全 文 :2013 年 8 月 第 15 卷 第 8 期 中国现代中药 Modern Chinese Medicine Aug. 2013 Vol. 15 No. 8
△ [基金项目] 海南医学院科研培育基金(HY2010-015)
* [通讯作者] 符乃光,男,高级工程师,主要从事药物研究工作,Email:funaiguang@ 126. com
倒地铃提取物降血糖作用研究
△
谭银丰,张小坡,李洪福,赖伟勇,李海龙,符乃光*
(海南医学院 海南省热带药用植物研究开发重点实验室,海南 海口 571159)
[摘要] 目的:研究倒地铃不同提取部位降血糖的作用。方法:用高脂高糖饲料喂养加小剂量注射链脲佐菌
素(STZ)方法诱导小鼠 2 型糖尿病模型,用不同剂量的倒地铃不同提取部位进行干预,测定小鼠体重变化、空腹
血糖、口服糖耐量和血清胆固醇(CHO)。结果:各组小鼠体重差异无统计学意义,倒地铃水提取物及 30%醇洗脱
物能显著降低糖尿病小鼠空腹血糖(P < 0. 05) ,提高 1 h葡萄糖耐量(P < 0. 01) ,60%醇洗脱物能提高小鼠 1 h葡萄
糖耐量(P < 0. 01)。结论:倒地铃降血糖作用的主要有效部位为 30%醇洗脱物、60%醇洗脱物。
[关键词] 倒地铃;降糖;提取物
倒地铃 Cardiospermum halicacabum L. 为无患子
科倒地铃属植物,分布于两广、福建、海南等我国
西南地区,广泛生长于旷野田间,在海南民间常用
倒地铃全草熬水作为治疗糖尿病偏方。Chinnadurai
Veeramani等[1]研究了倒地铃叶的乙醇提取物降血糖
作用,发现倒地铃叶乙醇提取物能显著降低血糖和
糖化血红蛋白 HbA1c,增加胰岛素和血红蛋白 Hb,
陈君等[2]对倒地铃全草乙醇提取物的急性毒性和降
血糖作用也进行了初步研究,结果倒地铃乙醇提取
物能明显降低四氧嘧啶和肾上腺素诱导的小鼠急性
糖尿病的血糖值。本文拟根据民间用法经验,用水
提取倒地铃全草,提取物上大孔树脂,以不同浓度
乙醇洗脱,考察不同洗脱部位的降血糖作用,以期
确定倒地铃降血糖作用的有效部位。
1 实验动物、仪器和材料
昆明种小鼠,雄性,18 ~ 22 g,湖南省东创实
验动 物 科 技 服 务 部 提 供,动 物 合 格 证 号:
HNACSDC20120866。高脂高糖饲料由广东医学动物
中心加工提供。
D101 大孔树脂(安徽皖东树脂科技有限公司) ,
安稳血糖测试仪(长沙三诺生物传感技术有限公
司) ,V-650 紫外 -可见分光光度计(日本 JASCO 公
司) ,胆固醇试剂盒(北京北化康泰临床试剂有限公
司)。
倒地铃药材采自海口市周边地区,经海南医学
院药学院生药学教研室曾念开讲师鉴定为无患子科
植物倒地铃 Cardiospermum halicacabum L. 全草。消
渴丸(广州中一药业有限公司,批号:P01317) ,链
脲佐菌素(Sigma S0130-100 mg) ,柠檬酸、柠檬酸
钠为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 试药的制备
称取晒干后切碎的倒地铃 2 kg,加入 50 L水加
热煎煮 2 h,过滤后滤渣再加 50 L 水加热煎煮 2 h,
合并 2 次煎煮液,浓缩至一定体积,留取约 200
mL,其余浓缩液上大孔树脂,依次用 30%,60%,
90%乙醇洗脱,洗脱物蒸发干燥,计算得率依次分
别为 5. 6%,1. 1%,0. 3%。
2. 2 动物实验方法
取 18 ~ 22 g 雄性昆明种小鼠,随机分为空白
组、倒地铃水提物组、30%乙醇洗脱物不同剂量组、
60%乙醇洗脱物不同剂量组、90%乙醇洗脱物不同
剂量组、阳性对照组、模型组,每组 8只。空白组喂
食常规饲料,其他组喂食高脂高糖饲料(饲料配方:
2% 胆固醇、10% 猪油、0. 4% 胆盐、10% 蔗糖、
77. 6%常规饲料混合)。对不同时期小鼠进行称重,
观察体重变化。4 周后,各给药组分别灌胃给予相应
剂量药物,阳性对照组给予消渴丸 1. 0 g·kg -1,空白
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组、模型组灌胃给予等体积 0. 9%氯化钠溶液,每
天给药 1 次,连续给药 3 周。给药第 2 周后空白组
注射 0. 1 mol·L -1柠檬酸 - 柠檬酸钠缓冲液(pH =
4. 5) ,其余各组腹腔注射用缓冲液配制的链脲佐菌
素(STZ)75 mg·kg -1,注射 STZ 后第 3 天尾静脉取
