全 文 ：第 18 卷　第 5 期
2003年 10 月
内蒙古民族大学学报(自然科学版)
Journal of I nner Mongolia University for Nationalities
Vol.18　No.5
Oct.2003
蒙药地锦草黄酮清除和抑制羟自由基的实验研究
孙福祥 ,娜仁花 ,杨明霞 ,杨春晓
(内蒙古民族大学分析测试中心 ,内蒙古 通辽　028042)
摘　要:为了解蒙药材地锦草对羟自由基的清除和抑制作用机理.采用维生素 C 硫酸盐和细胞色素 C 为羟自
由基生成反应体系的方法.结果地锦草黄酮清除和抑制·OH 的 SC50=1.906 9 μg/ml(r =0.980 1);IC50=1.
804 8 μg/ ml(r =0.972 1).结论:地锦草黄酮能够计量依赖性地清除和抑制羟自由基.
关键词:地锦草黄酮;羟自由基;清除和抑制作用
中图分类号:R285.5　　文献标识码:A　　文章编号:1671-0185(2003)05-0448-02
Herba Euphorbiae Hum Ifusae Flavonoid Clearance with Repress
the Experiment Research of the Hydroxyl Radicals
SUN Fu-xiang ,Narenhua ,YANG M ing-xia , YANG Chun-xiao
(Inner Mongolia University fo r Nationalities , Tong liao 028042 , China)
Abstract:Understanding t raditional Mongolian medicine Herba Euphorbiae hum ifusae to the
cearance of the Hydroxy l f ree radicals with repress function.Adoption vitamin C+vit riol+cell dye
the C is a born reaction sy stem of Hydroxyl free radicals.Herba Euphorbiae hum ifusae flavonoid
clearance w ith repress the ·OH:SC50=1.906 9μg/ml(r =0.980 1);IC50=1.804 8 μg/ml(r
=0.972 1).Herba Euphorbiae hum ifusae f lavonoid can calculate the dependence ground the
clearance w ith repress the hydroxy l f ree radicals.
Key words:Herba Eupho rbiae hum ifusae;Flavones;Hydroxyl radical;Clearance with repress the
funct ion
地锦草为大戟科植物地锦(Euphorbia humifusa Willd)的干燥全草.是中医 、蒙医和维医常用药材之一 , 生于田野 、路旁 ,
我国各地均有分布 ,资源十分丰富.具有止血 、燥黄水 、愈伤 、清脑 、清脉热的功能.蒙医用于便血 、创伤出血 、衄血 、吐血 、肺
脓溃疡 、咳浓血痰 、中风等病症〔1〕.临床上中医用于治疗子宫出血 , 支气管出血和胃出血等〔2〕.如意珍宝丸(额尔敦·乌日
勒)、紫癜灵等方剂的主味药之一〔3 , 4〕.地锦草化学成分的研究表明 , 其化学成分主要为黄酮 、甾醇及鞣质类化合物〔5〕.现代
药理学研究证实 ,衰老 , 辐射损伤 ,肿瘤 , 炎症 ,缺血再灌注损伤和氧自由基关系密切〔6〕.因此探讨蒙药地锦草清除和抑制自
由基的作用 ,对阐明地锦草药理作用以及进一步开发利用均有重要意义.
1　材料与方法
1.1　仪器及试剂　日立 557 型双波长/双光束分光光度计;754 型分光光度计(上海第三分析仪器厂);A1604 型电子分析
天平(上海天平仪器厂);细胞色素 C(Cyt·C)为Sigma 公司产品.维生素 C 为国产生化试剂;硫酸铜 、硫脲和磷酸盐等化学试
剂均为国产分析纯 ,实验用水为二次亚沸提纯水.
地锦草由内蒙古蒙医学院附属医院制剂室提供 , 经鉴定为地锦的干燥全草.粉碎成 20 目粗粉备用.芦丁对照品(中国
药品生物制品检验所提供).
1.2　方法
1.2.1　地锦草总黄酮的提取〔7〕　取地锦草粗粉 5.00 g , 加 75%乙醇 30 ml , 浸泡 12 h , 回流提取 1.5 h , 提取 3 次.提取液回
收稿日期:2003-06-05
作者简介:孙福祥(1956-),男(蒙古族),内蒙古通辽人 ,副教授 ,从事蒙药药理学研究.
DOI :10.14045/j.cnki.15-1220.2003.05.021
收乙醇 ,加水溶解 , 并定容至 50 ml.用石油醚脱色.然后用正丁醇萃取.减压回收正丁醇至干 ,即可得到总黄酮精制品 , 用甲
醇溶解并定容至 50 ml.在日立 557型分光光度计上做全波长扫描 ,取芦丁对照品为对照.
