全 文 ：20 6年 第 3期
第 3 3卷 总第 15 5期
广 东 化 工
恻钊侧 .g de he m
.
c饰
分光光度法测定破布叶中己,已户黄酮
毕和平 ` , 韩长 日 ` , 王芳 ’ , 乔丽艳 2 , 陈光英
(l
. 海南师范大学 化学系 , 海南 海口 571 巧 8 ;
2
. 海南师范大学 生物系 , 海南 海 口 571 1 58 )
〔摘 要」利用分光光度法测定了破布叶的叶 、 茎 、 果中的总黄酮含量 , 结果表明 , 破布叶叶 、 钱 、 果中的总黄酮质
量分数分别为 16 . 9 4% 、 5 . 15%和 1 . 5 2% 。 I团归方程为 A二 1 1 . 4 48 6C 一 0 . 00 54 3 , r 二 0 . 99 96 。 叶 、 茎 、 果的平均加标回收
率分别为 10 2 . 3% 、 9 7 . 6%和 9 2 . 6% , RSD 依次为 1 . 01 % 、 1. 94 %和 2 . 76 % (n 二 5 ) 。 本法操作简便 、 可行 、 重现性好 。
〔关健词〕破布叶 ; 总黄酮 ; 分光光度法 ; 含量测定
S P e e t r o P h o t o m e t r i e D e t e r m i n a t i o n o f t h e OT t
a l F la v o n o id s
i n M IC r 0 C O S P a
n i C U l a t a L
-
B 1H e p in g ’ , H a n e h a n g i ’ , wa
n g arn g
l
,
Q ia o L iy a n ,
,
e h e n g u an g y in g
( 1
.
C h e m i e a l D e Part m e n t
,
H a i n a n N o mr
a l U n i v e r s iyt, Ha ik o u 5 7 1 15 8
;
2
.
B i o l o g i e a l D e Pa rt m e n t
,
H a i n an N o mr a l U n i
v e r s i t y, H a i k o u 5 7 11 5 8
,
C h i n a )
A b s t r a e t : T h e t o at l fl a v o n o id s in le a f, s te m a n d fur i t
o f M i e r o c o s Pa n i e u lat L
w e r e d e te mr i n e d b y s Pe c tor Ph o t o m e t yr a t 500
n m
.
T h e Ii n e a r r e g er s s i o n e q u a tio n i s A = 11
.科 8 6 C 一 0 . 0 0 54 3, r = 0 . 9 99 6 . Re s u lts wa s 16 . 9 4% in le a f, th e a v e ra g e re e o v e yr w a s
102
.
3%
,
R S D = 1
.
82% ( n = 5 ): 5
.
15% i n s t e m
,
t h e a v e ar g e er e o v e yr w a s 9 8
.
4 %
,
R SD = 1
.
9 5% ( n = 5 ) ; a n d 1
.
5 2 % in fur it
,
t h e
a v e r a g e r e e o v e yr w a s 94
.
0 %
,
R S D = 2
.
5 5 % ( n = 5 )
.
T h e m e th o d 15 s im P le
, r e P ro du e ib le a n d Par e t ie a b le fo r th e d e t e mr i
n a tio n o f
t o t a l fl a v o n e s
.
K e y w o r d s : M i e or e o s P a n ie u la at L ; fl a v o n o i d s : s Pe e t or P h o to m e tyr ;q u a n ti ta t iv e a n a ly s i s
破布一It一属 ( m i c r o e o s L i n n ) 全世界约 60 种 , 分布于非洲 、
印度 、 马来西亚等地 。 在我国有 2 种 , 为破布叶和海南破布叶 。
破布叶 (协i e r o e o s p a n i c u l a t a L . ) 又名布渣 、 包蔽木 、 泡 卜
布 、 破布树 、 布包木 、 狗具木等 , 为灌木或小乔木 , 属锻树科
破布叶属植物 , 1二要分布于我国海南 、 广东 、 广西 、 云南等地 。
破布叶的仆卜, 用 州青热解毒 , 消食积 。 主治感胃 , 消化不良 ,
腹胀 , 黄疽 , 蚁蚁咬伤 , 腹胀 , 黄疽 , 小儿盗汗 , 作茶饮去食
积等 i’ · 2 , 。 黄酮类化合物是植物中非常重要的 一 类次生代谢产
物 , 具有降脂 、 抗血栓 、 抗心律失常 、 抗氧化 、 降糖 、 消除体
内自由基 、 增强肌体免疫功能等多种生理活性 。 为充分开发利
用破布叶药用植物 , 本文利用分光光度法对破布叶的叶 、 茎和
果中的总黄酮含量进行了测定研究 , 为该药用植物的综合开发
和利用提供科学依据和参考 。
1 实验部分
1
.
