全 文 ：收稿日期:2007-08-31;　修订日期:2007-10-18
基金项目:西南交通大学校基金(No.10096034)
作者简介:魏　屹(1966-),女(汉族),四川西昌人 ,现任西南交通大学药
学院副教授 ,学士学位 ,主要从事药物分析的教学与科研工作.
高效液相色谱法测定余甘子药材中槲皮素的含量
魏　屹 , 丁雪娇 , 包金颖
(西南交通大学药学院 ,四川 峨眉　614202)
摘要:目的 建立余甘子药材中槲皮素含量测定的方法。方法 HPLC法测定槲皮素含量。色谱柱为 SHIMADZUVP-
ODS(5 μm, 250 mm×4.6 mm), 保护柱为大连中汇达 C18 , 流动相:甲醇 -0.4%磷酸溶液(含 2.4 g· L-1庚烷磺酸钠)
(50∶50), 流速 1.0ml· min-1 , 检测波长 373nm。结果 进样量在 0.02 ～ 0.20 μg范围内与色谱峰的峰面积呈良好的线
性关系(r=0.999 7), 余甘子药材平均加样回收率为 97.3% , RSD为 0.99%(n=6)。结论 该方法操作简便 、快速 , 有良
好的精密度和准确性 , 可用于余甘子药材的质量控制。
关键词:余甘子;　槲皮素;　高效液相色谱法
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2008)07-1634-01
DeterminationofQuercetininYuganzibyHPLC
WEIYi, DINGXue-jiao, BAOJin-ying(SchoolofPharmacology, SouthwestJiaotongUniversity, Emei, Sichuan614202 , China)
AbstractObjectiveToestablishamethodfordeterminationofthecontentofquercetininPhyllanthusemblicaL..Methods
Quercetinwasquantitativelydeterminedbyhighperformanceliquidchromagraphy(HPLC).WithSHIMADZUVP-ODS(5μm,
4.6mm×250mm)column, amixtureofmethanoland0.4% H
3
PO
4
(with2.4 g· L-1C
7
H
15
SO
3
Na)(50∶50)wasusedasmo-
bilephase, theflowratewas1ml· min-1andUVdetectionwavelengthwasat373 nm.ResultsThelinearrelationshipwasgood
withintherangeof0.02 ～ 0.20μg(r=0.9997).TheaveragerecoveryofChinesemedicinalplantPhylanthuswas97.3% and
therelativestandarddeviationwasbelow0.99%(n=6).ConclusionThemethodisfast, simple, accurateandreproducibleand
canbeusedforthequalitycontrolofPhylanthusemblicaL.
KeywordsPhyllanthusemblicaL.;　Quercetin;　HPLC
　　余甘子为大戟科叶下珠属(Phylanthus)植物余甘子 Phyllan-
thusemblicaL.的干燥成熟果实。 《云南省药品标准》《藏药标准》
《中国药典》均收载。 别称滇橄榄 、橄榄 、油甘子 、望果;藏药称
“久如拉”, 傣药称 “麻项帮”;古印度梵语称 “庵摩勒 ”。在云南
地区常作橄榄使用 , 还是藏族习用药材。 味酸 、甘 、涩 , 主要用于
治疗胃痛 、肠炎 、黄疸型肝炎 、淋巴结核 、高血压病等。研究表明
余甘子具有抗氧化 、抗癌 、抗病毒 、降血脂等作用 [ 1] 。余甘子主
要含没食子酸(Gallicacid);鞣花酸(Elagicacid);1-O-没食子
酰基 -β -D葡萄糖;3, 6-二 -O-没食子酰基 -D-葡萄糖;诃
子酸(Chebulinicacid);槲皮素(Quercetin);诃黎勒酸(Chcbtllagic
acid);鞣料云实精(Corilagin);3-乙基没食子酸(3-ethoxy-4, 5
-dihydroxy-benzoicacid)等 , 其中槲皮素主要以槲皮苷的形式
存在。余甘子还含有大量维生素 C(1.0% ～ 1.8%), 且含量稳
定 [ 2] 。本实验采用高效液相色谱法测定余甘子药材中槲皮素的
含量。
1　仪器与试药
岛津 LC-20AT高效液相色谱仪 、SPD-20A紫外检测器 、
CBM-102色谱数据处理机;槲皮素对照品由中国药品生物制品
检定所提供 , 甲醇 、庚烷磺酸钠为色谱纯 , 其它试剂均为分析纯 ,
水为纯净水。
余甘子药材产地为云南省新平县平甸乡 ,春季采收干燥。经
