全 文 ：地锦草有效成分总黄酮测定方法的建立及提取工艺研究
杜海红1， 丁 红2， 刘永红3， 赵志娟2， 王军霖2 (1太原市妇幼保健院药剂科， 太原 030012; 2山西医科
大学药学院; 3山西省心血管疾病研究所)
摘要: 目的 建立地锦草总黄酮含量的测定方法及优化地锦草中总黄酮的提取工艺。 方法 采用紫外 －可见分光光度
法测定总黄酮含量;提取工艺考察了水回流提取、乙醇回流提取及超声提取不同的提取方法，优选出乙醇回流提取法，采用单
因素试验及正交试验优化地锦草的乙醇回流提取工艺。 结果 该测定方法的平均回收率为 102． 82%，RSD = 1． 2%;地锦草
总黄酮提取工艺考察，最终确定最佳工艺:75%乙醇，15 倍量，提取 2 次，每次 2 h;提取率高达到 2． 588%。 结论 优选的总
黄酮提取工艺方法简单、易行。
关键词: 地锦草; 总黄酮; 紫外 －可见分光光度法; 含量测定; 提取
中图分类号: R284． 2 文献标志码: A 文章编号: 1007 － 6611(2012)12 － 0932 － 04 DOI:10． 3969 /J． ISSN． 1007 － 6611． 2012． 12． 014
Determination and extraction of total flavonoids from Euphorbia humifusae
DU Haihong1，DING Hong2，LIU Yonghong3，ZHAO Zhijuan2，WANG Junlin2(1Dept of Pharmaceutics Taiyuan Hospital Health Center
for Women and Children，Taiyuan 030012，China;2College of Pharmacy，Shanxi Medical University;3 Institute of Cardiovascular Diseases
of Shanxi)
Abstract: Objective To establish a ultraviolet-visible spectrophotometry for determining the content of total flavonoids in Euphorbia
humifusae and to optimize its extraction conditions． Methods Ultraviolet-visible spectrophotometry was used to determine the content
of total flavonoids． The optimum extraction conditions were explored by single factor analysis and orthogonal design with the water ex-
traction，alcohol extraction and ultrasonic extraction method as factors． Results The average recovery rate was 102． 82% with RSD
1． 2% ． The optimum conditions were 75% ethanol，ratio of ethanol to material of 15，extraction for 2 times and 2 h each time． The ex-
traction rate of total flavonoids under the optimum conditions was 2． 588% ． Conclusion The established method was simple and fea-
sible for gaining the high extraction rate．
Key words: Euphorbia humifusae; total flavonoids; ultraviolet-visible spectrophotometry; assay; extraction
地锦草为大戟科植物地锦(Euphorbia humifusa
Wild ．)或斑地锦(Euphorbia maculate L．)的干燥全
草［1］。地锦草用于治疗细菌性痢疾、胃肠炎、沙门
氏菌食物中毒、秋季腹泻、支气管炎、尿路感染、咽喉
肿痛、痈疮疔毒肿痛、肺脓疡、风疮疥癣、带状疱疹、
咳嗽气喘及感冒咳嗽等具有明显疗效［2 － 4］。地锦草
的主要有效成分为槲皮素等黄酮类成分。本文建立
了地锦草总黄酮的含量测定方法并采用单因素及正
交试验优选了地锦草中黄酮类成分的提取工艺。
1 仪器与试药
760CRT双光束紫外可见分光光度计(北京普