血测空腹血糖值(FBG)。注射 STZ 后第 6 天,小鼠
禁食 12 h 后,灌胃葡萄糖溶液 2. 5 g·kg -1,1 h 后
尾静脉取血测血糖值(糖耐量试验,GOTT)。注射
后第 7 天,摘眼球取血,4 000 r·min -1离心 10 min,
取血清按试剂盒方法测定血清胆固醇(CHO)含量。
实验过程如图 1 所示,实验数据采用单因素方差分
析,结果见表 1、表 2。
结果表明,小鼠喂食高脂高糖饲料 7 周后,与
喂食正常饲料小鼠比较,体重差异无统计学意义,
倒地铃水提取物及 30%醇洗脱物能显著降低糖尿病
小鼠空腹血糖,提高 1 h 葡萄糖耐量,60%醇洗脱
物能提高小鼠 1 h 葡萄糖耐量,水提取物和 90%醇
洗脱物能降低血清胆固醇。
图 1 动物实验流程
表 1 不同时期各组小鼠体重(珋x ± s,,n = 8)
/ g
组别
剂量(按生
药量计)/
g·kg -1
第 1 天体重 第 28 天体重 第 42 天体重
水提取物 20 20. 03 ± 1. 64 37. 45 ± 3. 77 38. 04 ± 3. 79
30%醇洗 40 18. 24 ± 2. 20 38. 25 ± 2. 36 39. 11 ± 1. 67
脱物 10 18. 28 ± 0. 99 37. 98 ± 2. 78 39. 18 ± 3. 01
2. 5 19. 79 ± 1. 83 35. 09 ± 5. 82 36. 09 ± 5. 72
60%醇洗 40 20. 64 ± 1. 25 38. 93 ± 3. 69 37. 50 ± 3. 86
脱物 10 19. 61 ± 1. 98 39. 79 ± 5. 19 39. 94 ± 4. 33
2. 5 19. 44 ± 1. 61 41. 64 ± 3. 36 42. 06 ± 4. 70
90%醇洗 40 18. 59 ± 1. 80 38. 25 ± 5. 04 39. 75 ± 5. 22
脱物 10 18. 69 ± 2. 64 32. 03 ± 3. 98 33. 62 ± 3. 72
模型 - 19. 49 ± 1. 62 37. 74 ± 3. 29 39. 18 ± 2. 95
消渴丸 1. 0 19. 83 ± 1. 21 37. 08 ± 4. 83 37. 46 ± 5. 29
空白 - 20. 66 ± 0. 69 38. 80 ± 4. 07 38. 98 ± 3. 91
表 2 各组小鼠血糖血脂水平(珋x ± s,n = 8)
组别
剂量(按生
药量计)/
g·kg -1
血糖 /mmol·L -1
空腹 给予葡萄糖后 1h
CHO /
mmol·L -1
水提取物 20 4. 42 ± 0. 43* 7. 61 ± 0. 86** 3. 83 ± 1. 07*
30%醇洗 40 4. 21 ± 0. 67* 7. 33 ± 2. 01** 4. 64 ± 0. 76
脱物 10 5. 21 ± 0. 74 7. 84 ± 1. 14** 4. 66 ± 0. 58
2. 5 5. 78 ± 1. 21 7. 91 ± 2. 01** 4. 95 ± 1. 03
60%醇洗 40 4. 62 ± 0. 75 7. 12 ± 1. 49** 4. 37 ± 0. 95
脱物 10 5. 14 ± 0. 78 8. 19 ± 1. 35** 4. 40 ± 0. 62
2. 5 5. 30 ± 0. 72 7. 54 ± 0. 83** 4. 18 ± 0. 94
90%醇洗 40 5. 71 ± 0. 85 9. 18 ± 2. 95 3. 67 ± 0. 85*
脱物 10 4. 82 ± 1. 09 10. 56 ± 1. 97 3. 74 ± 1. 57
模型 - 5. 63 ± 1. 15# 10. 98 ± 1. 27# 5. 37 ± 1. 66#
消渴丸 1. 0 4. 23 ± 1. 09* 7. 11 ± 1. 59** 2. 72 ± 0. 56**
空白 - 4. 02 ± 0. 61 6. 74 ± 0. 67 2. 64 ± 0. 30
注:与模型组比较,* P < 0. 05,**P < 0. 01,与空白组比较,#P <
0. 05,# P < 0. 01
3 结论与讨论
研究前期通过预试验研究了 3 种不同剂量的
倒地铃水提物对糖尿病模型小鼠血糖的作用,确
定了倒地铃水提物 10 g·kg - 1具有降低糖尿病模
型小鼠血糖作用。进一步研究倒地铃水提物上大
