全 文 ：2010年 7月 内蒙古大学学报(自然科学版) Jul. 2010第 41卷第 4期 Journal of Inner Mongolia University Vol.41 No.4
　　文章编号:1000-1638(2010)04-0381-03
正交试验优选蒙椴树总黄酮的提取工艺＊
李　娜1 ,田福利1 ,王瑞亭1 , 2
(1.内蒙古大学化学化工学院 , 呼和浩特 010021;2.大唐多伦煤化工有限责任公司 , 内蒙古 多伦 027300)
摘要:研究了蒙椴树中总黄酮的最佳提取条件.采用 L9(34)正交表设计方案进行试验 , 以芦
丁为标准品 ,用紫外-可见分光光度法测定蒙椴树乙醇提取物中的总黄酮含量.结果表明:乙
醇浓度对蒙椴树总黄酮的提取影响较大 ,其他 3 个因素影响程度排序为:提取时间>提取次数
>乙醇用量.10 倍量 95%乙醇 , 提取次数 2 次 ,每次提取时间 3小时为本次实验筛选出的最佳
条件.
关键词:蒙椴树;总黄酮;正交试验
中图分类号:O621.4　　文献标志码:A
　　蒙椴是椴树科(Ti liaceae)椴树属(Ti lia L .)植物 ,别名小叶椴 ,是内蒙古地区典型树种〔1〕 ,椴树
的树皮和根皮用于治疗筋无力 、慢性咳嗽 、关节炎 、风湿等疾病 ,为民间常用药材.欧美则应用椴树花
作发汗剂 、镇静剂 、解热剂等〔2-5〕 ,多种椴树的花和叶被药典收录用于治疗感冒 、发烧等.椴树还有助于
防止动脉硬化 ,心肌梗塞等疾病 ,将椴树蜜添加在酒中 ,可调配成减轻疲劳 ,恢复体力的饮料.目前已
开展了其对心血管系统 、抗炎 、护肝和抗菌抗病毒等作用的研究.椴树中的黄酮苷具有多种生物活性.
它有维生素 P 样作用 ,能降低血管脆性及异常的通透性 ,可用于防治高血压及动脉硬化的辅助治疗
剂.鉴于黄酮类化合物具有的药理活性 ,本文对其提取条件进行实验研究.
1　实验部分
1.1　仪器
UV-120-02型紫外-可见分光光度计(日本岛津),SHZ-C 型水循环式多用真空泵.
1.2　材料
蒙椴树皮和树叶均采自内蒙古林业科学研究院植物园 ,并由张玉凤研究员鉴定树种为 Ti lia
Mongolica Maxim.其他试剂均为分析纯.
1.3　实验方法
1.3.1黄酮的提取方法 精密称取冷冻的蒙椴树皮 5.0g ,按照正交试验表选定的因素和水平用乙醇回
流提取.
1.3.2提取条件的选择 根据黄酮类化合物易溶于乙醇 、热稳定性强等特性 ,选择乙醇为提取溶剂 ,以
总黄酮含量为指标 ,对乙醇浓度 、用量 、提取时间 、提取次数等四个因素进行考察 ,每个因素限定三个
水平 ,根据正交表 L 9(34)安排实验.具体内容见表 1.
＊ 收稿日期:2010-03-10;修回日期:2010-04-09
基金项目:国家自然科学基金资助项目(20562006);内蒙古自然科学基金资助项目(200508010201)
作者简介:李　娜(1980-), 女(蒙古族),内蒙古赤峰市人 , 2006 级硕士研究生.
通信作者:田福利(1958-), 男 ,内蒙古集宁市人 , 教授 ,硕士.研究方向:有机天然产物.
表 1　正交设计因素和水平
Table 1　Facters and levels of orthogonal test
水平 乙醇浓度(%)提取时间(h) 提取次数 乙醇用量
1 50 1 1 10:1
2 75 2 2 20:1
3 95 3 3 40:1
1.3.3标准曲线的绘制 精密称取芦丁标准品 20.0mg 置于 200mL 容量瓶中 ,加 60%乙醇 ,溶解至刻
度 ,摇匀即得标准液 ,精密吸取标准品液 0 ,0.1 ,0.2 ,0.3 , 0.4 , 0.5mL 置于 10.0mL容量瓶中 ,分别加
5%亚硝酸钠溶液 0.3mL ,摇匀放置 6分钟 ,加 10%硝酸铝溶液 0.3mL 摇匀放置 6分钟 ,再加 4%氢
氧化钠溶液 4mL ,最后用 30%的乙醇稀释至刻度 ,摇匀放置 15分钟 ,以蒸馏水为空白对照 ,在 510nm
处测定吸光度.以浓度(C)与吸光度(A)进行线形回归 ,得回归方程为 A=0.0125C-0.0008 , r 2 =
0.9997
1.3.4蒙椴树中总黄酮含量的测定 精密称取 5.0g 蒙椴树皮共九份 ,置于圆底烧瓶中 ,按正交实验进
行加热回流 ,将所得提取物用乙醚萃取 , 合并滤液 , 60%乙醇定容到 250mL.分别从试液中吸取
1.0mL于 10mL 的容量瓶中 ,按实验方法测得吸光度值 ,由回归方程计算蒙椴树皮中总黄酮的含量.