作者鉴定为大戟科叶下珠属植物余甘子 PhyllanthusemblicaL.的
果实。
2　方法与结果
2.1　色谱条件 SHIMADZUVP-ODS(5 μm, 250 mm×4.6
mm)色谱柱 ,大连中汇达 C18保护柱 , 甲醇 -0.4%磷酸溶液(含
2.4g· L-1庚烷磺酸钠)(50∶50), 流速 1.0 ml· min-1;柱箱温
度 35℃, 紫外检测波长 373 nm, 在上述条件下 , 样品中槲皮素与
其它峰分离度大于 2.0, 理论塔板数达 10 000以上 , 槲皮素峰拖
尾因子在 1.05 ～ 1.18之间 , 且样品中其它组分色谱峰无干扰 , 见
图 1。
1.槲皮素峰　 a-槲皮素对照品
b-余甘子供试品(云南)　c-余甘子供试品(四川)
图 1　槲皮素对照品与余甘子供试品 HPLC图
2.2　对照品溶液的制备 取槲皮素对照品适量 , 精密称定 ,用甲
醇溶解 ,制成含槲皮素 0.010mg· ml-1的对照品溶液。
2.3　供试品溶液制备 取余甘子粉末(过 40目筛)约 5 g,精密
称定 , 加入 250ml甲醇 ,加热回流 1.5 h, 回收甲醇 , 残渣精密加
入甲醇 -5%盐酸溶液(4∶1)的混合液 25 ml,称定重量 , 加热回
流 30 min, 放冷 , 再称定重量 , 用甲醇补足减失的重量 , 摇匀 , 滤
过 , 取续滤液 ,过 0.45μm滤膜 [ 3 , 4] ,即得。
2.4　标准曲线与线性范围 精密吸取槲皮素对照品溶液 2, 4, 6,
10, 14, 20 μl进样测定 , 按上述色谱条件测定峰面积 , 以峰面积为
纵坐标 ,进样质量数(μg)为横坐标 , 进行线性回归计算 , 得回归
方程:Y=53 819X-45 028 (r=0.999 7), 在 0.02 ～ 0.20 μg范
围内槲皮素有良好的线性关系。
2.5　精密度实验 精密吸取槲皮素对照品溶液 10 μl, 连续进样
6次 ,记录色谱图 , 槲皮素保留时间 tR=15.512, 其峰面积相对标
准偏差 RSD值为 0.97%(n=6)。
2.6　重复性实验 分别取同一批余甘子药材按 “ 2.3”项下方法
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时珍国医国药 2008年第 19卷第 7期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008VOL.19NO.7　
制备供试品溶液 5份 , 进样 , 记录色谱图 , 计算结果 ,药材中槲皮
素含量的平均值为 0.563 g, RSD值为 0.89%。
2.7　供试品溶液的稳定性实验 取同一份余甘子药材供试品溶
液 , 室温下 ,分别于 0, 2, 6, 10, 14, 18, 24 h, 进样 7次 , 记录色谱
图 , 其峰面积相对标准偏差 RSD值为 1.07%(n=7)。实验结果
表明供试品溶液在 24h内稳定。
2.8　加样回收率实验 取已知含量的余甘子粉末 6份 , 每份 5
g, 精密称定 ,分别精密加入槲皮索对照品溶液(0.010 mg/ml)16
ml, 按 “ 2.3”项下方法制备供试品溶液 ,在上述色谱条件下进样
10μl, 记录色谱图 ,结果余甘子的加样回收率为 97.3%, RSD值
为 0.99%(n=6)。结果见表 1。
表 1　槲皮素加样回收率结果
称样量m/g 样品中含量 m/mg 测得量m/mg 回收率(%) 平均值(%) RSD(%)
5.334 0 0.300 3 0.455 6 97.1
5.029 2 0.283 1 0.437 8 96.7
5.009 1 0.282 0 0.436 4 96.5 97.3 0.99
4.431 2 0.249 5 0.403 9 96.5
4.936 2 0.277 9 0.435 2 98.3
5.159 8 0.294 8 0.452 7 98.7
　　对照品加入量为 0.160mg
2.9　样品的测定 称取余甘子药材 5 g,按 “ 2.3”项下方法制备
供试品溶液 , 在上述色谱条件下分别进样 10 μl,作者采收的云南
省新平县的余甘子药材中槲皮素含量为 0.056 mg· g-1(n=
2),成都荷花池药材市场购买的川产余甘子药材中槲皮素含量
为 0.086mg· g-1(n=2)。结果见表 2。
3　讨论
3.1　流动相的考察 曾考察过甲醇 -水 -磷酸(50∶50∶
0.2)[ 5] ,乙腈 -水(36∶64), (40∶ 60), 乙腈 -0.4%磷酸(55∶
45), (50∶50), (36∶64),甲醇 -0.4%磷酸(40∶60), (45∶55),
(50∶50)[ 3] 。以甲醇 -0.4%磷酸(50∶50)系统对待测成分的分
离效果较好。且加入庚烷磺酸钠在甲醇 -0.4%磷酸(50∶50)系
统下以每升流动相内含 1.2g时对峰形的改善效果达到最佳值。
表 2　余甘子中槲皮素含量测定结果
产地 称样量m/g 峰面积
槲皮素含量
C/mg· g-1
平均值
C/mg· g-1
市售(成都荷 5.003 0 882 581.1 0.086 2
