全 文 ：[作者简介 ] 　李欣(1973 - ), 女 ,硕士 ,主管医师 , 主要从事遗传
毒理研究。
【论著】
守宫木细胞与遗传毒性实验研究
李　欣 ,熊习昆 ,黄俊明 ,张文改 ,王京滨 ,张　静 ,谭剑斌 ,陈秀娟
(广东省疾病预防控制中心毒理所 ,广州　510300)
[摘要 ] 　目的:以体外试验研究野生蔬菜守宫木的细胞毒性和遗传毒性。方法:生(Ⅰ )和煮熟 (Ⅱ )的守宫木匀浆液分
别以 40 000、20 000、10 000、5 000、2 500、1 250 μg /m l浓度对 CH L细胞染毒 , 每一浓度分别在 24、48和 72 h时间点以中
性红摄入方法对守宫木的细胞毒性进行评定;体外染色体畸变试验则以同样的浓度分别以生和煮熟的守宫木匀浆液染
毒 2 h后 , 收获细胞制备中期相 ,对染色体结构畸变进行分析。结果:中性红摄入细胞毒性试验:在生的与煮熟的守宫木
匀浆液细胞毒性剂量效应关系分析中 ,低剂量组随着染毒浓度加大细胞毒性增强 ,而在较高剂量组则出现随染毒浓度加
大细胞毒性减弱 , 20 000和 40 000 μg /m l剂量组出现细胞的增殖现象;时间效应分析中有和剂量效应分析相似的现象 ,
即在低剂量组随着染毒时间的延长细胞毒性增强 ,而从 10 000 μg /m l剂量组开始随着染度时间的延长细胞毒性减弱并
出现细胞的增殖现象;对生的与煮熟的守宫木细胞毒性进行比较分析 , 仅在染毒 24 h的 20 000 μg /m l剂量组发现煮熟
的守宫木匀浆液的细胞毒性有统计学意义(P <0. 05)地高于生的守宫木匀浆液。体外染色体畸变试验结果阴性。结论:
守宫木在一定浓度范围内对细胞溶酶体和高尔基体有一定的损伤作用 , 未观察到守宫木对细胞的遗传物质染色体有损
害作用 , 未发现不同的食用习惯对守宫木的毒性有影响。
[关键词 ] 　守宫木;细胞毒性;染色体畸变
[中图分类号 ] 　R155.3　　　　[文献标识码 ] 　A　　　　[文章编号 ] 　1004 - 8685(2006)09 -1050 - 04
Cytotox icity and genotoxic ity of sauropus androgynus
L i X in , X iong X i-kun, Huang Jun-m ing, ZhangW en-gai, Wang J ing-bing , Zhang J ing, Tang J ian-bin, Cheng X iu-juan
(Guangdong Center fo rD isease Con tro l and P revention, Guang zhou 510030, Ch ina)
[ Abstract] 　Objective:To re search the cy totox ic ity and geno tox icity o f sauropus androgynus, a k ind o f trad itiona l w ild vegeta-
b le, w ith in v itro tests.M ethods:The uncooked (Ⅰ ) and cooked(Ⅱ ) sauropus androgynu s hom ogenized ju ice w as respec tive ly
adm in iste red to CHL ce lls w ith 1 250, 2 500, 5 000, 10 000, 20 000, 40 000 μg /m l, then the cy totoxic ityw as studied a t 24, 48, 72
hou rs w ith the neu tra l red up take test. In v itro ch rom osom al abe rra tion te st w as done a t the sam e concen tra tions as the neutral red
uptake te st.The ce lls w ere co llec ted afte r the uncooked and cooked sauropus androgynus hom ogen ized ju ice we re respective ly ad-