析通用仪器有限公司) ;725 型紫外分光光度仪(上
海光谱仪器有限公司) ;SPD-10A 紫外检测器(日本
岛津) ;电子天平(德国赛多利斯股份公司) ;HH-2
型电子恒温水浴锅(苏州威尔试验设备有限公司) ;
SHZ-D型循环水式真空泵(巩义市英峪予华仪器
厂) ;RE-52AA型旋转蒸发器(上海恒科化学仪器有
限公司) ;KQ3200DE 型超声波提取器(昆山超声仪
器有限公司)。
地锦草(安徽省世茂医药有限公司提供) ;芦丁
对照品(中国药品生物制品检定所，0080 － 9705) ;
甲醇(天津傲然精细化工研究所，色谱纯) ;醋酸钾、
三氯化铝、乙醇、盐酸、磷酸(北京化工厂，分析纯) ;
乙醇(北京化工厂，分析纯)。
2 总黄酮含量测定方法的建立
2． 1 试药的配制 醋酸钾(0． 1 mol /L)溶液的配
制:取醋酸钾 4． 9 g，加水溶解并稀释至 500 ml，即
得;三氯化铝(0． 1 mol /L)溶液的配制:取三氯化铝
12． 1 g，加水溶解并稀释至 500 ml，即得;芦丁对照
品(0． 2 mg / ml)溶液的配制:精密称取芦丁对照品
10． 0 mg，加甲醇溶解，转入 50 ml容量瓶中，用甲醇
稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液;提取物溶液的
制备:称取适量地锦草 5 g，加 75%乙醇 50 ml 回流
提取 2 次，每次 1 h，合并提取液，过滤，浓缩至浸膏，
基金项目: 山西医科大学学生创新基金资助项目(45)
·239· J Shanxi Med Univ，Dec 2012，Vol 43 No 12
取浸膏 0． 12 g，加 60%乙醇溶解并稀释至 50 ml，即
得。
2． 2 测定波长的选择
2． 2． 1 芦丁对照品紫外扫描 精密量取对照品溶液
1 ml，置 25 ml 容量瓶中，加醋酸钾(0． 1 mol /L)3
ml、三氯化铝(0． 1 mol /L)2 ml，用 60%乙醇稀释至
刻度，摇匀即得。以不加对照品的上述溶液为参比，
按照紫外 －可见分光光度法(2005 版《中国药典》一
部附录 VA)在 300 － 600 nm 波长范围内扫描。结
果表明，芦丁标准品在 410 nm处有最大吸收。
2． 2． 2 提取物溶液紫外扫描 精密量取提取物溶
液 1 ml，同 2． 2． 1，制得提取物溶液。以不加提取物
溶液的上述溶液为参比，按照紫外 －可见分光光度
法(2005 版《中国药典》一部附录 VA)在 300 － 600
nm波长范围内扫描。结果是提取物未显色时在
410 nm处无吸收，而显色后在此处有明显吸收，所
以可以在 410 nm处进行紫外测定。
2． 3 标准曲线的建立 精密量取对照品溶液 0． 5，
1． 0，2． 0，3． 0，4． 0，5． 0，8． 0，10． 0 ml分别置于 50 ml
容量瓶中，同 2． 2． 1 制得样品液。不加对照品的上
述溶液作为参比液。在 410 nm 处测定并记录吸光
度值。得回归方程:Y = 0． 023 8X － 0． 021 9，r =
0． 999 9(n = 9) ，表明芦丁浓度在 2． 12 － 42． 4 μg /
ml范围内与吸光度值线性关系良好。
2． 4 精密度考察 精密量取对照品溶液 5． 0 ml，按
上述 2． 3 项下测定方法连续测定 5 次，记录吸光度
值，试验结果 RSD =0． 42%，表明精密度良好。
2． 5 稳定性考察 精密量取提取物溶液 2． 0 ml，于
0，1，2，3，4，5 h，按上述 2． 3 项下测定方法测定 6
次，记录吸光度值，计算提取物溶液浓度。试验结果
RSD =0． 44%，表明样品在 5 h内稳定性良好。
2． 6 重现性考察 精密量取提取物溶液 2． 0 ml，共
5 份，按上述 2． 3 项下测定方法测定，记录吸光度
值，计算提取物溶液浓度。试验结果 RSD =0． 30%，
表明重现性良好。
2． 7 回收率试验 精密量取提取物溶液 2． 0 ml，按
上述 2． 3 项下测定方法测定，记录吸光度值，计算回
收率。结果是平均回收率为 102． 82%，RSD =
1． 2%。结果表明，本法具有良好的回收率。该方法
可作为地锦草中总黄酮的含量测定方法。
3 地锦草总黄酮提取工艺考察与结果
考察不同提取方法即乙醇回流提取法、水回流
提取法、乙醇超声提取法，对地锦草中有效成分总黄
酮含量提取的影响(总黄酮的含量测定采用紫外 －
可见分光光度法，所有提取液回收乙醇或水后，都在
80 ℃真空干燥得干浸膏，计算总黄酮含量) ，在此基
础上，采用正交试验优选最佳提取工艺。
3． 1 几种提取方法的比较
3． 1． 1 乙醇回流提取法 称取地锦草粗粉 5． 0 g，
加入 75%乙醇 50 ml，在 90 ℃水浴锅上回流提取 1
