全 文 ：·药品检验 ·
HPLC法测定地锦草中芦丁的含量
吕凤莲 ,宋韶锦 ,方彬
(威海市药品检验所 , 山东 威海 264200)
摘要:目的　建立高效液相色谱法测定地锦草中芦丁的含量方法。方法　采用高效液相色谱法 , 以 Agilent Tc-C18
PN518925-902(5μm , 4.6×250mm)为色谱柱 ,甲醇-1%冰醋酸(35∶65)为流动相 , 流速:1mL ·min -1 , 检测波长为 257nm ,
柱温:35℃。结果　芦丁进样量在 0.019 ～ 0.38μg 范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系 , r =0.9999 , 平均回收率为
98.73%, RSD (n =6)为 1.05%。结论　该方法简便准确 ,重现性好 ,可以作为地锦草中芦丁的含量测定方法。
关键词:地锦草　芦丁　高效液相色谱法　含量测定
中图分类号:R927.2　文献标识码:A　文章编号:1672-7738(2010)03-0139-02
Determination of rutin in Herba Euphorbiae by HPLC
LV Feng-lian ,SONG Shao-jin ,FANG Bin
(Weihai Institute fo r D rug Contro l , Weihai 264200)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To establish an HPLC method for determination of rutin in H erba Eupho rbiae.METHODS　
The HPLC sy stem consisted o f Agilent Tc-C18 PN518925-902(5μm , 4.6×250mm)and me thanol-1%g lacial acetic acid(35
∶65)as the mobile phase w ith the flow rate of 1.0mL ·min-1 , the detective wavelength w as 257nm and column temperature
was 35℃.RESULTS　The calibration cur ve showed a good linear rela tionship a t the r ange of 0.019～ 0.38μg , r =0.9999 , the
average recovery w as 98.73% and RSD (n = 6)w as 1.05%.CONCLUSION 　 The method w as simple , accurate and
repeatable.It can be used fo r quality control of r utin in Herba Eupho rbiae.
KEY WORDS:Herba Eupho rbiae;rutin;HPLC;determination
　　地锦草为大戟科植物地锦 Euphorbia humi f usa Willd.
或斑地锦 Euphorbia maculata L.的干燥全草 , 是中医常用
药材 ,具有清热解毒 、凉血止血之功能 ,临床上多用于治疗皮
肤病 、菌痢 、肠炎 、病毒性肝炎 、各种出血症等疾病。其化学
成分主要有黄酮 、三萜 、香豆素 、甾醇 、鞣质及酚酸类化合
物[ 1] ,中国药典仅对其所含槲皮素成分进行了含量测定[ 2] ,
未对其所含芦丁成分进行质量控制 ,本文采用高效液相色谱
法 ,可以准确测定地锦草中芦丁的含量 ,提高了该药材的质
量标准 ,为保证该药材的质量提供了科学的依据。
1　仪器和试药
1.1 仪器　Agilent 1100 series 高效液相色谱仪 , Agilent
Chemstation 色谱工作站 , TC-100 柱温箱(天津市金洲科学
仪器有限公司), KQ-300VDE 双频数控超声波清洗器(昆
山市超声仪器有限公司), METT LER AE240 电子分析天平
(瑞士梅特勒-托利多仪器有限公司)。
1.2 试药　甲醇为色谱纯(P roduct of Tedia , United States of
Ame rica), 冰醋酸为分析纯(上海试一化学试剂有限公司),
水为超纯水。芦丁对照品(批号:100080-200707 , 供 HPLC
法含量测定用 ,含量为 90.5%, 中国药品生物制品检定所)。
各批次地锦草药材为市售品 , 经鉴别为大戟科植物地锦
Euphorbia humi f usa Willd.的干燥全草。
2　方法与结果
2.1 色谱条件　色谱柱 Agilent Tc-C18 PN518925-902(5μm ,
4.6×250mm);柱温:35℃;流动相:甲醇-1%冰醋酸(35∶65);
流速:1.0mL·min-1;检测波长:257nm;进样量:5μL。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备:精密称取芦丁对照品 26.53mg ,
置 50m L容量瓶中 , 用甲醇溶解并稀释至刻度 ,摇匀 ,作为储
备液 , 精密量取 2mL , 置 25m L 容量瓶中 , 用甲醇稀释至刻
度 , 摇匀 ,作为对照品溶液。
2.2.2 供试品溶液的制备:取地锦草干品粉末(过三号筛)约
1g , 精密称定 , 置具塞锥形瓶中 , 精密加入甲醇 50m L , 称定