2　结果
2.1　最佳条件的测定
2.1.1直观分析 由表 2中可以看出 ,乙醇浓度对总黄酮的含量影响较大 ,乙醇用量则相对较小 ,各因
素的最优组合确定为 A3 B3C2D 1即为 10倍量 95%乙醇 ,提取次数为 2次 ,每次提取时间为 3小时.
2.1.2 方差分析 由表 3方差分析数据可知乙醇浓度和提取时间对指标均有显著作用 ,乙醇用量无显
著差异 ,这与直观分析结果基本一致.
表 2　正交实验安排及结果
Table 2　Arrangements and results of orthogonal test
实验号 乙醇浓度(A) 提取时间(B) 提取次数(C) 乙醇用量(D) 黄酮含量/ %
1 1 1 1 1 4.81
2 1 2 2 2 6.26
3 1 3 3 3 5.15
4 2 1 2 3 6.73
5 2 2 3 1 7.43
6 2 3 1 2 7.44
7 3 1 3 2 4.60
8 3 2 1 3 6.44
9 3 3 2 1 8.62
Ⅰ 5.407 5.380 6.230 6.953
Ⅱ 7.200 6.710 7.203 6.100
Ⅲ 6.553 7.070 5.727 6.107
Ⅰ 1.802 1.760 2.076 2.318
Ⅱ 2.400 2.237 2.401 2.033
Ⅲ 2.184 2.357 1.909 2.037
R 1.793 1.690 1.476 0.853
2.2　重复性试验
取 3份冻干的蒙椴树皮各 10克 ,按最佳提取条件平行操作 ,回流提取 ,合并提取液 ,并测定计算
总黄酮的含量 ,结果见表 4.
382 内蒙古大学学报(自然科学版) 2010年
表 3　正交实验方差分析结果
Table 3　ANOVA table of orthogonal test
方差来源 偏差平方和 自由度 统计量 F 均方平方差
乙醇浓度 4.949 2 4.460 2.475
提取时间 4.755 2 4.460 2.378
提取次数 3.381 2 4.460 1.681
乙醇用量 1.445 2 4.460 0.723
表 4　工艺验证试验结果
Table 4　Verifying result of the process test
实验编号 黄酮含量 平均含量 RSD/ %
1 8.52
2 8.66 8.73 0.4874
3 9.02
3　结论
通过正交试验结合紫外分光光度法测定蒙椴树中总黄酮的含量 ,通过优化实验提取 , 10 倍量
95%乙醇 ,提取次数为 2次 ,每次提取时间为 3小时 ,该方法提取率较高对今后开发利用蒙椴树中的
总黄酮具有指导意义.
参考文献:
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(责任编委　边占喜)
Orthogonal Test fo r Optimizing the Ex traction T echnology of
T otal Flavonoids from Tilia Mongolica Maxim
LI Na
1 ,TIAN Fu-li1 ,WANG Rui-ting1 , 2
(1.School o f Chemistry and Chemical Engineering , Inner Mongol ia Universi ty ,
Hohhot 010021 ,China;
2.Datang Duolun Coal Chem ical Industry Co., Ltd.,Duolun 027300 ,China)
　　Abstract:Optimal ex t raction condi tion of the to tal f lavonoids f rom the Ti lia Mongolica Maxim
w as studied.Acco rding to the design propo sal of L9(34)o rthogonal table , the experiment was per-
fo rmed.With a Rutin as a standard substance , to tal f lav onoids content o f the ex t racts f rom Ti lia
Mongolica Maxim w as measured using UV spect ropho tometry .The results show that ethanol con-
centration had a g reater ef fect on the ex traction , and the othe r three facto rs w ho se inf luence f rom
high to low was ext raction time , ext raction times and ethano l amount.The optimal conditions w ere
as follow s:the 95% ethano l of 10 times amount , tw o times ex traction , and each time fo r 3 hours.
　　Key words:Ti l ia Mongol ica Maxim;to tal flavonoids;o rthogonal test
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