显色法测定地锦草总黄酮的专属性
较差，结果不可靠，见图1。
2.1.3 直接扫描法
直接取芦丁对照品溶液、槲皮素对照品溶液和样品
溶液适量，以甲醇空白为参比，分别在200～500nm范
围扫描。结果显示芦丁对照品溶液在255nm和356nm
摘要：目的：建立地锦草中总黄酮含量测定方法。方法：样品制备采用70%乙醇加热回流提取地锦草药材中黄酮类成分，再以溶剂萃取、
柱色谱法纯化得到总黄酮粗品；以槲皮素为对照，加Al（NO3）3形成铝络合物，根据紫外分光光度法测定总黄酮含量。结果：对照品在1.
5～12μg/mL范围内线性关系良好，回归方程为：A=83.875C-0.0026（r=0.9999），重现性RSD为1.3%，精密度RSD为0.8%，平均回收率
为99.6%。结论：该方法操作简便，结果准确，重复性好，为地锦草中总黄酮和黄酮类化合物的含量测定提供了一种切实可行的方法。
关键词：地锦草；总黄酮；含量测定；槲皮素；紫外分光光度法
中图分类号：O657.32文献标识码：A 文章编号：1008-553X（2010）02-0061-03
地锦草中黄酮类化合物含量测定方法的研究
王晓华，王超群
（安徽省医学科学研究院，安徽 合肥 230061）
收稿日期：2010-01-20
作者简介：王晓华（1954-），女，1982年毕业于安徽大学化学系，研究员，主要从事天然药物及分析方法的研究工作，0551-2823664，13856077399，
1210wxh@sina.com。
·分析测试·
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总第 164期 2010年第 2期（第 36卷） 安 徽 化 工
处有最大吸收，槲皮素对照品溶液在258nm和430nm
处有最大吸收，样品溶液在280nm处有最大吸收，三者
最大吸收波长不一致，见图2。
2.1.4 Al（NO3）3显色法[7，8]
精密吸取一定量的槲皮素对照品溶液和样品溶液，
分别置于25mL量瓶中，加10%Al（NO3）3溶液4mL，用
水稀释至刻度，摇匀，放置10min后，以试剂空白为参
比，分别在230～500nm范围扫描。结果显示槲皮素对
照品溶液与样品溶液在波长269nm处都有最大吸收，
见图3。
通过以上三种方法比较，Al（NO3）3显色法具有操作
简单，灵敏度较高，对应性好，试剂用量少等优点，因此
我们对Al（NO3）3显色法进行了方法学考查和地锦草中
总黄酮含量的测定。
2.2 方法学考查
2.2.1 标准曲线及线性范围
精密称取120℃减压干燥至恒重的槲皮素对照品，
加入甲醇配成0.15mg/mL的溶液，作为对照品溶液。精
密吸取槲皮素对照品溶液 0.25 mL、0.5 mL、1.0 mL、1.5
mL、2mL分别置于25mL量瓶中，加入10%Al（NO3）3溶
液4mL，用水稀释至刻度，摇匀，放置10min后，以试剂
空白为参比，于269nm处测定吸光度。以浓度（C）与吸
光度（A）进行线性回归，得回归方程A=83.875C-0.0026
（r=0.9999），槲皮素在1.5～12μg/mL浓度范围内线性
关系良好。
2.2.2 精密度试验
取同一样品溶液于269nm处测定吸收值（A）5次，
结果RSD为0.8%。
2.2.3 稳定性试验
精密吸取样品溶液 1.0mL，依法测定，在 0 min、30
min、60min、120min、180min、300min分别测定其吸光
度，结果在300min内，吸光度RSD为0.95%。说明在
300min内稳定，满足测定要求。
2.2.4 重现性试验
精密称取同批样品5份，依法测定，平均含量为
1.16%，RSD为1.3%，表明重现性良好。
2.2.5 回收率试验
精密称取已知含量的地锦草药材5份，分别精密加
入槲皮素对照品适量，各份均按“样品溶液的制备”方法
提取并依法测定总黄酮含量，平均回收率99.6%，RSD
为1.7%。
2.3 样品测定
对4批不同来源的地锦草，按2.1.1项制备样品溶
液，进行了总黄酮的含量测定，结果见表1。
3 结果与讨论
（1）地锦草的化学成分比较复杂，如直接用乙醇提
取后测定总黄酮含量会受到其它成分的干扰，测定结果
不准确。我们通过先用70%乙醇粗提取，再用有机溶剂
萃取，经过聚酰胺柱层析分离纯化得到总黄酮粗品，然
后再用紫外分光光度法测定总黄酮含量，干扰较少。
（2）郭亚健等[9]选用多种黄酮类化合物，采用
NaNO2-Al（NO3）3-NaOH试剂反应后测定 400～700 nm
