全 文 ：巴根那: 男 , 1960年生 ,副教授
蒙药地锦草总黄酮提取工艺研究
巴根那　赵贤芳　白玉霞　张昕原　孙福详　乌日娜　王志民　李宝山
内蒙古蒙医学院中心实验室 ,通辽　 028041
提要　对蒙药地锦草总黄酮提取工艺进行了研究。结果表明: 乙醇提取法优于水提取法 ;用 6倍量的 75%乙醇浸泡 12 h后
回流提取 1. 5 h,共提取 3次为最佳方案 ;提取液经石油醚脱色正丁醇萃取即得精制总黄酮。
关键词　地锦草 ;　总黄酮 ;　提取与精制
Extractive Technology of Total Flavonoids fromMongolian
Medicine Herba Euphorbiae Humifusae
Bagenna, Zhao Xianfang, Bai Yuxia , et al
Inner M ongolia Co lleg e of Tradi tional M ongolian Medicine, Tong liao 028041
Absract　 Optimum ex tr activ e tech no lo gy of to tal flav onoids o f tr aditiona l Mongo lian medicine he rba eupho rbiae
humifusa e w as studied with or thogonal test here. The four facto rs i. e. th e data o f a lcoho l concentra tion; ex tra ctive time; adding
solv ent v o lume and ex t ractiv e time were selec ted and the thr ee lev els fr om each o f the four facto rs w er e chosen. Th e expe riment
design was made using or thogonal fo rm L9 ( 3
4 ) and results show ed tha t optimum ex trac tiv e technolog y o f co arse pow de r of
herba eupho rbiae humifusa e adding six times vo lume s of 75% alcoho l and immer sing 12 h , then r eflux ex t racting 1. 5h and
ex trac ting 3 times w as the best.
Key words　 Herba Eupho rbia e Humifusae; 　 To ta l flavonoids;　 Ex tr activ e tech no lo gy
　　地锦草为大戟科植物地锦 Eupho rbia e humifusa e willd.的干
燥全草。具有止血、燥湿“协日乌素”、愈伤、清脑、清脉热的功能。用
于便血、创伤出血、衄血、吐血、肺脓疡、咯脓血痰、中风等 [1]。 是蒙
医常用药之一 ,如意至宝丸 (额尔郭乌日勒 )等方剂的主要药 [2]。地
锦草主要含槲皮素甙及素、山柰素甙及素、地锦草素等黄酮类化合
物。其煎剂、醇提液及地锦草素均有抗菌、止血等作用 [3 ]。我们曾对
地锦草水提取液、乙醇提取液及总黄酮液抗自由基作用进行研究 ,
结果证明地锦草有很强的清除和抑制自由基的作用 [4]。 为进一步
研究其有效成分 ,探索地锦草总黄酮提取最适条件 ,为提取工艺提
供信息 ,以总黄酮含量为考察指标 ,采用正交实验等方法对地锦草
总黄酮提取工艺进行了系统研究。
1　材料与仪器
药材由本院附属医院蒙药制剂室提供 ,经我院蒙药系鉴定教
研室鉴定。 均为《中国药典》 1995版本品种 Euphorbiae humifusa e
willd.的干燥全草。芦丁对照品由中国药品生物制品检验所提供 ,
批号为 080- 9303,其它化学试剂均为 AR级 ,实验用水为亚沸提
纯水。
日立 557双波长双光束分光光度计 , 754分光光度计 (上海三
分厂 ) , FA 160电子天平 (上海天平仪器厂 ) , PHS- W I型智能酸
度计 (杭州万达仪表厂 )。
2　实验方法
2. 1　最大吸收波长及稳定性考察:精密量取芦丁对照品液和样品
液各 5. 0 ml,分别置 25 ml容量瓶中 ,加水至 6 ml,加 5% NaNO2
液 1. 0 ml,放置 6 min,加 10% Al ( NO3 ) 3试液 1. 0 ml,放置 6
min,加 10% NaOH试液 10 ml,加水至刻度 ,摇匀 ,放置 15 min,