1 仪器与试剂
[收稿日期 ] 20 0 6一 0 2一 18
〔作者简介」毕和平 ( 19 5 5一 ) , 男 , 教授 , 上要从事 , },草药化学研究 。
UV7 57 CRT 紫外可见 一 分光光度 计 ( !几海精密仪器有限公
司 ) ; 电子天平 ( _ L海精科天平 ) ` ) : RE 一 5 2A 型旋转蒸发器 ( l飞
海亚荣生化仪器厂 ) : 索氏提取器 。 芦丁对照 .公. (质 星分数为
9 9
.
2 %
, 中国药品生物制品检定所 ) : 亚硝酸钠 、 氢氧化钠 、
硝酸铝 、 甲醇 、 石油醚等试剂均为囚产分析纯 : 破布叶于 2 00 5
年 10 月采集于海南省 , _ 二亚市落笔洞地区 , 经海南师范人学
生物系钟琼芯副教授鉴定为破布叶 M i c r o c o s p lnt i c u ! ” at L ·
的叶 、 茎和果。
1
.
2 实验方法
1
.
2
.
1标准曲线绘制
参照文献 ;不 们的方法 , 精确称取译燥至恒秉的芦丁对照品
Z Om g
, 用甲醇溶解并定容于 100 ml 容鼠瓶 ` l , , 摇匀 , 得浓度为
0
.
Zm g / m L的标准溶液 。 精确吸取芦丁标准济液 0 . o ml 、 1 . o ml 、
2
.
o m L
、
3
.
o m l
』 、
4
.
o m L
、
5
.
o m L
, 分置 J立 10m l 容鼠瓶 `t , , 各加
甲醉至 s m L , 再加入质量分数为 5% N a NO:溶液 0 . s m L , 摇匀 ,
广 东 化 工 20 6年 第 3期
g dc h枷 .C侧 11 第 33卷 总第 1 5期
室温放置 6i m n, 再加质量分数为 10% 的 lA (N0 3 ) : ,溶液 0 . smL ,
摇匀 , 室温放置 6 im n , 再加质量分数为 4%的 N a 0 H溶液 4 . omL ,
摇匀 , 室温放置 I Oim n , 在 5 0Onm 波长下测定吸光度 , 同时以
试剂空白作参比 。 以吸光度 A 为纵坐标 , 芦丁浓度 C ( gm /mL )
为横坐标 , 绘制标准曲线 。
1
.
2
.
2 试样中黄酮类化合物的提取与测定
分别准确称取己粉碎的破布叶的叶 、 茎和果各 l 份 , 每份
2
.
0 9
, 置索氏提取器中 , 加入石油醚 , 加热回流至提取液无色 ,
放冷 , 弃去石油醚液 。 将药渣中石油醚挥干 , 继续用甲醇提至
无色 , 提取液移置 10 Om L 容量瓶中 , 加甲醇至刻度 , 备用 。 为
使测定稳定 , 从 10 Om L提取液中精确吸取 5 . 0~ 25 . o m L , 置于
10Om L 容量瓶中 , 用甲醇定容至刻度 , 得破布叶提取稀释液 ,
备用 。
精确吸取破布叶各部位提取液稀释液 1. Om L , 分置于 10m L
比色管中 , 各加甲醉至 s mL , 余下部分按土二述 1 . 2 . 1项操作得
样品供试液 , 在 50 0n m 波长下测定吸光度 。 同时 , 精确吸取破
布叶相应部位提取稀释液 1. o m L , 置于 IOmL 比色管中 , 加甲醉
至 s mL , 再加蒸馏水 1 . om L 和质量分数为 4 %的 N a 0H溶液 4 mL
作参比 。 按下式计算破布叶中的总黄酮质量分数 。 。
。 = ( 10 o C x 犷 x f / Io o m ) x l o % ( l )
式中 : C 为由回归方程计算出的破布叶中的总黄酮浓度
( m g / m )L
:
V 为样品供试液体积 (m )L : f 为稀释倍数 ; m 为破
布叶样品质量 ( g ) 。
2 结果与讨论
2
.
1 测 t 波长的选择
配制不同浓度的芦丁标准溶液 , 精确吸取 2 . Om L , 按本文
1
.
2
.
1 项所述方法进行操作 , 在 UV757 CRT 紫外 一 可见分光光度
计上从 4 50~ 6 O0 unr 范围进行波长扫描 , 同时以试剂空白作参
比 , 得芦丁标准溶液吸收扫描曲线 (见图 l ) 。 选择最大吸收波
长 50 0 n m 为测量波长 。
;:{鳄 m g / m L )
m g /
m L )
64Où斑U
0
.