m inistered fo r 2 hours, then the chrom osoma lm e taphase s we re prepared and the chrom osom al abe rra tion w as ana ly zed.R esu lts:
The neutral red uptake test showed that there was the phenomenon that a t the low er doses the cy to tox icity inc reased w ith the dose
inc reased, bu t at the highe r do ses the h igher the do sew as thew eaker the cy to tox icity w as, in bo th the uncooked and cooked sau-
ropus androgynus hom ogenized ju ice groups, and a t the 20 000μg /m l and 40 000μg /m l g roups the CHL ce lls pro life ra ted. In the
tim e - effe ct ana ly sis, there was the sim ilar phenom enon to the do se - e ffec t ana ly sis, w ith the tim e pro longed the cy to tox icity of
the uncooked and cooked sauropus androgynus a ll increased at lowe r doses, but from 10 000 μg /m l the cyto tox icity of the bo th
juice decreased w ith the tim e pro longed and appeared pro life ra tion of ce lls.There w as no sta tistica l difference be tw een the two
w ay s(uncooked and cooked) to prepare the sau ropus androgynus, except 24 h the cy totox ic ity of the cooked sau ropus androgynus
hom ogen ized ju ice w as highe r than tha t o f the uncooked sauropus androgynus homogenized juice at the 20 000μg /m l group(P <
0. 05).Conclu sion:Sauropus androgynus do some dam age to the lysosom es and go lg i apparatus o f the cell a t som e do ses, and it is
no t observed the changed ch rom osom e cau sed by the sau ropus androgynus at any concentrations.No influences are found on the
toxic ity of.Sauropus androgynus w ith diffe rent ea ting habits.
[ Keyw ords] 　Sau ropus androgynus;Cy to tox icity;Chromosom a l aberra tion
　　守宫木(Sauropus androgynus), 别名天绿香 、树仔菜等 , 是
一种南方等地群众喜爱的野生蔬菜 , 我国的云南少数民族中
也有较长的食用历史 , 中国科学院西双版纳热带植物所对该
植物有专门记载。 在东南亚一带也广泛食用 , 一直未见其引
起人类毒副作用的报道。但 1994 ～ 1995年间 , 台湾地区连续
发生阻塞性细支气管炎的地方流行和爆发 , 被认为是生吃减