以相应试剂作空白 ,于 557双光束 /双波长分光光度计上进行全波
长扫描 ,最大吸收波长为λmax 500 nm,同时 ,在 500 nm波长处进
行时间扫描 ,结果显示 150 min内基本稳定。
2. 1. 2　标准曲线的制备: 精密称取在 120℃减压干燥至恒重的芦
丁对照品 10. 0 mg ,加甲醇溶解 ,转入 50 ml容量瓶中 ,用甲醇稀
释至刻度 ,摇匀 ,即得对照品液 ( 0. 2 mg /ml)。精密吸取该液 0. 0、
1. 0、 2. 0、 3. 0、 4. 0、 5. 0、 6. 0 ml,分别置 25 ml容量瓶中 ,加水至
6ml,加 5% NaNO2试液 1. 0 ml,放置 6 min,加 10% Al( NO3 )3试
液 1. 0 m l,放置 6 min,加 10% NaO H试液 10 ml,加水至刻度 ,摇
匀 ,放置 15 min以相应试剂作空白 ,于 500 nm处测定吸光度。 以
浓度 ( C )与吸光度 ( A )进行直线回归 ,得回归方程为 Y = 0. 0209
+ 0. 3467 X ,γ= 0. 9997。 在 0. 20～ 1. 20 mg范围内呈线性关系。
2. 1. 3　加样回收率测定:称取 5. 0 g地锦草粗粉 3份 ,精密称定 ,
分别精密加入芦丁对照品 ,按样品制备法制备 ,并照标准曲线制备
方法测定 ,计算其回收率。结果见表 1。
表 1　加样回收率测定结果
编　号 样品总黄酮量
(mg)
加入量
( mg)
测得值
( mg)
回收率
(% )
x-± S
(% )
CV
(% )
1 37. 0831 5. 1435 41. 3873 97. 74
2 36. 1533 5. 0111 41. 4315 100. 74 98. 77± 1. 71 1. 73
3 37. 1173 5. 1001 41. 4110 97. 83
2. 2　提取方法的选择
2. 2. 1　水提取法: 称取地锦草粗粉 5. 0 g ,加水 200 ml,浸泡 30
min,煮沸 60 min,过滤。 共煎煮 3次。 合并滤液定容至 50 ml,备
用。
2 . 2. 2　乙醇提取法 : 称取地锦草粗粉 5. 0 g ,加乙醇 ,水浴回流
1 h,过滤。 共提取 3次。 合并滤液定容至 50 ml,备用。
2. 2. 3　样品液总黄酮含量测定: 精密吸取样品液 3. 0 ml,置 25 ml
容量瓶中 ,按标准曲线制备法测定吸光度 ,计算含量。 结果见表 2。
2. 3　提取工艺条件优选: 从表 2可知 ,乙醇提取法优于水提取法 ,
可采用正交实验设计 ,选用乙醇浓度、提取时间 、提取溶剂加倍量
及提取次数 4个因素 ,每个因素选择 3个水平 ,用 L9 ( 34 )正交表进
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时珍国医国药 1999年第 10卷第 4期 LISHIZHEN M EDICIN E AND MA TERIA M EDICA RESEA RCH 1999 VO L. 10 NO. 4　
湿疹软膏制备及应用
王文森①　孙　洁②
①中国人民解放军第 251医院 ,河北张家口　 075000;　② 河北张家口市第一医院　 075000
　　 15%氧化锌软膏是治疗急性、亚急性湿疹及接触性皮炎等常
见病的药物 ,我们在此基础上研制出湿疹软膏 ,具有消炎、抗过敏、
收敛、止痒之功效 ,主要用于皮肤湿疹、瘙痒、及各种过敏性皮肤
病 ,经临床观察疗效显著。
1　处方
炉甘石 2 0 0 g ,呋喃西林粉 1 0 g ,枯矾 1 0 g ,石膏 2 0 g ,
青黛 20 g ,地塞米松磷酸钠 1 g ,冰片 10 g ,凡士林加至 1 000 g。
2　制备
将处方中各药粉碎后混合均匀 ,过 80目筛。 另将凡士林置水
浴上加热至熔化 ,然后加入上述药粉 ,搅拌均匀 ,放冷后分装即得。
3　用法
将患处用温水清洗干净 ,涂擦本品 , 3次 /d, 7 d为 1疗程。 观
察两个疗程。
4　疗效标准
诊断标准依据《临床疾病诊断依据治愈好转标准》 (人民军医
出版社 , 1991)。 急性湿疹:病损初为红斑、丘疹 ,继之发生水疱、糜
烂渗液。慢性湿疹:皮损多呈局限性 ,边缘清楚 ,苔藓化、肥厚粗糙 ,
皮纹加深 ,色素沉着。 急慢性湿疹均反复发作 ,极度瘙痒。
5　治疗结果
本制剂共治疗 100例 ,男 87例 ,女 13例 ,均为部队官兵 ,年龄
在 17～ 33岁。 治愈:皮肤光滑 ,皮疹消失 93例 ,占 93%。好转:皮
肤瘙痒消失 ,其它症状明显改善 7例 ,占 7%。
6　讨论
