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关于环酯红霉素干混悬剂的微生物限度的检查方法的试验验证
布丽丽 高巍巍
（黑龙江江世药业有限公司，黑龙江 哈尔滨 150001）
环酯红霉素干混悬剂为新型大环内酯类抗
生素，是红霉素的半合成衍生物，环酯化后的红霉
素降低了血清蛋白结合率，提高了抗菌活性和降
低了毒性；本品为广谱抗生素，其注册质量标准中
未列微生物限度的检验方法。为此，本文对环酯红
霉素干混悬剂的微生物限度的检查方法进行了验
证试验。
1试验材料。1.1样品：环酯红霉素干混悬剂,
批号：061101,规格：0.125g/包，生产厂家：海南澳
美华制药有限公司。1.2培养基：玫瑰红钠琼脂，批
号：040929；营养琼脂，批号：060214；营养肉汤，批
号：060117；真菌培养基，批号：050103；胆盐乳糖
培养基，批号：060117，均由北京三药科技开发公
司提供；MUG，批号：051207，由北京牛牛基因技术
有限公司提供。
2金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和枯草芽孢
杆菌的验证。2.1菌液制备。2.1.1取经 25℃培养
18～24h的白色念珠菌真菌液体培养物 1mL加
9mL盐水,10倍稀释至 10-5～10-6，细菌数约为
50～100cfu/mL，做活菌计数备用。2.1.2取经 25℃
培养 1周的黑曲霉斜面培养物，加 3～5mL盐水洗
下真菌孢子，吸取出菌液，然后取 1mL加 9mL盐
水，10倍稀释为 10-3，细菌数约为 50～100cfu/mL，
做活菌计数备用。 2.2供试品的制备：取本品 10g,
溶于 100mL的 pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液中，作
为 1∶10供试液。2.3试验组：分别取 1∶10供试
液,以 500r/min离心 5min,，分别取上清液 1mL薄
膜过滤，以 pH7.0氯化钠 - 蛋白胨缓冲液为冲洗
液冲洗，每次 100mL，在最后一次冲洗液中分别加
入试验菌少于 100cfu/mL金黄色葡萄球菌、大肠
埃希菌、枯草芽孢杆菌 1mL；过滤取出滤膜，分别
贴于营养琼脂平皿中于 30～35℃培养, 每天观察
结果，计数。2.4菌液组：测定每一菌株的试验菌数，
采用平板菌落计数法。2.5供试品组：不加菌液，其
他操作同试验组，测量样品本底菌数。2.6结果：当
冲洗量为 1000mL时，可消除抑菌作用。
3黑曲霉菌和白色念珠菌的验证。3.1供试品
的制备：取本品 10g,溶于 100mL的 pH7.0氯化钠
- 蛋白胨缓冲液中，制成 1∶10的供试液。3.2试验
组：取 2组平皿，每组 2个，分别取 1∶10供试液
1mL和 50～100cfu/mL试验菌株 1mL同时加入
平皿中，立即倾注琼脂培养基,于 24～28℃培养,每
天观察结果,计数。3.3菌液组：测定每一菌株的试
验菌数，采用平板菌落计数法。3.4供试品组：不加
菌液，其他操作同试验组，测量样品本底菌数。3.5
结果：黑曲霉菌和白色念珠菌的回收率均大于
70%。
4讨论。4.1环酯红霉素干混悬剂细菌数检查
采用薄膜过滤法，通过不同的冲洗量，测定人工染
菌回收率，总冲洗量为 800mL时，金黄色葡萄球
菌、枯草芽孢杆菌回收率均低于 70%，方法还是不
可行；当总冲洗量为 1000mL时，人工污染 3株代
表菌株，金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢
杆菌的回收率均高于 70%，符合中国药典微生物
限度验证方法的要求，故可采用薄膜过滤法进行
检验。4.2环酯红霉素干混悬剂为广谱抗生素，主
要作用于细菌，采用常规法测定真菌和酵母菌数，
人工污染 2株代表菌株，白色念珠菌、黑曲霉回收
率均高于 70%，符合规定中国药典微生物限度验
证方法的要求，所以真菌和酵母菌数验证方法首
选常规法。
参考文献
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典：二部[S].
北京：化学工业出版社，2005：附录 79.
[2]王妤.环酯红霉素干混悬剂微生物限度检查方法
的建立.