重量 , 超声处理(功率 300W ,频率 45kH z)30min , 放冷 , 再称
定重量 , 用甲醇补足减失的重量 , 摇匀 , 滤过 , 取续滤液 , 用
0.45μm 的微孔滤膜滤过 , 即得。
2.3 系统适用性实验　分别精密吸取对照品溶液 、供试品溶
液各 5μL , 注入液相色谱仪 , 照 2.1项下的条件进行测定 , 记
录色谱图 , 见图 1 , 2。由图 1 , 2 可见 , 供试品色谱中 , 在与对
照品色谱相应的位置上 , 有相同保留时间的色谱峰且与其他
组分分离良好。芦丁的保留时间为 11.65min , 理论塔板数
·139·齐鲁药事·Qilu Pharmaceutical Af f airs 2010 Vol.29 , No.3
为 8141 ,芦丁与相邻组分蜂的分离度为 2.47。
图 1　芦丁对照品 HPLC色谱图
图 2　供试品 HPLC色谱图
2.4 线性关系考察　分别精密吸取对照品溶液 0.5 、1.0 、
2.0 、4.0 、6.0 、8.0 、10.0μL ,注入液相色谱仪 , 以上述的色谱
条件测定峰面积 ,以峰面积为纵坐标(Y ), 进样量为横坐标
(X),求得回归方程为:Y =7777.49 X +6.63 , 相关系数 r
=0.9999 , 线性范围为 0.019 ～ 0.38μg 。
2.5 精密度试验　精密吸取对照品溶液5μL ,重复进样 5 次 ,
在上述的色谱条件下测定芦丁的峰面积 , 结果 RSD 为
0.35%(n =5),表明仪器精密度良好。
2.6 稳定性试验　取供试品溶液(批号:090201),按上述色谱条
件分别于 0 、2、4、6 、8、10、12h 进样 5μL , 记录峰面积 ,结果 RSD
为1.52%(n =7),表明供试品溶液在12h 内稳定性良好。
2.7 重复性试验　取同一批号样品 6 份(批号:090201), 每
份约 1g ,按“ 2.2.2”项方法制备供试品溶液并测定 , 测得芦
丁平均含量为 0.12%, RSD 为 1.27%(n =6),表明方法重
复性良好。
2.8 加样回收试验　精密称定已知含量的供试品(含量为
0.12%,批号:090201)6份 ,每份约0.6g ,分别精密加入“2.2.1”
项的对照品储备液 1.0mL(浓度为 0.48mg ·mL-1),按“2.2.2”
项方法制备供试品溶液,分别进样测定 ,结果见表 1。
表 1 芦丁回收率测定结果(n =6)
取样量
(g)
取样含量
(mg)
对照品加入量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
RSD
(%)
0.6032 0.7238 0.4800 1.2021 99.65
0.6050 0.7260 0.4800 1.1972 98.16
0.6043 0.7252 0.4800 1.1980 98.50 98.73 1.05
0.6061 0.7273 0.4800 1.2086 100.27
0.6014 0.7217 0.4800 1.1893 97.42
0.6078 0.7294 0.4800 1.2017 98.40
2.9 样品含量测定　分别取样品约 1g , 精密称定 , 每批两份 ,
按“2.2.2”项方法制备供试品溶液 ,注入液相色谱仪 ,按上述
色谱条件测定峰面积 , 计算样品中芦丁的含量 ,结果见表 2。
表 2 样品测定结果(n =3)
批号 090201 080206 080701
含量(%) 0.12 0.09 0.11
3　讨论
3.1 芦丁为浅黄色针状结晶 ,可溶于甲醇及异丙醇 , 在三氯
甲烷 、乙醚和苯中几乎不溶 ,故选用甲醇作为溶剂进行提取。
3.2 称取芦丁对照品适量 , 用流动相溶解并稀释至每 1mL
中含芦丁约 50μg 的溶液 ,以流动相为空白 , 在 200 ～ 400nm
的波长范围内扫描 , 芦丁在 221nm 、257nm 与 356nm 的波长
处有最大吸收 , 且在 257nm 的波长处吸光度最强 , 故选择
257nm 为检测波长。
3.3 先后选用了柱温 30℃、35℃、40℃、45℃, 结果表明 ,柱温
对分离的影响较小 , 随着柱温的增加 ,保留时间有所缩短 , 峰
的扩散有所改善 , 但对分离度影响较小。选用柱温 35℃, 芦
丁的保留时间适中 , 分离效果良好。
3.4 芦丁溶于甲醇 ,在水中微溶 , 降低流动相中甲醇的含量 ,
将提高芦丁的分离效果 ,但同时也将延长保留时间 , 实验中
需根据流动相配比 , 调节流动相以获得良好分离效果。
3.5 实验结果表明 ,本法灵敏 、准确 、专属性强 , 操作简便 , 重
复性好 , 可以准确测定地锦草中芦丁的含量。
参考文献
[ 1] 刘润辉 ,孔令义.地锦草脂溶性成分研究.天然产物研究与开
发 , 2005 , 17(4):437.
[ 2] 《中国药典》2005年版(一部).北京:化学工业出版社 , 2005:84.
　·简讯 ·
山东省药品再注册审查审批工作全面启动
　　根据国家食品药品监督管理局《关于做好药品
再注册审查审批工作的通知》要求 ,山东省药品再注
册审查审批已全面启动。按照全省药品再注册工作
会议部署和要求 ,药品生产企业已陆续补充完善相
关资料 ,省局遵循“依据法规 、严格程序 、严格标准;
具体问题的处理上坚持尊重历史 、尊重事实 、尊重证
据”的原则 ,确保我省近 8000个药品再注册申请于
2010年 9月 30日前顺利完成 。 (药品注册处)
·140· 齐鲁药事 Qilu Pharmaceuti cal Af f airs 2010 Vol.29 , No.3