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第 34卷第 5期 湖南农业大学学报(自然科学版) Vol.34 No.5
2008 年 10 月 Journal of Hunan Agricultural University (Natural Sciences) Oct．2008
文章编号：1007-1032(2008)05-0572-04
UV和 HPLC法测定地锦草不同部位中
总黄酮和槲皮素的含量
江 超，陈小军，张建超，刘 伟，王 慧，孙志良*
(湖南农业大学 动物医学院，湖南 长沙 410128)
摘 要： 采用紫外分光光度法(UV)测定地锦草不同部位中总黄酮的含量；采用高效液相色谱法(HPLC)测定地锦
草不同部位中槲皮素的含量．结果表明，总黄酮在 2.0 ~16.0 µg(R=0.999)时线性关系良好，平均回收率为 102.2%；
HPLC法测槲皮素在 0.584 ~29.190 µg(R=0.999)时线性关系良好，平均回收率为 99.6%．地锦草不同部位中总黄酮
和槲皮素含量由高到低依次为叶、全草、种子、茎、根，其中叶的总黄酮和槲皮素含量分别为 43.25 mg/g和 17.86
mg/g．
关 键 词：地锦草；总黄酮； 槲皮素；紫外分光光度法；高效液相色谱法
中图分类号：S859.4 文献标识码：A

Determination of contents of total flavonoids and quercetin at different parts of
Euphorbiae humifusae by UV and HPLC
JIANG Chao，CHEN Xiao-jun，ZHANG Jian-chao，LIU Wei，WANG Hui，SUN Zhi-liang*
(College of Veterinary Medicine，HNAU，Changsha 410128，China)
Abstract：Total flavonoids were determined by ultraviolet spectrophotometry(UV) and quercetin by high performance
liquid chromatography(HPLC) for comparing its contents at different parts of Euphorbiae humifusae. Results indicated
the standard curve of total flavonoids was linear in the range of 2.0~16.0 µg(R=0.999)and its average recovery ratio was
102.2%；The standard curve of the quercetin was linear in the range of 0.584~29.190 µg(R=0.999)and the average
recovery ratio was 99.6%．The contents of total flavonoids and quercetin at different parts of Euphorbiae humifusae
from high to low was：leaf，entire plants，seeds，caudex and roots. In leaf，contents of total flavonoids and quercetin
reached 43.25 mg/g and 17.86 mg/g respectively．
Key words：Euphorbiae humifusae；total flavonoids；quercetin；ultraviolet spectrophotometry(UV)；high performance
liquid chromatography(HPLC)

地锦草(Euphorbiae humifusae)，又名血见愁、
红茎草、铺地锦、奶汁草等，属大戟科植物，是目
前应用较多的一种中草药，主要含有鞣质、黄酮、
没食子酸等[1]．槲皮素是地锦草中黄酮类化合物的
一种，为地锦草抗菌、抗氧化、止血等功效的主要
有效成分．目前，对地锦草中总黄酮及槲皮素含量
测定已有相关报道[2-3]，但对地锦草不同部位中总黄
酮和槲皮素含量的综合评价还未见报道．笔者对地
锦草不同部位中总黄酮和槲皮素的含量进行了测
定，以便更好地了解地锦草全草和不同部位中黄酮
类化合物的含量，为地锦草的合理开发和利用提供
依据．
1 材料与方法
1.1 材 料
槲皮素标准品(中国药品生物制品检定所，批
号：100081-200406)；芦丁标准品(中国药品生物制
品检定所，批号：100081-200406)；地锦草不同部
位干燥粉末(采自长沙，晒干粉碎)；甲醇(色谱纯，
上海陆都化学试剂厂)；乙腈(色谱纯，美国天地)，
磷酸(色谱纯)，其余试剂均为分析纯．高效液相色
收稿日期：2008-03-26
基金项目：湖南省科学技术厅项目(06FJ3107)
作者简介：江 超(1982-)，女，湖南株洲人，硕士研究
生．*通讯作者：sunzhiliang1965@yahoo.com.cn．
DOI:10.13331/j.cnki.jhau.2008.05.025