h，回流提取 3 次。总黄酮含量为 10． 6%［总黄酮含
量(%)=总黄酮提取量 ÷干浸膏量 × 100%］。
3． 1． 2 水回流提取法 称取地锦草粗粉 5． 0 g，加
水 50 ml，在电热套上回流提取 1 h，回流 3 次，总黄
酮含量为 6． 6%。
3． 1． 3 乙醇超声提取法 称取地锦草粗粉 5． 0 g，
加 75%乙醇 50 ml，在超声仪上 40 ℃提取 1 h，提取
3 次。计算总黄酮含量为 4． 5%。
综合分析以上 3 种提取法，结果采用乙醇回流
提取时，总黄酮含量最高，所以选择用乙醇回流提取
地锦草中总黄酮。
3． 2 乙醇回流提取工艺考察
3． 2． 1 乙醇回流提取单因素考察
3． 2． 1． 1 乙醇浓度对总黄酮提取效果的影响 称取
地锦草粗粉 5． 0 g，各组分别加入 35%，55%，65%，
75%，85%，95%乙醇 50 ml，在 90 ℃水浴锅上回流提
取 1 h，回流提取 3 次。计算总黄酮含量。结果显示
75%乙醇溶液的提取率高。所以初步确定以 75%乙
醇为提取溶剂。
3． 2． 1． 2 75%乙醇用量对总黄酮提取效果的影响
称取地锦草粗粉 5． 0 g，各组分别加入 5，10，15，
20，25 倍的 75%乙醇提取，在 90 ℃水浴锅上回流提
取 1 h，回流提取 3 次。计算总黄酮含量。结果是乙
醇用量 5 倍时，总黄酮含量最低;乙醇用量达 15 倍
以上后，提取效果变化不大。所以初步确定提取溶
剂用量为 15 倍的 75% 乙醇溶液。
3． 2． 1． 3 提取时间对总黄酮提取效果的影响 称
取地锦草粗粉 5． 0 g，各组加入 75%乙醇 75 ml，在
90 ℃水浴锅上回流提取 0． 5，1，1． 5，2，2． 5 h，回流
提取 3 次。计算总黄酮含量。结果 1． 5 h 后提取效
果较好。所以初步确定提取时间为 1． 5 h。
3． 2． 2 正交试验优选乙醇提取工艺 从单因素考
察中可看出各因素对总黄酮提取效果有一定的影
响，选择了乙醇浓度、提取时间、溶剂用量、提取次数
4 因素，以总黄酮含量及其提取率为指标，设置了 L9
(34)正交试验。因素水平见表 1，实验方案及结果
·339·山西医科大学学报，2012 年 12 月，第 43 卷 第 12 期
见表 2 － 4。
表 1 因素水平表
Tab 1 Factors and levels of orthogonal test
水平 乙醇浓度 A / % 溶剂倍数 B 回流次数 C 提取时间 D /h
1 55 10 1 1
2 65 15 2 1． 5
3 75 20 3 2
表 2 正交试验结果
Tab 2 Results of orthogonal test
试验号 A B C D 总黄酮含量 /% 总黄酮提取率 /%
1 1 1 1 1 7． 74 1． 488
2 1 2 2 2 7． 79 1． 924
3 1 3 3 3 7． 89 2． 353
4 2 1 2 3 7． 55 2． 084
5 2 2 3 1 7． 96 1． 831
6 2 3 1 2 8． 54 1． 764
7 3 1 3 2 10． 20 1． 782
8 3 2 1 3 11． 77 2． 767
9 3 3 2 1 10． 31 3． 209
总黄酮含量 K1 23． 421 25． 491 28． 050 26． 010
K2 24． 051 27． 519 25． 650 26． 529
K3 32． 280 26． 739 26． 049 27． 210
极差(R) 2． 953 0． 676 0． 800 0． 400
总黄酮提取率 K1 5． 766 5． 355 6． 018 6． 528
K2 5． 679 6． 522 7． 218 5． 469
K3 7． 758 7． 326 5． 967 7． 203
极差(R) 0． 693 0． 657 0． 417 0． 578
总黄酮含量(%)=总黄酮提取量 ÷干浸膏量 × 100%;总黄酮提取率(%)=总黄酮量 ÷地锦草粗分量 × 100%
表 3 总黄酮含量方差分析表
Tab 3 Variance analysis of the content of total flavonoids
因素 偏差平方和 自由度 F值 F临界值 显著性
A 16． 292 2 67． 602 19． 000 P ＜ 0． 05
B 0． 699 2 2． 900 19． 000 P ＞ 0． 05
C 1． 102 2 4． 573 19． 000 P ＞ 0． 05
D 0． 241 2 1． 000 19． 000 P ＞ 0． 05
误差 0． 24 2
结果影响总黄酮含量的因素大小为 A ＞ C ＞ B
＞ D，影响因素最大的为乙醇浓度，以总黄酮含量为
指标可确定最佳组合为 A3B2C1D3。