0 4 ( m g /
m L )
02
4 60 4 80 50 0 52 0 5 4 0 5 6 0 5 8 0 6 0 0
人 / n m
图 1 芦丁不同浓度标样显色后
2
.
2 工作曲线与回归方程
按 1. 2 . 1 节标准曲线绘制项下的方法测定 , 绘制的标准曲
线见图 2 。 试验表明 , 芦丁浓度在 0 . 0 ~ 0 . 10m g / m L范围内线
性关系良好。 得回归方程 : A 二 1 . 44 86C 一 0 . 00 543 , 相关系
数 r 二 0 . 99 96 。
2
.
3 破布叶各部位总黄酮含量的测定结果
从测定结果可知 (见表 l) , 破布叶叶中的总黄酮平均质量
分数为 16 . 94 % , RSD 二 1 . 0 1 % ( n 二 6 ) : 茎中为 5 . 15 % , RSD
=
1
.
94 % ( n = 6 ) : 果中为 1 . 5 2 % , RS D 二 2 . 76 % ( n 二 6 ) ;
其中叶中的总黄酮含量最高 。
2
.
4 方法学考察
2
.
4
.
1稳定性试验
精确吸取芦丁标准溶液和破布叶各部位提取稀释液各
1
.
Om L
, 分置于 IOmL 比色管中 , 各加甲醇至 smL : 余下部分分
别按 1 . 2 . 1项和 1. 2 . 2 项的方法进行操作 。 试验表明 , 在室温
表 1 破布叶各部位中总黄酮含 t 的测定结果
部位 n (测量次数 ) 平均质量分数 /% RS D /%
叶 A (吸光度 ) 0 . 30 9 0 . 30 9 0 . 30 1 0 . 3 0 4 0 , 3 06 0 . 30 5 16 . 94 1 . 0 1
茎 A ( 吸光度 ) 0 . 2 3 4 0 . 2 3 5 0 . 2 2 7 0 . 2 23 0 , 23 1 0 . 23 0 5 . 15 1. 9 4
果 A ( 吸光度 ) 0 . 16 5 0 . 17 6 0 . 17 2 0 . 166 0 . 16 4 0 . 17 0 1 . 5 2 2 . 7 6
表 2 加标回收率试验
部位 n (测量次数 )
试样量 / “ g
加标量 / p g
测得量 / “ g
试样量 / “ g
加标量 / “ g
测得量 / “ g
试样量 / p g
加标量 / “ g
测得量 / p g
平均回收率 /% RS D浅
2 7 1
.
0 2 7 1
.
0 27 1
.
0
2 0
.
0 2 0 0 0 2 0 0
.
0 2 0 0
.
0 2 0 0 10 2
.
: l 1 82
2 06 0
4 76
.
0
2 06
.
0
4 7 6
2 0 6
4 7 1
2 0 6
4 7 4
.
0
2 0 6
.
0
10
.
0 100
3 0 7
10 0
.
0 10 0
.
0 10 0
3 0 5
9 8
.
4 1
.
9 5
n`,nù产a件八13 0 5 0
15 2 0
10 0
.
0
30 3
15 2
10 0
.
0 10 0 0 2
.
5 5
,ó八曰-净01.lt`1
2 4 4
,
0 2 50
.
0 2 4 4
.
0 2 4 7 0
20 6年 第 3期
第 3卷 总第 15 5期
广 东 化 工
. .姗 . gd eh e m. c诩
毛 28℃的环境中 , 显色时间在 10 ~ 60m in 范围内 , 吸光度没有
变化 。 因此 , 在本试验选择的测定时间内 , 黄酮类化合物与铝
离子生成的络合物显色是稳定的 。
1 0 0
,
8 0
6 0
0
.
4 0
0
.
2 0
0
.
0 0 书二一一一 , 一一- -甲一一一一甲
0
.
0 0 0
.
0 2 0
.
0 4 0
.
0 6 0
.
0 8 0
.
1 0
C / ( m g
· m L
一 ’
)
图 2 标准曲线
2
.
4
.
2加标回收率和精密度试验
向已知含量的样品溶液中添加一定量的芦丁标准品 , 按
1
.
2
.
2 项的方法测定总黄酮含量 , 计算回收率和精密度 , 结果
见表 2 。 得破布叶的加标平均回收率为 10 2 . 3% , RSD =l . 82 % ( n
二
5)
; 茎的加标回收率为 9 8 . %4 , RS D=l . 9%5 ( n 二5) : 果的加标回
收率为 94 . 0% , RSD二 2 . 5 5% ( n二 5) 。
2
.
