全 文 ：centrations of dihydroouabain (DHO)on NMDA cur-
rent． Results Under either normoxia or hypoxia condi-
tions，DHO and vanadate decreased the NMDA current
in a concentration-dependent manner． However，NM-
DA current densities decreased by different concentra-
tions of DHO were much larger under hypoxia than
those under normoxia． Conclusion The regulation of
NMDA current of cortical neuron after hypoxia may de-
pend mainly on the release of excitatory amino acid，
not the function of the Na +，K + -ATPase．
Key words:Na +，K + -ATPase;NMDA;hypoxia;neu-
ron;whole-cell patch;brain slices
铁包金总黄酮体内对 S180 实体瘤的抑制作用
陈小龙1，滕红丽2，沈玉霞1，梅之南1
(1．中南民族大学药学院，湖北 武汉 430074;2．广西壮族自治区民族医药研究院·广西壮医医院，广西 南宁 530001)
中国图书分类号:R-332;R284． 1;R392． 3;R73-354;R979． 1
文献标识码:A 文章编号:1001 － 1978(2011)01 － 0121 － 04
摘要:目的 研究铁包金总黄酮对小鼠移植性肿瘤 S180 的
生长抑制作用，并探讨其可能的作用机制。方法 用动物移
植性肿瘤在体实验法，观察抑瘤率、胸腺脾脏及肝脏指数;检
测血清中 SOD、MDA变化;病理切片观察瘤细胞生长及病理
形态变化情况;免疫组化检验肿瘤组织中 p53、TNF-α、
Caspase-3 蛋白的表达。结果 ① 铁包金总黄酮高、中、低剂
量组的抑瘤率分别 50. 35%、35. 66%、23. 08%，阳性对照组
的抑瘤率为 83. 22%，各组小鼠的胸腺、脾脏、肝脏指数与空
白组比较差异无显著性(P ＞ 0. 05)，阳性对照组与空白组比
较明显降低(P ＜ 0. 01);② 铁包金总黄酮各组升高小鼠血清
的 SOD值，且降低其 MDA 值，具有一定的量效关系。阳性
组降低小鼠的 SOD值，且升高 MDA 值。与空白组相比差异
有显著性(P ＜ 0. 01);③ 病理切片显示给药各组和阳性组坏
死面积比空白组大;④ 免疫组化显示高、中、低各组 p53 蛋
白表达依次升高，TNF-α 和 Caspase-3 蛋白表达依次降低。
结论 铁包金总黄酮通过清除氧自由基和调节 p53，TNF-α
和 Caspase-3 蛋白的表达来抑制肿瘤生长。
关键词:铁包金;总黄酮;S180;SOD;MDA;病理切片;免疫组化
铁包金为鼠李科植物老鼠耳的根。药材呈干燥
根圆柱状，粗细不一，商品多锯成小段或切成厚片。
栓皮结实，黑褐色或棕褐色，有网状裂隙及纵皱。质
坚硬，断面本部甚大，质纹细致，暗黄棕色至橙黄色。
产广东、福建等地。具有化瘀血，祛风湿，消肿毒。
治肺痨久咳、喀血、吐血、跌打损伤、风湿疼痛、痈肿、
收稿日期:2010 － 09 － 06，修回日期:2010 － 11 － 10
基金项目:广西科学基金资助课题(No 0991006)
作者简介:陈小龙(1988 －)，男，硕士，研究方向:药理学，E-mail:cxi-
aodragon@ 163． com;
梅之南(1970 － )，男，博士，教授，通讯作者，Tel:027-
67843220，E-mail:meizhinan@ 163． com
荨麻疹等症。临床上用于治疗小儿胃纳呆滞、精神
病、慢性气管炎等。经中南民族大学民族药物研究
所天然药化分析，铁包金的主要成分是黄酮类化合
物，还包括蒽醌二聚体、木质素等。近年来，对黄酮
类化合物的研究表明:黄酮类化合物具有抗心血管
疾病，抗炎及提高机体免疫力，雌激素样等作用。我
们对铁包金的抗肿瘤作用进行了实验研究，对铁包
金所含物质进行了初步测定，使用 S180 小鼠模型进
行了体内抗肿瘤试验。现将研究结果报道如下。
1 材料
1． 1 瘤株和动物 小鼠 S180 瘤株，中国典型培养
物保藏中心(武汉大学保藏中心);SPF 级昆明种小
鼠，武汉生物制品研究所，动物许可证号:SCXK
(鄂)2008 － 0003。
1． 2 药品及试剂 实验药物铁包金采于广西，经中
南民族大学民族药物研究所植物分类鉴定为鼠李科
植物铁包金(Berchemia lineata (L)DC［Rhamnus
lineata L］)的根。铁包金药材粉碎，用 8 倍量体积
分数为 70%乙醇加热回流提取 3 次，时间分别为 1、
1、0. 5 h。提取液浓缩，抽滤后蒸干。甲醇溶出，石
油醚萃取除酯，醇部位浓缩既得粗黄酮粉，备用。以
儿茶素为标准品紫外定标曲线法检测其总黄酮含量
为 63. 2%。SOD、MDA试剂盒，南京建成公司;免疫