肥蔬菜—守宫木造成的 , 主要病理表现为 2 ～ 4 mm 支气管的
病变 [ 1 , 2] 。当时媒体和当局都对公众提出了安全警告。 2005
年日本又有类似的报道 [ 3] 。H siue等研究发现食用守宫木与
1050 中国卫生检验杂志 2006年 9月 第 16卷 第 9期　Ch inese Journa l ofH ealth Laboratory Technology, Sep 2006;V ol 16　No 9
人群的阻塞性通气损伤发生间有一定的剂量效应趋势 [ 4] 。但
动物试验研究均未能成功复制和人类相似的疾病表现。而
2005年郭巨先 、杨暹等人研究报道 “天绿香” 30 d喂养实验发
现其对 SD大鼠的肝 、肾 、脾 、心 、肺 、睾丸等器官有损伤 , 差异
显著并呈一定的剂量反应关系 [ 5] 。同时有媒体报道该种野菜
仍在大陆大量种植与销售 ,这在华南仍至全国引起轩然大波。
随后有关部门提出 “天绿香”不宜长期 、规律食用的建议 ,但仍
不断有许多种植者和归国华侨对此提出质疑。 “天绿香 ”引发
的已不单是公共卫生问题而关联到许多社会和经济利益 , 守
宫木到底有没有毒性 , 毒性大小如何  都急需相关的基础数
据来做出回答。所以本研究对其毒性做了初步的探讨。
由于台湾地区的主要食用方法是打成匀浆后原汁和 /或
与其它果汁一起生食 ,而大陆地区则煮或炒熟后方食用 , 是否
制备和食用习惯的不同会使守宫木的成分发生改变而减弱其
毒性 , 使大陆和东南亚地区至今未有相关毒副作用的报道呢 
流行病学研究报道和主要病理改变都发生在肺部 , 肺组织细
胞对守宫木损害作用较为敏感 , 所以本研究选择中国仓鼠肺
成纤维细胞(CHL)作为体外试验的指示细胞 , 对新鲜的未加
工过的生守宫木和经加工的煮熟的守宫木进行初步的体外毒
性试验研究 , 希望获得守宫木毒性的基本信息 , 为进一步的毒
性机制研究提供线索 。
1　材料与方法
1. 1　材料
1. 1.1　守宫木制备　取新鲜守宫木根据预试验测得样品的最
大可匀浆浓度 , 称取 20. 0 g,加纯净水 30. 0 g粉碎仪打碎后用
匀浆机制成匀浆 , 然后超声破碎(振幅 60%, 时间 1 m in), 以
两种方法处理样品匀浆:Ⅰ 直接取匀浆 , 用纱布过滤去除残
渣 , 过滤后液体再用滤纸过滤 , 取滤出液离心 (3 000 r /m in,
10 m in);Ⅱ 沸水浴 20 m in的匀浆 , 用纱布过滤去除残渣 , 过
滤后液体再用滤纸过滤 , 两种方法处理后分别取上清液过
0. 20 μm 的滤膜除菌后待用(相当于每 1 m l样品制备液含守
宫木 0. 4 g)。取除菌后样品制备液 4 m l, 以此为基础用 PBS
依次作二倍稀释得一系列相应剂量的染毒液。
1. 1.2　细胞株　CH L细胞 , DM EM培养液加 10% 新生小牛
血清。
1. 1.3　代谢活化系统　使用经多氯联苯诱导的大鼠肝匀浆
(S
9
)并加相应的辅助因子配制成的混合物 (S
9
m ix)作为体外
代谢活化系统。
1.1.4　实验剂量分组　生的(Ⅰ )和煮熟的(Ⅱ )守宫木匀浆
液均分 6个剂量组 , 染毒终浓度为 40 000、 20 000、 10 000、
5 000、2 500、 1 250μg /m l。
1.2　方法
1.2.1　中性红摄入试验　在 96孔培养板上接种 CHL细胞 ,
每孔 100 μl,接种密度(1 ～ 5)×104 ,培养 24 h后弃去上清液
后换无酚红 DMEM培养基 180 μl, 每孔加入 20 μl守宫木匀
浆液使其终浓度达到相应染毒剂量 , 每个剂量组设 4个平行
孔 , 阴性对照仅加入培养基设 8个平行孔。染毒 24、 48、 72 h
后以 D -H anks液洗 3次 , 加入中性红染液终浓度 25μg /m l,
37℃孵育 15 m in后弃去染液 , 每孔加 200 μl的细胞溶解液
(水:乙酸:无水乙醇以 49:1:50混合), 震荡摇匀 15 m in后用
酶标仪测定各孔在 540 nm 波长处的吸光度值(OD), 并计算
细胞存活率 , 细胞存活率 =试验组 OD /对照组 OD×100%。
1.2.2　体外试验染色体畸变　将 CHL细胞接种于 6孔培养板