0.086花池药材市场) 5.003 2 887 908.4 0.086 7
云南省新平县 5.017 9 562 490.2 0.056 2
0.056
5.054 0 570 129.8 0.056 5
3.2　检测波长的确定 在 190 ～ 500 nm波长范围内进行紫外检
测 , 槲皮素在 373nm波长处有最大吸收 ,在此波长处供试液中槲
皮素与其他组分色谱峰得到较好分离。
3.3　样品测定前的处理 余甘子粉末极易吸湿 , 称量前可在
60℃下干燥 , 经比较槲皮素未损失。 《中国药典》 2005年版对余
甘子药材去核与否未作规定 ,实验所用的荷花池所售余甘子为去
核的 , 而云南采集的余甘子并未做去核处理 , 结果显示四川产余
甘子比云南产余甘子所测槲皮素含量高近 1.5倍 ,且在槲皮素峰
后多一小峰 ,可能与余甘子果核与余甘子果肉中槲皮素含量和化
学成分组成的差异有关。
本实验首次采用高效液相色谱法对余甘子中槲皮素的含量
进行测定 ,具有快速 、简便 、良好的精密度和准确性等优点 ,适用
于余甘子药材的质量控制。
参考文献:
[ 1 ] 　张兰珍 ,赵文华 ,郭亚健 ,等.藏药余甘子化学成分研究 [ J] .中国中
药杂志 , 2003, 28(10):940.
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菜素的 HPLC测定 [ J].药物分析杂志 , 2006.26(12):1773.
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[ 4 ] 　孙也之 ,王　琳 ,刘　振.高效液相色谱法测定白花蛇舌草中槲皮
素的含量 [ J] .广东药学院学报 , 2007, 23(1):5.
[ 5 ] 　薛　珺 ,李凤仪.中草药中槲皮素测定方法的研究 [ J] .江西化工 ,
2006, 12:9.
收稿日期:2007-08-24;　修订日期:2007-12-10
基金项目:内蒙古自治区蒙药现代化研究项目(No.MX2005ZB018)
作者简介:杨来秀(1964-),女(汉族),内蒙古呼和浩特人 ,现任内蒙古医学院药学院副教授 ,学士学位 ,主要从事中药品种和质量研究工作.
石榴的质量标准研究
杨来秀 ,温爱平 ,王玉华 ,吕　帅
(内蒙古医学院·药学院 , 内蒙古 呼和浩特　010059)
摘要:目的 建立石榴的质量控制标准。方法 采用薄层色谱法对石榴有效成分没食子酸进行定性分析;采用高效液相
色谱法测定石榴中没食子酸含量 。结果 石榴供试品与对照品色谱相应的位置上 , 显相同颜色的斑点;没食子酸的浓度
在 4.62 ～ 23.10 μg· ml-1范围内呈良好的线性关系(r=0.999 8), 平均回收率 98.19 %(RSD=1.68%)。结论 该方法
灵敏 , 准确可靠 ,重复性好 , 可作为石榴质量控制的方法。
关键词:石榴;　没食子酸;　薄层色谱法;　高效液相色谱法
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2008)07-1635-02
StudyontheQualityStandardsofPomegranate
YANGLai-xiu, WENAi-ping, WANGYu-hua, L Shuai
(ColegeofPharmacology, InnerMongolianMedicalColege, Hohhot010059 China)
Abstract:ObjectiveToestablishthequalitativecontrolmethodsforPomegranate.MethodsThethinlayerchromatographicmethodwasusedforidentificationofgalicacidinpomegranate, andthehighperformanceliquidchromatographicmethodwas
usedforassay.ResultsPomegranateforsampleandreferencesubstanceshowedthesamecolordotincorespondingchromato-
graphposition.Thestandardcurveshowedagoodlinearrelationshipwithintherangeof4.62 ～ 23.10μg· ml-1.Theaveragere-
coverywas98.19% withtheRSDof1.68%.ConclusionThemethodsaresensitiveandreliable, andcanbeusedtocontrolthe
qualityofthepomegranate
Keywords:Pomegranate;　Gallicacid;　TLC;　HPLC
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008VOL.19NO.7 时珍国医国药 2008年第 19卷第 7期