组化试剂盒，武汉 BOSTER公司。
2 方法
2． 1 铁包金总苷酮对 S180 实体瘤的抑制作用 无
菌条件下取接种 d 7 生长良好的 S180 瘤源动物的
腹水，立即至于灭菌后的锥形瓶中，以注射用生理盐
水按 1 ∶ 3 比例稀释成瘤细胞悬液，并计数调整细胞
浓度为每毫升 2 × 106 个活瘤细胞。取 50 只小鼠，
♂♀各半，每只小鼠右前肢腋下皮下注射接种0. 2 ml。
·121·中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2011 Jan;27(1):121 ～ 4
Tab 1 Influence to S180 tumor-burdened mice tumor growth(珋x ± s，n = 10)
Group Dose /mg·kg －1·d －1
Weight /g
Before After
Tumor weight /g Inhibition rate /%
Control － 21． 63 ± 0． 92 23． 62 ± 1． 69 1． 43 ± 0． 21 －
Cisplatin 2． 25 20． 14 ± 0． 85 15． 61 ± 1． 32＊＊ 0． 24 ± 0． 14＊＊ 83． 22
High 480 20． 62 ± 0． 99 23． 24 ± 1． 71 0． 71 ± 0． 21＊＊ 50． 35
Middle 240 20． 01 ± 1． 08 22． 03 ± 1． 51 0． 92 ± 0． 28＊＊ 35． 66
Low 120 21． 23 ± 1． 47 23． 41 ± 1． 19 1． 10 ± 0． 11＊＊ 23． 08
＊＊P ＜ 0. 01 vs control
Tab 2 Influence to index of thymus，spleen and liver(珋x ± s，n = 10)
Group Dose /mg·kg －1·d －1 Index of thymus /mg·g － 1 Index of spleen /mg·g － 1 Index of liver /mg·g － 1
Control － 3． 61 ± 1． 01 14． 02 ± 1． 20 61． 95 ± 6． 56
Cisplatin 2． 25 0． 93 ± 0． 30＊＊ 4． 07 ± 0． 47＊＊ 48． 39 ± 3． 30＊＊
High 480 3． 99 ± 0． 88 12． 25 ± 1． 18 54． 58 ± 6． 31
Middle 240 3． 61 ± 0． 72 13． 09 ± 1． 97 61． 36 ± 6． 23
Low 120 3． 62 ± 0． 76 13． 39 ± 0． 52 61． 40 ± 6． 83
＊＊P ＜ 0. 01 vs control
接种后次日称重，随机分成 5 组，空白对照组(给予
等体积蒸馏水)、阳性对照组(顺铂组浓度 2. 5 mg·
kg －1，腹腔注射)、铁包金总黄酮高、中、低剂量组
(剂量分别为 480、240、120 mg·kg －1)，连续给药 10
d。末次给药 24 h后称重，脱臼处死动物，剪开肿瘤
部位，完整剥离瘤块，用滤纸吸净其上液体，称取瘤
块重量，计算抑瘤率。并且分离胸腺、脾脏和肝脏，
精密称重，计算胸腺、脾脏和肝脏指数。
2． 2 测量血液的 SOD 值和 MDA 值 处死前，摘
除眼球取血，离心后保留血清备用。按照试剂盒说
明书，预试验后取 30 μl 测 SOD 值，取 100 μl 测
MDA值。
2． 3 HE染色和免疫组化 瘤块称重后，立即置于
4%多聚甲醛中固定 4 d，之后置于 30%的蔗糖-TBS
缓冲液中脱水至肿瘤沉底。修整后石蜡切片(厚 5
μm)，常规 HE 染色观察。结果判定:低倍镜下(×
40)观察坏死面积，按坏死面积大小分级判断为灶
状坏死(+)、小片状坏死()、大片状坏死()。
冰冻切片(20 μm)，步骤按试剂盒说明，DAB 显色，
梯度乙醇脱水，中性树胶封片。根据检测的目标蛋
白一抗分别 p53 单克隆抗体，TNF-α 单克隆抗体，
Caspase-3 单克隆抗体，均以棕黄色的强弱程度为观
察指标。
2． 4 数据统计分析 数据以 珋x ± s 表示，用 SPSS
10. 0 统计程序，以 t检验两样本均数间差异。
3 结果
3． 1 铁包金总黄酮对 S180 实体瘤的抑制作用
Tab 1 表明，与空白对照组比较，铁包金总黄酮的
高、中、低剂量组和顺铂组皆有抑制 S180 肉瘤生长
作用(P ＜ 0. 01);铁包金总黄酮组随给药剂量的增
大，抑瘤作用逐渐增强，且显示出明显的剂量依赖
性，顺铂组的抑瘤效果优于给药组(P ＜ 0. 01)，但顺
铂组对于小鼠体重增长有明显的影响，与空白对照
组相比差别有显著性(P ＜ 0. 01)，说明顺铂在抑制
肿瘤生长的同时对机体有明显的毒副作用。而铁包
金总黄酮各给药组的小鼠体重与空白组相比差别无
显著性(P ＞ 0. 05)。Tab 2 表明，与空白对照组相
比，顺铂组的小鼠胸腺、脾脏和肝脏指数明显降低，
且差别有显著性(P ＜ 0. 01);铁包金总黄酮各给药
剂量组的小鼠胸腺、脾脏和肝脏指数与顺铂组比较