该制剂以氧化锌 (炉甘石主要成分 )、呋喃西林为主要 ,具有杀
菌、防腐、收敛之功效 ,青黛清热解毒 ,枯矾燥湿止痒 ,冰片芳香透
窍、防腐止痒 ,地塞米松则抗过敏 ,以上各药合用共同发挥解毒祛
湿作用 ,治愈率达 93% ,有效率 100% ,在疗效观察中 ,未发现任何
不良反应。 ( 1998- 08- 05收稿 )
行实验设计优选。 结果见表 3、表 4。
表 2　地锦草提取条件与含量关系
试验号 提取条件 含量 ( x-± S ,% ) CV (% )
1 水提取法　 0. 1397± 0. 004 2. 85
2 乙醇提取法 0. 7278± 0. 011 1. 44
表 3　因素水平表
水平 因　　　　　　素
A乙醇浓度 (% ) B提取时间 ( h) C溶剂加倍量 D提取次数
1 60 1. 0 6 1
2 75 1. 5 8 2
3 90 2. 0 10 3
表 4　正交试验设计及结果分析
表头设计 A B C D 试验结果
列　号 1 2 3 4 总黄酮含量 (% )
1 1 1 1 1 2. 6 74
2 1 2 2 2 2. 8 91
3 1 3 3 3 3. 0 33
4 2 1 2 3 3. 2 24
5 2 2 3 1 2. 5 38
6 2 3 1 2 3. 0 15
7 3 1 3 2 2. 6 05
8 3 2 1 3 3. 4 23
9 3 3 2 1 2. 6 40
-Ⅰ1　 2. 866 2. 834 3. 037 2. 617 G= 2. 6043
-Ⅰ2　 2. 926 2. 951 2. 918 3. 110
-Ⅰ3　 2. 889 2. 896 2. 725 3. 227
R 0. 006 0. 0117 0. 312 0. 610
优水平 A2 B2 C2 D2
2. 4　分离精制方法的考察: 称取地锦草粗粉 25 g ,照正交实验最
佳工艺 A2、 B2、 C1、 D3进行提取 ,回收乙醇 ,加水溶解 ,并定容至
50 ml,备用。 提取液作以下分离工艺考察。
2. 4. 1　方法 1: 取上述液 10 ml,于水浴蒸干 ,用饱和石灰乳溶解 ,
搅拌 ,过滤。 50～ 60℃下调 p H值至 1～ 2,放置 ,析出沉淀 ,沉淀用
甲醇溶解并定容至 50 ml。
2. 4. 2　方法 2: 取上述液 10 ml,加饱和石灰乳调 p H值 10～ 11,
放置 ,产生沉淀 ,过滤 ,滤液用 HCl调整至中性 ,于水浴上浓缩至
干 ,甲醇溶解 ,并定容至 50 ml。
2. 4. 3　方法 3:取上述液 10 ml,用石油醚脱色 ,再用正丁醇萃取 3
次。 减压回收正丁醇至干 ,甲醇溶解 ,并定容 50 ml。
精密吸取总黄酮甲醇溶液 ,按标准曲线制备方法测定吸光度 ,
计算含量。 结果见表 5。
表 5　精制分离条件与总黄酮含量关系
试验号 方　法 总黄酮含量 ( x-± S ,% ) CV (% )
1 方法 1 0. 3121± 0. 0022 0. 70
2 方法 2 0. 0400± 0. 0011 2. 75
3 方法 3 1. 6654± 0. 0094 0. 56
3　讨论与小结
从实验结果表明 ,乙醇提取法优于水提取法 ( P < 0. 05)。 乙
醇提取最佳方法是 A2、 B2、 C1、 D3 ,即用 6倍量的 75%乙醇回流提
取 1. 5 h ,共提取 3次。本方法提取的液体可用石油醚脱色 ,再用正
丁醇萃取 3次 ,减压回收溶剂至干得总黄酮精制品。
乙醇提取工艺对地锦草总黄酮含量的主要影响因素为提取次
数 ,其次是溶剂加倍量。按 A2、 B2、 C1、 D3方案提取地锦草总黄酮 ,
可增加得率 59% ,可充分利用低浓度乙醇 ,并用量小 ,降低生产成
本 ,简便。
参考文献
1　内蒙古卫生厅 .内蒙古蒙药材标准 .赤峰:内蒙古科学技术出版社 , 1987
∶ 402
2　中国医学百科全书编辑委员会 .中国医学百科全书· 蒙医学 .上海:上
海科学技术出版社 , 1992∶ 277
3　中国医学科学院药用植物资源开发研究所 ,中国医学科学院药物研究
所 ,卫生部药品生物制品检定所 ,等 .中药志 (第 4册 ) .北京: 人民卫生
出版社 , 1988∶ 321
4　李宝山 ,乌日娜 ,张昕原 ,等 . 5种蒙药材清除自由基作用比较 .时珍国药
研究 , 1996, 8( 4)∶ 34
( 1998- 08- 31收稿 )
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LIS HIZHEN M EDICINE AND M ATERIA M EDICA RESEARCH 1999 VO L. 10 N O. 4 时珍国医国药 1999年第 10卷第 4期