摘 要：环酯红霉素干混悬剂为新型大环内酯类抗生素，本文对环酯红霉素干混悬剂的微生物限度的检查方法进行了验证试验。
关键词：微生物限度检查方法；薄膜过滤法；常规法；抑菌作用
医 药 与 保 健
1仪器与试药
1.1仪器。高效液相色谱仪：HP1100DAD检
测器，十万分之一电子天平。
1.2试药。芦丁对照品：中国药品生物制品检
定所，批号 080-9303，牛耳枫：购于广州市药材公
司，甲醇（色谱纯）：天津四友，硅胶 G：青岛海洋化
工厂。
2方法与结果
2.1色谱条件。色谱柱：依利特HypersilC18
（4.6×250mm，10μl），流动相为甲醇-0.4%磷酸（35∶
65），流速为 1ml/min，检测波长为 360nm。
2.2对照品溶液的制备。精密称芦丁对照品适
量，置容量瓶中，加甲醇制成每 1ml含 25μg的溶
液，即得。供试品溶液的制备：取牛耳枫药材粉末
0.5g，精密称定，加入乙醚 50ml，超声 15min，滤过，
去弃乙醚液，药渣待挥干乙醚，药渣精密加甲醇
50ml，称定重量，水浴回流 1h，补足减失的甲醇重
量，滤过，去弃初滤液，续滤液作供试品。测定法：
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液 10μl，注
入色谱仪，测定，即得。
2.3分离度试验。吸取芦丁对照品溶液、供试
品溶液按上述方法测定。结果：样品中芦丁的分离
度良好。
2.4 标准曲线。取芦丁对照品溶液
（0.016704mg/ml），分别进样 5μl、10μl、15μl、20μl，
按试验方法项下的色谱条件测定其峰面积。以芦
丁进样量（μg）为纵坐标，色谱峰的面积为横坐标，
绘制标准曲线，结果表明，芦丁在 0.0835～
0.3341μg的范围内，其进样量与色谱峰面积呈良
好的线性关系。回归方程：Y＝0.0007X+0.0029，相关
系数 r=0.9997。
2.5稳定性试验。取样品按含量测定项下的色
谱条件测定其峰面积，每隔 2h测 1次，连续测 4
次，结果：样品在 8h内测定是稳定的，RSD=0.82%。
2.6精密度试验。取对照品溶液（0.016704mg/
ml），分别等量 10μl进样 5次，按上述实验方法项
下的色谱条件测定，RSD=0.6%。
2.7重现性试验。取样品一式 5份，按含量试
验项下的条件测定，计算芦丁积分面积，结果：
RSD=2.1%。
2.8回收率试验。取已测定含量（0.736mg/g）的
供试品约 0.25g，精密称定，再精密加入 0.1739mg
芦丁对照品，按上述供试品溶液的制备方法制备
和测定，一式 5份，回收率试验结果表明：本测定
方法的平均回收率为 98%，基本符合要求。
3 讨论
牛耳枫中芦丁含量测定的流动相，还考察了
流动相甲醇-水(35∶65)[2]、流动相甲醇-水-乙腈-冰
乙酸(30∶57.5∶10∶2.5)[3]。采用流动相甲醇-水(35∶65),芦
丁峰有少许拖尾。采用流动相甲醇-水-乙腈-冰乙
酸（30∶57.5∶10∶2.5），芦丁峰分离效果较好，但要采用
4种溶剂，成本也较高，而采用甲醇-0.4%磷酸溶液
（35∶65），芦丁峰分离效果也好，且成本低、简便。
参考文献
[1]黄泰康.常用中药成份与药理手册[M].北京：中国
医药科技出版社，1994：1700.
[2]全国中草药汇编编写组.全国中草药汇编（上册）
[M].北京：人民卫生出版社，1988：897-898.
[3]邓富良，陈本美.高效液相色谱法测定槐米中的
芦丁含量[J].湖南医科大学学报，2006，25（6）:597-
598.
高效液相色谱法测定牛耳枫中芦丁的含量
孙水涛 沈 丹
（哈尔滨乐泰药业有限公司，黑龙江 哈尔滨 150000）
摘 要:目的 建立牛耳枫的质量鉴测指标。方法 采用薄层色谱鉴别，高效液相色谱法测定牛耳枫中芦丁的含量，高效液相色谱条件 Hypersil
柱（4.6 mm×250 mm，10 μl），流动相:甲醇-0.4%磷酸溶液（35∶65）。结果 高效液相法测定牛耳枫中芦丁，方法重现性好，准确可靠。结论 该方法可用
于牛耳枫中芦丁的含量测定。
关键词：牛耳枫；芦丁；高效液相色谱；薄层色谱