差别有显著性(P ＜ 0. 01)，与空白组比较差别无显
著性(P ＞ 0. 05)。
3． 2 铁包金总黄酮对 S180 小鼠体内 SOD和MDA
水平的影响 Tab 3 表明，铁包金总黄酮各组升高
小鼠的 SOD值，且降低其 MDA值，具有一定的量效
关系。阳性组降低小鼠的 SOD 值，且升高其 MDA
值。与空白组相比差异有显著性(P ＜ 0. 01)。
Tab 3 Influence to SOD and MDA in plasma(珋x ± s，n = 10)
Group
Dose
/mg·kg － 1·d － 1
SOD /kU·L －1 MDA /μmol·L －1
Control － 44． 59 ± 1． 20 9． 14 ± 0． 63
Cisplatin 2． 25 16． 93 ± 1． 16＊＊ 10． 63 ± 1． 03＊＊
High 480 54． 11 ± 0． 20＊＊ 7． 41 ± 0． 18＊＊
Middle 240 51． 77 ± 0． 89* 7． 93 ± 0． 35*
Low 120 49． 32 ± 1． 25* 8． 11 ± 1． 10*
* P ＜ 0. 05，＊＊P ＜ 0. 01 vs control
3． 3 HE 染色和免疫组化 低倍镜(× 40)观察:
高、中剂量组可见组织大片坏死。低剂量组和 NS
组坏死区域较小，细胞生长活跃。顺铂组则坏死区
域较大，细胞处于凋亡状态(Fig 1)。结果见 Tab 4。
·221· 中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2011 Jan;27(1)
Fig 1 HE Dyeing results(× 40) A:High;B:Middle;C:Low;D:Control;E:Cisplatin
Fig 2 Immnohistochemical results(× 200) A:High;B:Middle;C:Low;D:Control;E:Cisplatin
以细胞内棕黄色强弱来判断肿瘤细胞内 p53，
TNF-α和 Caspase-3 蛋白表达量的变化。结果显示
高、中、低各组 p53 蛋白表达依次升高，TNF-α 和
Caspase-3 蛋白表达依次降低。见 Fig 2。
Tab 4 Pathological statistical results(n = 10)
Group
Dose
/mg·kg －1·d －1
Necrosis
(+) () ()
Group － 7 2 1
Cisplatin 2． 25 1 1 8
High 480 0 1 9
Middle 240 1 7 2
Low 120 6 2 2
4 讨论
铁包金是中国传统一味药材，具有消肿解毒，止
血镇痛，祛风除湿等功效。本文对其抗肿瘤效果进
行了研究，其对小鼠荷瘤具有很好的抑制作用，并且
对小鼠机体没有伤害，没有顺铂的毒副作用。近年
来国内外对自由基的研究发现，自由基产生过多或
清除能力下降，与肿瘤的发生发展密切相关。各种
理化致癌因子在体内经过代谢活化形成自由基形
式，并与其它自由基一起富集于脂质细胞膜周围，引
起脂质过氧化，破坏细胞的 DNA 而产生癌变。同
时，自由基作用于脂质产生的过氧化物及其产物丙
二醛等既能致癌，也能导致突变。由此，清除自由基
成为一条有效的抗癌、抑癌手段。MDA(丙二醛)是
脂质过氧化反应链式终止阶段产生的小分子产物:
脂质过氧化物(LOOH)形成的环状过氧化物可断裂
形成烯醛、丙二醛，其含量可以间接反映自由基的产
生情况和机体组织细胞的脂质过氧化程度。脂质过
氧化越活跃，则生成的 MDA 越多。SOD 是有效清
除超氧化物阴离子自由基的一类重要的抗氧化酶，
能阻止由 O2 －启动的自由基链锁反应。SOD的活力
反映了机体清除氧自由基的能力。本实验主要测定
了 S180 荷瘤小鼠血浆 MDA和 SOD含量，显示铁包
金总黄酮能降低 S180 荷瘤小鼠血浆 MDA，升高
SOD含量。提示铁包金总黄酮抗肿瘤机制可能与
清除自由基有一定关系。p53 是一种肿瘤抑制基
因，p53 基因可以阻滞细胞周期、促进细胞凋亡、维
持基因组稳定、抑制肿瘤血管生成等作用。在所有
恶性肿瘤中，50%以上会出现该基因的突变。TNF-
α具有一定的杀死癌细胞作用。很多的凋亡信号转
导最后都是由 Caspase 来导致最后的凋亡的，凋亡
·321·中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2011 Jan;27(1)
包括内源性线粒体细胞色素释放途径和外源性死亡
受体途径，而 Caspase-3 是最终凋亡执行分子，其表
达量可以显示细胞凋亡的状态。经免疫组化研究可
知，铁包金总黄酮能降低小鼠体内 p53、Caspase-3，
提升 TNF-α 蛋白的表达来抑制肿瘤的生长。其具
体机制有待进一步研究。
参考文献:
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Research on the in vivo anti-tumor effect
of flavone from Berchemia lineata(L)DC
CHEN Xiao-long1，TENG Hong-li2，SHEN Yu-xia1，MEI Zhi-nan1