第 34卷第 5期 江 超等 UV和 HPLC法测定地锦草不同部位中总黄酮和槲皮素的含量 573
谱仪(日本岛津 LC-2010A HT)；LAB-techUV2100
紫外/可见分光光度计；JY98-3D超声波细胞粉碎机．
1.2 UV 法测地锦草不同部位中总黄酮含量
(1) 供试液的制备．分别准确称取地锦草全草、
根、茎、叶、种子干燥粉末 1.0 g，每个样 3个重复，
按以下方法分别制备供试液：加 80%的甲醇 50 mL，
称重，超声 10 min，65 ℃加热回流 1.5 h，再称重，
补足减少的质量，过滤，滤液作为供试液．
(2) 标准溶液的配置．准确称取芦丁标准品 2.0
mg，80%的甲醇超声溶解并定容至 50 mL．
(3) 标准曲线的绘制及总黄酮含量测定[4]．利
用黄酮类化合物在 NaNO2-Al(NO3)3-NaOH 体系中
的显色反应，于紫外/可见分光光度计最大吸收波长
处测吸光度．
分别吸取芦丁标准溶液 0、0.5、1.0、2.0、3.0、
4.0 mL于 10 mL量瓶中，80%甲醇稀释至 4 mL，
加 0.4 mL 5%亚硝酸钠溶液摇匀，立刻加入 0.4 mL
10%硝酸铝溶液摇匀，放置 5 min，加 1 mol/L氢氧
化钠溶液 3 mL，80%甲醇定容，混合后放置 5 min，
于最大吸收波长处测吸光度，以吸光度(A)为纵坐
标，芦丁浓度(C)为横坐标建立直线回归，得线性回
归方程．分别吸取地锦草不同部位供试液 0.1 mL，
经显色定容后，于最大吸收波长处测吸光度，参照
线性回归方程，计算含量．
(4) 精密度试验．取同一份样品溶液，按(2)、
(3)项操作，重复测 6次，计算吸光度的相对标准偏
差(RSD)[5]．
(5) 重现性试验．取同一份样品，平行操作制备
6份供试液，按(2)、(3)项操作，计算吸光度的 RSD．
(6) 加样回收率试验．精密量取样品溶液 0.5
mL，共 6份，分别加入芦丁标准溶液适量，按(2)、
(3)项操作，采用 SAS(1996)软件中 ANOVA进行单
因素方差分析，并均采用 Duncan 检验进行多重比
较和显著性分析，计算平均加样回收率．
1.3 HPLC 法测地锦草不同部位中槲皮素含量
(1) 色谱条件．色谱柱：ShimADZU VP-ODS-
C18，5 µm×4.6 mm×250 mm(日本岛津)，柱温35 ℃；
紫外检测器，检测波长360 nm；流动相：甲醇∶0.4%
磷酸(50∶50)，流速0.8 mL /min，进样量10 µL．
(2) 标准溶液的配制．准确称取槲皮素标准品
3.0 mg，80%的甲醇超声溶解并定容至50 mL．
(3) 供试液的水解．分别准确量取1.2(1)项下制
备的各部位供试液10 mL，加25%的盐酸溶液3.5
mL，85 ℃水解30 min，迅速冷却，80%甲醇定容至
50 mL，作为水解供试液．
(4) 标准曲线绘制及槲皮素含量测定．分别准
确吸取槲皮素标准溶液 0.1、0.5、1.0、2.0、3.0、
4.0、5.0 mL入 10 mL容量瓶中，甲醇定容，0.45 µm
微孔过滤，10 µL进样．以标准溶液的浓度为横坐
标，峰面积为纵坐标，建立线性回归，得回归方
程．分别取地锦草不同部位水解供试液 2 mL，甲醇
定容至 10 mL，经 0.45 µm微孔滤膜过滤后，10 µL
进样，参照槲皮素标准曲线，测定样品中槲皮素含量．
(5) 精密度试验．分别重复进样槲皮素 5 次，
每次 10 µL，计算槲皮素峰面积的 RSD．
(6) 稳定性试验．分别取槲皮素溶液放置 0、2、
4、6、8、10、12 h，自动进样 10 µL进行测定，计
算槲皮素峰面积的 RSD．
(7) 重复性试验．精密称取同一批样品共 5份，
每份 1 g，按照上述制备水解供试液，10 µL注入色
谱仪，计算槲皮素峰面积的 RSD．
(8) 加样回收率试验．精密称取已知槲皮素含
量的样品 1 g，共 5 份，精密加入槲皮素对照品适
量．按 1.2中(4)项方法操作．
采用 SAS(1996)软件中 ANOVA 进行单因素方
差分析，并均采用 Duncan 检验进行多重比较和显
著性分析，计算平均加样回收率及 RSD．
2 结果与分析
2.1 紫外分光光度法测得的总黄酮含量
全波长扫描结果显示，经显色后的标准品及样
品在510 nm处都有最大吸收峰．芦丁标准品于510
nm波长处得其浓度(C)与吸光度值(A)的线性回归
方程为：A=0.085 7C+0.039 4(R=0.999）．总黄酮在
2.0～16.0 µg呈良好的线性关系，平均加样回收率为
102.2%，表明仪器精密度高，重复性良好，RSD 都
小于2%．参照芦丁线性回归方程，测得地锦草不同
部位总黄酮含量(表1)．


574 湖南农业大学学报(自然科学版) 2008年 10月
表 1 地锦草各部位总黄酮含量(n=3)
Table 1 Contents of total flavonoids at different parts of Euphorbiae
humifusae
部位 吸光度 上样质量 浓度/(µg·mL－1)
含量/
(mg·g－1)
平均含量/
(mg·g－1)
百 分
含量/%
根 0.151 1.303 6.516
0.192 1.776 8.882 7.480Db 0.748
0.160 1.408 7.041
茎 0.202 1.893 9.463
0.239 2.330 11.629 10.587Da 1.059
0.222 2.134 10.670
叶 0.789 8.742 43.711
0.745 8.235 41.174 43.252A 4.325
0.809 8.974 44.872
种子 0.363 3.780 18.898
0.365 3.795 18.977 18.685C 1.869
0.351 3.636 18.181
全草 0.532 5.749 28.743
0.526 5.680 28.400 27.628B 2.762
0.481 5.148 25.741