吸收曲线，结果表明，黄芩苷、山奈酚、黄芩素、槲皮素、
图1 NaNO2-Al（NO3）3-NaOH显色法扫描图
1.芦丁对照品溶液 2.样品溶液
图2 直接扫描图
1.芦丁对照品溶液2.槲皮素对照品溶液3.样品溶液
图3 Al（NO3）3显色法扫描图
1.样品溶液2.槲皮素对照品溶液
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Rearch on Quantitative Determination of Total Flavonoids from Herba Euphorbiae Humifusae
WANG Xiao-hua，WANG Chao-qun
（AnhuiAcademyofMedicalandScience，Hefei230061，China）
Abstract: Objective:To establish method of quantitative determination of total flavonoids from herba euphorbiae
humifusae. Method: The impure total flavonoids was extracted from herba euphorbiae humifusae using 70% C2H5OH
and was purified by extraction and chromatographic column. The content of total flavonoids was determined by UV
spectrophotomatry by comparing with quercetin complex with Al（NO3）3 . Results: By the research of the methodology
inspection:Comparion showed a good linear relationship at the range of 1.5~12 μg/mL，regression equation was A=
83.875C－0.0026，r=0.9999． The RSD of reproduction quality was 1.3 %. The RSD of accuracy was 0.8 % and the
average recovery of the added sample was 99.6%. Conclusion: The method was simple and accurate.
Key words：Herba Euphorbiae Humifusae；total flavonoids；quantitative determination；Quercetin；UV spectrophotomatry
NO. 药材来源 地锦草中总黄酮含量（%） 平均含量（%）
1 合肥和义堂中药饮片有限责任公司
1.20
1.17
1.13
2 安徽中医学院国医堂
2.36
2.38
2.40
3 安徽中医学院第一附属医院药房
1.86
1.85
1.84
4 省立药房
0.73
0.75
0.76
表1 样品测定结果
橙皮苷等一些黄酮类物质在500nm左右无最大吸收或
吸收很弱，原因是此显色原理发生在黄酮醇类成分B环
的3，4邻位二酚羟基部位，B环不具备3，4邻位二酚
羟基的黄酮醇类成分，加入NaNO2-Al（NO3）3-NaOH试
剂时不显红色，在500nm左右无最大吸收。作者也采用
NaNO2-Al（NO3）3-NaOH 比色法，对地锦草药材进行总
黄酮的含量测定，结果未见样品溶液在500nm左右与
芦丁对照品溶液有相似吸收峰。可能是由于地锦草总黄
酮中主要含有槲皮素、山奈酚等黄酮类成分造成的。显
然用NaNO2-Al（NO3）3-NaOH比色法测定地锦草中总黄
酮的含量是不妥的。
（3）本地锦草中总黄酮的测定方法，采用的络合试
剂为10%Al（NO3）3溶液，以槲皮素和样品溶液的铝络合
物测定液的共有最大吸收波长269nm为检测波长进行
定量分析，该测定方法简便、准确、对应性好，为控制地
锦草的内在质量提供了依据。
参考文献
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王晓华，等：地锦草中黄酮类化合物含量测定方法的研究 63