(1． College of Pharmacy，South-Central University for Nationalities，Wuhan 430074，China;
2． Institute of National Medicine of Guangxi，Guangxi 530001，China)
Abstract:Aim To study the anti-tumor effects of the
flavone from Berchemia lineata(L)DC in vivo and dis-
cuss its possible mechanisms． Methods A total of 50
cases of S180 mice were assigned randomly into 5
groups:saline group(control)，Cisplatin group(positive
control)and flavone high，middle and low group． The
anti-tumor effect on internal organ of mice was ob-
served to study the tumor inhibition rate in different
groups． Influence of flavone on mouse immune system
was studied by comparing the index of thymus，spleen
and liver． SOD ＆ MDA was detected in serum． The
growth and patho-morphologic changes of tumor cells
were observed through pathological sections． The pro-
tein expression level of p53，TNF-α and Caspase-3
were detected by immunohistochemistry． Results ①
The inhibitory rate was 50. 35%，35. 66%，23. 08% in
the flavone group and 83. 22% in the positive control
group respectively． Mouse thymus，spleen，liver index in
flavone group had no significant difference compared
with that of the control group(P ＞ 0. 05)． However，
positive thymus spleen，liver index in control group had
a significant decrease compared with that in other
groups (P ＜ 0. 01)． ② The flavone group of mouse
SOD significantly increased and MDA reduced． ③ Pa-
thology revealed that necrotic area of dose groups and
the positive group was larger than the control group．④
Immunohistochemistry showed that p53 protein expres-
sion was increased in dose groups，TNF-α and Caspase-
3 protein expression decreased gradually． Conclusion
The flavone can scanvenge oxygen free radicals and
adjust express of p53，TNF-α and Caspase-3 to sup-
press tumor growth．
Key words:Berchemia lineata(L)DC;flavone;S180;
SOD;MDA;pathological section;immunohistochemistry
◇消 息◇
《中国药理学通报》再获“中国百种杰出学术期刊”称号
中国科技论文统计与分析结果新闻发布会 2010 年 11 月 26 日在北京国际会议中心举行，中国科技信息所在会上发布了
“中国科技论文统计结果———2010 中国科技期刊相关指标”及《中国科技核心期刊引证报告(即 CJCR)》，《中国药理学通报》
影响因子 1. 266，基金论文比 0. 9，总分 81. 1 三项重要指标名列我国药学类期刊第一名，并被评为 2009 年“中国百种杰出学术
期刊”，总评分列全部 1946 种中国科技核心期刊第 42 位，比去年上升了 34 位。
(黄河胜)
·421· 中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2011 Jan;27(1)