1.2.2　羟自由基生成体系〔8〕　采用维生素 C(Vit C)+硫酸铜(CuSO 4)+细胞色素 C(Cy t·C)体系作为羟自由基生成反应
体系.体积控制为 1.45 ml , 其中 KH2PO4(pH7.4)缓冲液 0.15 mol/ L;Vit·C 1.0 mmol/ L;CuSO 4 1.0 mmol/ L;Cty·C 1.0
mmol/ L;加入不同浓度的地锦草黄酮 , 25 ℃保温 25 min ,在 754 型分光光度计上于 550 nm 处读吸光度并以硫脲做标准对
照 ,用静态法测 S%和 S%达 50%时药物浓度(SC50);用动态法测 I%和 I%达到 50%时的药物浓度(IS50).
1.2.3　清除率(S%)和抑制率(I%)的计算　在 Vit C-Cu-Cy t·C 组成的反应体系的吸光度为本底量(A 1),在上述体系中
加 CuSO 4的吸光度为·OH 氧化 Cy t C 后剩余的量(A2).A 1-A2 为·OH 氧化掉的 Cy t·C ,可称·OH 的生成量(C1).上述反应
体系加地锦草总黄酮后吸光度为(A3), A 1-A2 为经总黄酮处理后·OH 的生成量(C2),据以上各项求出其清除率(S%)和清
除率为 50%时的药物浓度(SC50).用动态法记录不同时间光密度并作 O·D～ t曲线.计算回归 ,由初速度(V0)求出抑制率和
抑制率为 50%时的药物浓度(IC50).
2　结果　地锦草黄酮清除和抑制羟自由基的实验结果见表 1.
表 1　地锦草酮对·OH 的清除和抑制作用
Table 1　Clearance and repress function of herba Euphorbiae humifusae
浓度 C
(μg/ml)
吸光度
(A)
初速度
(×10-3)
清除率
(S%)
抑制率
(I%)
0.0 0.158 5.30 — —
0.5 0.136 4.21 13.9 20.1
1.0 0.124 3.40 21.5 35.8
2.0 0.089 3.12 43.7 41.1
3.0 0.071 2.50 55.1 53.0
4.0 0.053 1.20 66.5 77.4
5.0 0.026 1.16 83.4 78.1
　　　回归方程为:S=17.791 6+16.890 5C(r=0.980 1)　　　SC50=1.906 9 μg/ ml
I=21.461 2+15.812 6C(r=0.971 2) IC50=1.804 8μg/ ml
3　讨论
已知许多疾病与自由基在体内失衡有关;产生过多或清除障碍均可诱导器官功能紊乱 , 代谢失调.因此寻找有效的清
除剂就成为医药界研究热点.·OH 在生物体内产生途径多 , 对细胞损伤严重 , 作用广泛的自由基.研究地锦草黄酮抗·OH
的作用 , 还可以为地锦草的保肝 、止血等药理作用提供依据.本文结果表明 ,在维生素 C(Vit C)+硫酸铜(CuSO4)+细胞色
素 C(Cy t·C)反应体系中 ,地锦草黄酮对·OH 的清除作用很明显:SC50=1.906 9 μg/ml;IC50=1.804 8 μg/ml.地锦草的消
肿 、清热 、止血 、伤口愈合等药理作用的发挥很可能与其消除·OH 有关 , 有待进一步研究.
参　考　文　献
〔1〕内蒙古自治区卫生厅.内蒙古蒙药材料标准〔M〕.赤峰:内蒙古科学技术出版社 , 1987.402.
〔2〕中国医学科学院药用植物资源研究开发所 , 中国医学科学院药物研究所.中药志(Ⅳ)〔M〕.北京:人民卫生出版社 ,
1988.325 , 321.
〔3〕中国医学百科全书编委会.中国医学百科全书(蒙医学)〔M〕.上海:上海科技出版社 , 1992.227.
〔4〕巴特尔 , 乌兰.蒙医治疗过敏性紫癜 108 例临床观察〔J〕.中国民族医药杂志 , 1996 , 2(2):12-13.
〔5〕柳润辉 , 王汉波 ,孔令义.地锦草花学成分的研究〔J〕.中草药 , 2001 , 32(2):107-108.
〔6〕方允中 , 李文杰.自由基与酶〔M〕.北京:科学技术出版社 , 1989.193.
〔7〕巴根那 , 赵贤芳 ,白玉霞 , 等.蒙药总黄酮提取工艺〔J〕.时珍国医国药 , 1999 , 10(4):252-253.
〔8〕王成莲 , 刘莉.比色法测定抗坏血酸体系产生的·OH 基〔J〕.生物化学与生物物理学进展 , 1989 , 16(6):473.
〔责任编辑　赵贤芳〕
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