从地锦草不同部位总黄酮含量测定结果及统
计分析结果可知，各部位总黄酮含量存在极显著的
差异，总黄酮含量范围为 7.513 ~43.252 mg/g，其中
以叶的含量最高，根的含量最低．
2.2 HPLC 测得的槲皮素含量
从地锦草不同部位黄酮类化合物HPLC色谱图
(图 1)可以看出，槲皮素在 10 min时出峰，峰面积
的大小表示槲皮素含量的高低，含量从高到低依次
为叶、全草、种子、茎、根．








A 槲皮素标准品；a 叶；b 茎；c 种子；d 根；e 全草
图1 标准品及地锦草不同部位黄酮类化合物HPLC色谱比较
Fig.1 Flavinone HPLC spectrum graph of sample and standard
substance at different parts of Euphorbiae humifusae
以槲皮素为标准品，标准溶液浓度(X)为横坐
标，峰面积(Y)为纵坐标，得线性回归方程 Y=4
840.905X－5 205.388(R=0.999)，槲皮素在 0.583～
29.190 µg呈良好的线性关系．测得平均加样回收率
为 99.6%．重复进样槲皮素 5次，得槲皮素峰面积
RSD为 0.52%(n=5)，表明仪器精密度较好；稳定性
试验测得槲皮素峰面积的 RSD为 1.33%，表明样品
中的槲皮素含量在 12 h内稳定．重复性试验计算得
槲皮素的峰面积 RSD为 1.48%(n=5)，表明本方法重
现性良好．
参照槲皮素线性回归方程，应用表 1的统计方
法测得地锦草不同部位槲皮素含量(表 2)．
表 2 地锦草各部位槲皮素含量(n=3)
Table2 Contents of quercetin at different parts of Euphorbiae
humifusae
部位 峰面积 上样质量浓度
/(µg·mL－1)
含量
/(mg·g－1)
平均含量
/(mg·g－1)
百分
含量/%
根 371 1.151 00 1.439
1 713 1.429 16 1.786 1.658E 0.166
1 567 1.398 43 1.748
茎 9 293 2.994 91 3.744
9 748 3.089 02 3.861 4.080D 0.408
12 740 3.707 01 4.634
叶 69 759 15.485 50 19.357
57 775 13.010 03 16.263 17.860A 1.786
64 351 14.368 43 17.961
种子 20 827 5.377 65 6.722
17 322 4.653 62 5.817 6.224C 0.622
18 549 4.907 03 6.134
全草 39 916 9.320 78 11.651
41 719 9.693 37 12.117 11.710B 1.171
38 787 9.087 61 11.360

从地锦草不同部位槲皮素含量测定结果及统
计分析结果可知，各部位槲皮素含量存在极显著的
差异，槲皮素的含量范围为 1.658~17.860 mg/g，含
量从高到低依次为叶、全草、种子、茎、根．
3 讨 论
a. 本试验采用超声―回流的方法提取地锦草
总黄酮，地锦草叶总黄酮的提取量达到了43.252
mg/g．据文献[6-7]报道，地锦草中黄酮类化合物主
要有槲皮素、槲皮苷等，因此本试验采取先提取后
水解，然后测定槲皮素含量的方法，叶的槲皮素含
a
b
c
d
e
A
0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 min


第 34卷第 5期 江 超等 UV和 HPLC法测定地锦草不同部位中总黄酮和槲皮素的含量 575
量达到了17.86 mg/g，与雷鸣等[8]报道的采用加热回
流提取地锦草槲皮素含量为1.59～2.08 mg/g，与邢
俊波等[9]报道的加热回流提取地锦草槲皮素含量为
0.091 mg/g相比，含量大大提高．
b. 根据紫外全波长扫描及黄酮类化合物的特
性，本试验选择了510 nm作为紫外分光光度法的检
测波长，选择360 nm作为HPLC法的检测波长；在
HPLC法测槲皮素含量的试验中考察了供试液和供
试液水解后的HPLC图谱．结果表明，水解后的
HPLC图谱峰形、分离效果较好，保留时间较长；
在流动相的选择中，比较了甲醇-水，甲醇-0.4%磷
酸，甲醇-乙酸乙酯，乙睛-水，乙睛-0.4%磷酸，乙
睛-乙酸乙酯不同比例作为流动相，结果以甲醇-0.4%
磷酸(50∶50)作为流动相最佳[10]．
c. 槲皮素是地锦草总黄酮的主要成分之一，因
此，在临床应用中以槲皮素作为地锦草质量控制指
标来制订质量标准具有较强的可操作性．从地锦草
不同部位总黄酮和槲皮素含量测定结果及统计分
析结果可知，各部位总黄酮和槲皮素含量存在极显
著的差异，含量从高到低依次为叶、全草、种子、
茎、根．此结果表明，提取地锦草总黄酮等有效成
分时选择地锦草的叶最好．
参考文献：
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责任编辑：苏爱华
英文编辑：罗文翠