中 ,接种密度为 1×106 /孔 , 37℃, 5% CO2培养 24 h后 ,吸去培
养皿中的培养液 ,加入不同浓度的守宫木匀浆液及不含血清的
培养液, 代谢活化组同时加入 S9 m ix,放培养箱中作用 2 h后 ,
弃去含守宫木匀浆液的培养液 ,用 D -Hanks液洗细胞 3次 ,加
入含 10%新生小牛血清的培养液, 继续培养 24 h, 阴性对照组
仅加培养液(代谢活化组同时加入 S9 m ix)。收获前 4 h加入秋
水仙素 ,终浓度为 1.0 μg /m l。按常规方法制备中期分裂相。
对各组选取 200个分散良好的中期分裂相细胞 ,进行染色体畸
变分析。记录染色体结构畸变的数目 ,并计算染色体畸变率。
1.2.3　统计学分析　体外染色体畸变试验用 χ2检验将各剂
量组细胞的染色体畸变率与阴性对照组进行比较 , 确定是否
有显著性差异;中性红摄入试验用方差分析 , 先做方差齐性分
析 , 方差齐用 LSD法进行各组间的两两比较 , 方差不齐则用
Dunnt′s法进行两两比较 , 确定是否有显著性差异;对同一剂量
的生 、熟守宫木匀浆液的细胞毒性进行 t检验。
2　结果
2.1　中性红摄入试验结果
2.1.1　守宫木染毒 24 h的中性红摄入细胞毒性试验结果　
见表 1。
表 1　守宫木染毒 24 h的中性红摄入细胞毒性试验结果
组别 守宫木浓度(μg /m l)
平行
孔数
吸光度值(x±s)
Ⅰ Ⅱ
细胞存活率(%, x ±s)
Ⅰ Ⅱ
t检验
P值
阴性对照 - 8 0. 218±0.016 0. 199±0. 024 100. 1±7.2 100.1±12. 4 >0. 05
守宫木 1250 4 0. 210±0.010 0. 193±0. 027 96. 1±4.5 97.0±13. 4 >0. 05
2500 4 0. 181±0. 013** 0.166±0. 005* 83. 1±6. 0* 83. 3±2. 5* >0. 05
5000 4 0. 115±0. 010* 0. 132±0. 035** 52. 5±4. 3** 66. 0±17. 7** >0. 05
10000 4 0. 102±0. 010** 0. 104±0. 015** 46. 6±4. 6** 52. 1±7. 5** >0. 05
20000 4 0. 139±0. 011** 0. 103±0. 012** 63. 6±5. 0** 51. 8±6. 1** <0. 05
40000 4 0. 210±0.077 0. 138±0. 010** 96. 1±35.26 69. 5±5. 0** >0. 05
　　与阴性对照相比较 * P <0. 05, ** P <0. 01
1051中国卫生检验杂志 2006年 9月第 16卷 第 9期　C hinese Jou rnal ofH ea lth Laboratory Technology, S ep 2006;Vol 16　No 9
2. 1.2　守宫木染毒 48 h的中性红摄入细胞毒性试验结果　见表 2。
表 2　守宫木染毒 48 h的中性红摄入细胞毒性试验结果
组别 守宫木浓度(μg /m l)
平行
孔数
吸光度值(x±s)
Ⅰ Ⅱ
细胞存活率(%, x±s)
Ⅰ Ⅱ
t检验
P值
阴性对照 - 8 0. 220±0.075 0. 242±0. 110 100. 0±34. 1 99.8±45. 6 >0. 05
守宫木 1250 4 0. 169±0.028 0. 148±0. 015 76. 7±12.9 61.1±6. 4 >0. 05
2500 4 0. 153±0.030 0. 151±0. 053 69. 3±13.2 62.4±21. 7 >0. 05
5000 4 0. 161±0.021 0. 178±0. 074 73. 2±9.7 73.7±30. 4 >0. 05
10000 4 0. 176±0.041 0. 184±0. 057 79. 8±18.8 75.9±23. 4 >0. 05
20000 4 0. 250±0.057 0. 215±0. 061 113. 5±25. 7 88.8±25. 2 >0. 05
40000 4 0. 246±0.021 0. 274±0. 095 111. 6±9.5 113.1±39. 4 >0. 05