5 所用试剂浓度的选择
根据正交表 L l。 ( 4 3 ) 进行三因素四水平的正交试验 , 对显
色剂 Na N氏 一 lA (N =0t ) 3 一 Na OH 体系中的各物质的浓度进行最优
化选择。 试验结果证明 : 亚硝酸钠质量分数为 5% 、 硝酸铝质量
分数为 10 %和氢氧化钠质量分数为 4% , 显色溶液的吸光度有
最大值 , 而且测定液澄明 。
2
.
6 样品空白的选择
在测量破布叶总黄酮含量时发现 , 在不加入硝酸铝和亚硝
酸钠的情况下 , 单独加入氢氧化钠溶液后比没有加入时的测量
值略高。 为了抵消样品供试液中某些化学成分可能与碱作用生
成有色物质而引起的误差 ! 5一川 , 故本法选择在加入样品提取液
1
.
o mL 后 , 再加甲醇 4 . o m L , 蒸馏水 1. o m L 和 4 . o m L 质量分数
为 4%的 N a 0 H溶液作为样品空白 。
3 结论
以 N a N压一A INO 。 一 Na 0 H 为显色体系 , 采用分光光度法测定
破布时一中的总黄酮含量 , 操作简便 , 线性关系良好 , 测定范围
宽 , 其准确度及精密度均能满足测定要求 。
参考文献
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.
(上接第 53 页)
氧化降解的速率随测试时间变化情况如图 2 所示 。 由图可知 ,
5 0 2
、
NH
3 、 CO
、
NO
: 反应初期降解速率增加显著 , 5 0: 、 NH 3 、 CO、
NO
、 约 6 Oim n 时达最大 , 随后逐步下降 。 这是因为反应初期 ,
被测气体在催化剂表面吸附量的增加 , 光催化发应速率增大 ,
随着反应的进行 , 生成的氧化产物逐渐占居催化剂表面的活性
位 , 使光催化剂失去活性 , 同时吸附在催化剂表面氧的耗尽 ,
也使催化速率下降 。 在下降过程中 , S认 、 CO 、 NO: 衰减显著 ,
NH
3 下降较缓慢 , 是因为 50 : 、 CO、 N0 ,氧化降解的主要产物为对
应的酸 l氛 ” , 吸附在催化剂表面 , 需冲洗才能移除 , 而 NH 3氧化
降解的主要产物为氮气 , 容易从表面逸出 。
3 结论
( l ) iT o
: 光催化剂紫外灯照射下 , 能有效地催化降解 50 2 、
NH
: . 、 NO
、 、
CO有害气体 , 降解量分别为 : 73 . 2%、 8 6 . 1%、 8 1 . 4%、
69
.
1%
。
( 2 ) iT o
: 光催化剂性质稳定 , 再生方法简单 , 再生后催
化活性不受影响 , 是一种经济耐用型的环保材料 , 具有广泛的
应用前景。
( 3 ) 对于不同气体 , 在相同测试条件下 , 导致 iT 压光催
化剂失活的主要原因是氧化产物在催化剂表面的吸附 。
参 考 文 献
[ ll Mi e h a e l R
. 南 f f am n n , s e o t T Ma r t i n , w o n y o n g e h o i . e t c . E n v i r o n m e n -
t a l Ap p l i e a t i o n s o f So m i C o n du 。 t o r Ph o t o e a t a l y s i s 【J ] . Ch e m . Re v .
19 9 5
,
9 5 : 6 9一 96
.
[ 2〕P e t e r K. J . Ro b e r t s o n . s e m s e o n d u 。 t o r ph o t o e a t a l y s i s : a n o n v i r o n mo n -
t a l l y a e e e p t a b l e a l t e r n a t i v e p r o d u e t i o n t e e h n iq u e a n d c f f l u e n t
t r e a t帕 n t p r o e e s s [J 〕, J . C l e a n e r P r o d . 19 9 6 , 4 ( 3一 4 ) : 2 03 一 2 1 2 .
〔3」H. 韧. C o l e ma n a , , E . J . Ro u t l e d g e b , J . I, . s u m p t e r b , e t c . Ra p i d l o s s o r
e s t r o g e n i e i t y o f s t e r o i d e s t r o g e n s b y UVA p h o t o l y s i s a n d Ph o t o e a
-
t a l y s i s o v e r a n i m初b i l i s e d t j t a n i u m d i o : i d e 。 a t a l y s t 【J ] . Wa t e r
Re s e a r e h
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