孔树脂不经水洗脱直接用不同浓度乙醇洗脱后,
其降血糖主要有效部位集中在 30%乙醇洗脱物、
60%乙醇洗脱物;实验结果显示 90%乙醇洗脱物
能降低小鼠血清胆固醇,但该部位得率非常低
(0. 3%) ,其降血脂作用潜在开发意义不大。文
献报道从倒地铃中分离得到的化合物较少,目前
已发现木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷、金圣草黄
素、棕榈酸等成分[3],为进一步阐明倒地铃降血
糖作用的物质基础,有必要进行进一步的化学分
离及药效学验证研究。
高热量食物加低剂量 STZ 注射小鼠是较为常用
的 2 型糖尿病模型造模方法,但是该造模方法不适
用于雌性小鼠[4-5],同时还要注意的是大部分高热量
饲料都添加大量的油脂,使饲料变得松软油腻,不
太适合小鼠的口味及啮齿类动物磨牙的习性,因此
在饲养时常常混搭少量常规饲料,作者印证了前人
的研究[6]。
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参考文献
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[5] 王嘉惠,沈小玲,符崇威,等.高脂喂养联合链脲佐菌素
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鼠 2 型糖尿病模型研究[J].中药药理与临床,2007,23
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Study on Hypoglycemic Effect of Cardiospermum halicacabum L. Extracts
TAN Yin-feng,ZHANG Xiao-po,LAI Wei-yong,LI Hai-long,FU Nai-guang*
(Hainan Medical University,Hainan Provincial Key Laboratory of R&D of Tropical Herbs,Haikou 571101,China)
[Abstract] Objective:To study the hypoglycemic activity of different extractive fraction from Cardiospermum
halicacabum L. Methods:Type 2 mice diabetic model were induced by high-fat,high-sugar fed and low dose
streptozotocin(STZ)intraperitoneal injection. Every group mices were treated with different extractive fraction of
Cardiospermum halicacabum L. , the body weight, fasting blood-glucose and glucose tolerance were
determined. Results:Compared with control group,the body weight had no significant difference. Compared with
model group,water extract and 30% ethanol elution significantly reduced fasting blood-glucose(P < 0. 05) ,increased
glucose tolerance(P < 0. 01) ,60% ethanol elution significantly increased glucose tolerance(P < 0. 01). Conclusion:
The hypoglycemic active fraction of Cardiospermum halicacabum L. are 30% and 60% ethanol elutions.
[Key words] Cardiospermum halicacabum;Hypoglycemic;Extracts
(收稿日期 2012-12-20)
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