2. 1.3　守宫木染毒 72 h时的中性红摄入细胞毒性试验结果　见表 3。
表 3　守宫木染毒 72 h的中性红摄入细胞毒性试验结果
组别 守宫木浓度(μg /m l)
平行
孔数
吸光度值(x±s)
Ⅰ Ⅱ
细胞存活率(%, x±s)
Ⅰ Ⅱ
t检验
P值
阴性对照 - 8 0. 241±0.049 0. 201±0. 041 100. 2±20. 1 99.8±20. 6 >0. 05
守宫木 1250 4 0. 186±0.090 0. 180±0. 022 77. 2±37.4 89.6±21. 3 >0. 05
2500 4 0. 158±0. 056* 0. 160±0. 054 65. 5±23. 1* 79.4±48. 2 >0. 05
5000 4 0. 138±0. 028* 0. 145±0. 077 57. 3±37. 4* 72.3±38. 4 >0. 05
10000 4 0. 162±0.035 0. 178±0. 042 67. 0±23.1 88.6±21. 0 >0. 05
20000 4 0. 353±0. 114** 0. 374±0. 144** 146. 5±11.8** 185. 8±71. 5** >0. 05
40000 4 0. 373±0. 052** 0. 363±0. 090** 154. 8±14.5** 180. 2±44. 8** >0. 05
　　与阴性对照相比较 * P <0. 05, ** P <0. 01
2. 1.4　由图 1守宫木匀浆液浓度抑制率曲线图可更直观的了
解守宫木对 CHL细胞增殖的影响 ,细胞抑制率 =1 -细胞存活
率 , 细胞抑制率愈高细胞毒性愈强。
图 1　守宫木匀浆液细胞毒性浓度抑制率曲线图
2. 1.5　同一浓度在 24、 48、72 h的时间效应进行分析 , 方法是
将各个时间点细胞存活率做方差分析。按两种不同处理方法
分别进行分析 , 结果见图 2、图 3。
图 2　生的(Ⅰ )守宫木匀浆液细胞毒性时间存活率关系图
图 3　煮熟(Ⅱ )的守宫木匀浆液细胞毒性时间存活率关系图
细胞存活率 *与 24 h相比 P <0. 05, ▲与 48 h比较 P <0. 05
2.2　染色体畸变试验
染毒浓度从最大可获得浓度开始 , 连续观察 3个剂量组 ,
结果见表 4。
表 4　守宫木体外哺乳动物细胞染色体畸变试验结果
组别 守宫木浓度(μg /m l)
观察
细胞数
染色体畸变细胞数
Ⅰ
+S9 - S9
Ⅱ
+S9 - S9
畸变细胞率(%)
Ⅰ
+S9 - S9
Ⅱ
+S9 - S9
阴性对照 - 200 5 5 5 7 2.5 2.5 2.5 3.5
守宫木 40000 200 2 △ 9 9 1.0 - 4.5 4.5
20000 200 3 7 6 5 1.5 3.5 3.0 2.5
10000 200 5 2 5 10 2.5 1.0 2.5 5.0
5000 200 - 4 - - - 2.0 - -
　　△细胞有丝分裂指数 <50%
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3　讨论
在中性红摄入细胞毒性试验中 , 守宫木匀浆液染毒 24 h
时无论是生的(Ⅰ )还是煮熟(Ⅱ )的守宫木匀浆液各剂量组均
出现明显的细胞毒性。 煮熟 (Ⅱ )的守宫木匀浆液从
2 500 μg /m l剂量组就开始出现细胞毒性有显著意义的增强 ,
20 000 μg /m l剂量组细胞毒性最强 , 随后下降;生的(Ⅰ )守宫
木匀浆液从 5 000 μg /m l剂量组开始细胞毒性与对照组比较
有显著意义的增强 , 在 10 000 μg /m l剂量出现最大细胞毒性 ,
随后降低 , 在最大剂量组 40 000μg /m l时未观察到明显的细
胞毒性。守宫木匀浆液染毒 48 h时无论是生的(Ⅰ )还是煮
熟(Ⅱ )的守宫木匀浆液各剂量组均未出现有统计学意义的细
胞毒性 , 特别的是在 20 000 μg /m l和 40 000 μg /m l剂量组的
吸光度要较对照组高 ,即存活率大于 1, 没有观察到对细胞生
长的抑制作用反而出现轻微的刺激作用 , 但无统计学差异;染
毒 72 h时对细胞增长的刺激作用明显增加 , 在 20 000 μg /m l