表 4 总黄酮提取率方差分析表
Tab 4 Variance analysis of extraction rate of total flavonoids
因素 偏差平方和 自由度 F值 F临界值 显著性
A 0． 922 2 2． 760 19． 000 P ＞ 0． 05
B 0． 655 2 1． 961 19． 000 P ＞ 0． 05
C 0． 334 2 1． 000 19． 000 P ＞ 0． 05
D 0． 509 2 1． 524 19． 000 P ＞ 0． 05
误差 0． 33 2
·439· J Shanxi Med Univ，Dec 2012，Vol 43 No 12
射频深部热疗联合胸腔注射重组人白介素 －2 治疗肺癌癌性胸水 34 例临床观察
杨文慧， 赵和平* ， 贾军梅， 张革红 (山西医科大学第一临床医学院肿瘤科， 太原 030001; * 通讯作者，E-
mail:zhpyx168@ 126． com)
摘要: 目的 观察射频深部热疗联合胸腔注射重组人白介素 － 2 治疗肺癌癌性胸水的疗效。 方法 68 例肺癌合并癌性胸
水患者随机分为观察组(n = 34)和对照组(n = 34)。观察组患者经中心静脉导管行胸腔闭式引流术放尽胸水后，胸腔内注入
重组人白介素 － 2 后进行热疗;对照组患者经中心静脉导管行胸腔闭式引流术放尽胸水后，单纯胸腔注射重组人白介素 － 2
治疗。观察两组的胸水消退情况、KPS评分(Karnofsky功能状态评分标准)变化及不良反应。 结果 对照组胸水改善总有
效率为 64． 7%(22 /34) ，观察组为 88． 2%(30 /34) ，两组比较差异有统计学意义(P ＜ 0． 05) ;治疗后 KPS评分变化，治疗组优于
对照组，差异有统计学意义(P ＜ 0． 05) ;两组治疗前后均未出现血液系统反应及肝、肾功能损害，治疗期间，两组患者仅有少部
分出现低热、皮下脂肪硬结不良反应，两组不良反应发生率比较差异无统计学意义(P ＞ 0． 05)。 结论 射频深部热疗联合
胸腔注射重组人白介素 － 2 治疗肺癌癌性胸水疗效较好，且未出现明显不良反应。
关键词: 射频深部热疗; 重组人白介素 － 2; 癌性胸水
中图分类号: R730． 6 文献标志码: A 文章编号: 1007 － 6611(2012)12 － 0935 － 03 DOI:10． 3969 /J． ISSN． 1007 － 6611． 2012． 12． 015
恶性胸水是恶性肿瘤晚期才出现的并发症，导
致胸水中前 3 位的恶性肿瘤分别为肺癌、乳腺癌、淋
巴瘤，其中由肺癌引起的恶性胸水最为常见，占恶性
胸水病因的 24% － 42%［1］。恶性胸水严重地影响
病人的呼吸功能，增加患者痛苦，降低生活质量，而
且恶性胸水提示预后不良，影响患者生存时间。胸
腔内注射药物是治疗恶性胸水最常见的方法之一，
但存在疗效不稳定，药物不良反应大等问题。近年
结果影响总黄酮提取率的因素大小为 A ＞ B ＞
D ＞ C，影响因素最大的为乙醇浓度，以总黄酮提取
率为指标确定的最佳组合为 A3B3C2D1，综合以上两
种评价指标及单因素试验结果最终确定组合为
A3B2C2D3。
3． 2． 3 优化方案验证 按 A3B2C2D3 进行 3 次平行
实验，即称取地锦草粗粉 5． 0 g，加入 75%乙醇 75
ml 在 90 ℃水浴锅上回流提取 2 h，回流提取 2 次，
合并提取液，提取液过滤后回收乙醇，然后在 80 ℃
真空干燥得干浸膏。计算总黄酮含量及提取率。总
黄酮的含量达到 11． 6%，提取率为 2． 588%，表明
A3B2C2D3 为最优提取方案。
4 讨论
总黄酮代表物芦丁与显色剂醋酸钾、三氯化铝
反应后在 410 nm处有最大吸收，地锦草提取液中总
黄酮未加显色剂前在 410 nm处无吸收，而加显色剂
后有明显吸收，而且无空白干扰。所以选择在 410
nm处进行测定。经方法学验证此方法稳定性好，重
复性好，精密度好。
地锦草中有效成分为黄酮类化合物，一般采用
极性大的溶剂提取，所以本实验采用溶剂为水和乙
醇提取比较，提取方法采用回流、超声提取，通过单
因素实验比较最终是乙醇回流提取效果最好［5，6］。
通过正交设计实验，选择乙醇浓度、溶剂用量、提取
时间、回流次数为主要影响因素，以总黄酮含量及提
取率为指标，进行考察，最终得出 75%乙醇、15 倍溶
剂量、每次提取 2 h，回流提取 2 次，提取效果最好。
参考文献:
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作者简介: 杜海红，女，1979 － 04 生，硕士，药剂师．
［收稿日期: 2012 － 06 － 25］
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