和 40 000 μg /m l剂量组就出现有统计学差异的吸光度增加。
观察图 1可发现在较低浓度时生的(Ⅰ )和煮熟(Ⅱ )的守宫木
匀浆液的细胞毒性随着染毒浓度的提高而增强 , 但在某一浓
度达到最强后 , 相反会出现细胞的增殖现象。这是一个很难
解释的现象 ,最初我们只进行了染毒 24 h的试验 ,发现了这一
有趣的结果后为了获得更可靠的信息又重复 24 h的试验 ,并
加做了 48、72 h的试验得到了相似的结果后才有信心做进一
步的分析。在正式实验时我们还在倒置显微镜下对细胞的状
态做了仔细的观察 , 发现随着染毒浓度的增加细胞存活数量
逐渐减少;但在20 000和 40 000 μg /m l剂量组却很特殊 , 染毒
24 h时在此两个剂量组并没有观察到细胞数量 、形态与对照
组有明显差别 , 但在染毒 48和 72 h时就会明显的发现这两个
剂量组的细胞数量特别多 、细胞边界不清楚 、层次模糊 、形态
变异较大。在守宫木病理研究中观察到支气管腔内皮层细胞
有局部炎症 、坏死 、剥脱 、增生现象 [ 2] , 两者相联系是不是可以
认为在守宫木对肺支气管细胞造成损伤后会出现过度修复的
过程 , 也就是细胞病理状态下的异常增生或增殖 , 这就可以解
释为什么在 20 000和 40 000 μg /m l剂量组长时间染毒反而细
胞毒性会减弱 , 细胞数量增加。 但病理研究中认为淋巴细胞
尤其是 T细胞介导的免疫反应在守宫木诱发的阻塞性细支气
管炎发生发展过程中发挥重要的作用 [ 2] , 虽然这种免疫反应
是由于支气管上皮细胞的直接或间接的损伤引发 , 但最后发
展成紧缩型 (constrictive)阻塞性细支气管炎这种肺组织的损
伤已不是主导原因。当然这些还需要进一步的试验研究。
在守宫木匀浆液细胞毒性时间效应分析中出现了和浓度
效应分析中相似的现象 , 即在低浓度组随着染毒时间的延长
细胞毒性增强而从 10 000μg /m l剂量组开始随着染度时间的
延长细胞毒性减弱并出现细胞的增殖现象。从图 1中可较直
观的观察到这一趋势 ,生的(Ⅰ )与煮熟 (Ⅱ )的守宫木细胞毒
性时间效应分析结果相似。
中性红摄入试验是检测细胞毒性的一种方法 , 中性红染
料在细胞内分布在酸性细胞器内 , 反应了溶酶体和高尔基体
的损伤情况 , 主要作为溶酶体完整性的重要标志物 [ 6] 。实验
中活细胞被染成红色 , 死细胞不着色。守宫木匀浆液中性红
摄入试验有些剂量组出现有统计学意义的细胞毒性增强 , 就
表明其在一定浓度范围内对细胞中溶酶体和高尔基体有一定
的损伤作用。
在同一细胞系(CHL)进行的染色体畸变试验中 , 未见生
的(Ⅰ )与煮熟(Ⅱ )的守宫木匀浆液引起遗传物质的明显改
变 , 观察不到守宫木具有遗传毒性。
中性红细胞毒性试验中在同一浓度对生的 (Ⅰ )与煮熟
(Ⅱ )的两种不同处理方法的守宫木匀浆液的细胞毒性进行比
较分析 ,仅在染毒 24 h的 20 000 μg /m l剂量组发现煮熟后
(Ⅱ )的守宫木匀浆液的细胞毒性有统计学意义高于生的守宫
木匀浆液(P <0.05),剩下其它所有染毒时间点的所有剂量组
均未发现细胞毒性差别有统计学意义 , 这虽与我们预想的不
同 , 却和 H siue等在人群中的研究有一致的结果 [ 4] 。所以还不
能认为不同的食用习惯对守宫木的毒性有影响。到底什么原
因引起台湾地区食用守宫木发生阻塞性细支气管炎的地方流
行和爆发 , 而其他地区并无食用毒副作用的报道还待进一步
的研究。
虽然流行病学研究食用守宫木是台湾阻塞性细支气管炎
发生地方流行和爆发的高度可疑因子 [ 1 , 7] , 但有效的毒性成分
分析和进一步的作用机制阐明并未进行 , 所以对守宫木的毒
性还不能作出武断的结论。本研究首先应用体外细胞试验对
大陆地区的守宫木毒性做初步的分析 , 为守宫木有限的试验
研究提供一些基本的信息 , 为进一步研究准备有意义的基础
资料。
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(收稿日期:2006 -04 - 10)
1053中国卫生检验杂志 2006年 9月第 16卷 第 9期　C hinese Jou rnal ofH ea lth Laboratory Technology, S ep 2006;Vol 16　No 9