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ReproductiveBiologyofNelumboNuciferaPlantedinFujian
HUANGZe-hao1,2,GAOHua-juan1,FANShi-ming1,etal
(1.Departmentofpharmacy,FCTCM,Fuzhou,Fujian350108,China;
2.Schoolofpharmacy,Fudanuniversity,Shanghai200032,China)
Abstract:NelumbonuciferaplantedinFujianGAPbasewasselected,thedevelopmentofthemi-
crospores,andthedynamicoftheendotheciumandtapetalcelwereobservedbyparafinsection.Theresults
ofthedissociatedroottipsshowedthatitschromosomecomplementis2n=16.
Keywords:NelumbonuciferaGaertn.;reproductivebiology;microspore;chromosome
收稿日期:2007-05-16
基金项目:福建省自然科学基金资助项目(C0310027),福建省科技三项费用资助省属高校基础性研究专项项目(K02084)
作者简介:王瑞国(1972—),男,讲师。
余甘子为大戟科叶下珠属植物余甘子 Phyl-
lanthusemblicaL.的果实。临床用于多种炎症性疾
病的治疗,对急性肝损伤也具有保护作用[1]。本文
探讨余甘子对棉球肉芽肿形成的影响,并初步探
讨其机制。现将研究结果报道如下。
1 材 料
1.1 试验药物与制备 余甘子(粉甘)采自惠安
县紫山镇蓝田村。清洗后50℃干燥,去核。取干燥
果肉加冷水浸泡,煎煮 2次,过滤,合并滤液浓缩
至 0.36g/ml、0.18g/ml和 0.09g/ml3种浓度备
用。醋酸地塞米松为福州福药制药有限公司产品,
用蒸馏水配成混悬液备用。
1.2 试剂与仪器 TNF-aRIAKit和 IL-1βRIA
Kit为解放军总医院科技开发中心放免所产品,
NO试剂盒为南京建成生物工程研究所产品,以上
试剂盒均按相应说明书使用。其余试剂均为分析
纯。FJ-2008psγ-放射免疫记数器为西安核仪器
厂产品,DDL-5低速冷冻离心机为上海安亭科学
仪器厂出品,ELx808酶标仪为美国宝特公司产
品。
1.3 实验动物 清洁级 Wistar大鼠,体重 180±
10g,雌雄各半,由上海斯莱克实验动物有限责任
余甘子抗大鼠棉球肉芽肿形成及其机制的实验研究
王瑞国 1,郑良朴 2,林久茂 2,王锦菊 1
(1.福建中医学院药学系,福建 福州 350108;2.福建中医学院中西医结合研究院,福建 福州 350108)
摘要:探讨余甘子对慢性炎症的影响及其机制。制备大鼠棉球肉芽肿模型,用余甘子进行干预,
观察棉球肉芽肿周围血管形态,检测棉球肉芽肿干重,检测血清中 TNF-a、IL-1β和 NO。结果发现
余甘子降低棉球肉芽肿周围血管充血,降低棉球肉芽肿干重,降低血清中 TNF-a、IL-1β和 NO水
平。结论:余甘子抑制棉球肉芽肿形成,其机制与降低 TNF-a、IL-1β和 NO水平有关。
关键词:余甘子;肉芽肿;肿瘤坏死因子-a;白细胞介素-1β;一氧化氮
中图分类号:R285.5 文献标识码:A 文章编号:1004-5627(2007)04-0022-03
!!!!!!!!!!!!!!!!!
JournalofFujianColegeofTCMAugust2007,17(4)
福建中医学院学报 2007年 8月 第 17卷 第 4期
22
DOI:10.13261/j.cnki.jfutcm.001875
TNF-a(ng/ml)
2.32±0.35
3.31±0.421)
2.23±0.512)
2.68±0.563)
2.89±0.53
1.86±0.221)2)
组 别
正常组
模型组
余甘子高剂量组
余甘子中剂量组
余甘子低剂量组
醋酸地塞米松组
表 2 各组大鼠血清 TNF-a、IL-1β和 NO的比较(x±s)
动物数(只)
10
10
10
10
10
10
剂量(g/kg·d)
－
－
3.6
1.8
0.9
7.5×10-5
注:与正常组比较,1)P＜0.01;与模型组比较,2)P＜0.01,3)P＜0.05
IL-1β(ng/ml)
0.66±0.08
1.03±0.211)
0.43±0.182)
0.88±0.36
0.62±0.232)
0.32±0.061)2)
NO(μmol/L)
15.23±2.56
24.35±3.361)
17.54±3.872)
20.21±2.743)
19.17±3.622)
14.53±2.752)
组 别
模型组
余甘子高剂量组
余甘子中剂量组
余甘子低剂量组
醋酸地塞米松组
表 1 各组大鼠棉球肉芽肿干重的比较(x±s)
动物数(只)
10
10
10
10
10
剂量(g/kg·d)
－
3.6
1.8
0.9
7.5×10-5
棉球肉芽肿干重(mg)
56.5±6.7
31.3±5.21)
40.5±5.31)
46.2±7.12)
16.8±2.31)
注:与模型组比较,1)P＜0.01,2)P＜0.05
公司提供,许可证号 scxk(沪)2003-0003,合格证
号 No.0005335。在福建中医学院实验动物中心清
洁级鼠类实验室(医动字第 23-016号)进行饲养
和试验。
2 方 法
2.1 试验分组 将清洁级 Wistar大鼠 60只随
机分为 6组,分别为正常组,模型组,余甘子高剂
量组、中剂量组和低剂量组,醋酸地塞米松组。每
组10只,雌雄各半。正常组常规饲养。
2.2 试验方法 模型组大鼠用乙醚麻醉,在背部
切开一小口,用眼科镊将己经称重为 20mg的灭菌
棉球从小切口植入皮下,随即缝合皮肤,用碘液消
毒后常规饲养备用。其它各试验组均同样造模。各
给药组在手术次日开始给药,连续12d。于第13d
眼眶取血,4℃3000rpm离心 10min,分离血清备
用,分别按试剂盒使用说明测 TNF-a、IL-1β和
NO。取血后处死大鼠,在原切口处切开皮肤,观察
棉球肉芽肿周围血管形态,将棉球连同周围结缔
组织一起取出,剔除周围脂肪组织,放烘箱中 50℃
烘干24h,称干重。该干重减去棉球原重量即得肉
芽肿干重。
2.3 统计学分析 实验数据用 x±s表示,组间比
较采用t检验。
3 结 果
3.1 对大鼠棉球肉芽肿干重的影响 与模型组
比较,余甘子各剂量和醋酸地塞米松均可降低棉
球肉芽肿的干重。余甘子各剂量中,高剂量的作用
最强,说明余甘子可以抑制肉芽组织增生。结果见
表 1。
3.2 对模型大鼠血清 TNF-a、IL-1β和 NO的影
响 与模型组比较,高剂量的余甘子和醋酸地塞
米松均可显著降低血清 TNF-a、IL-1β和 NO。余
甘子降低血清 TNF-a作用呈现一定的量效趋势。
与正常组比较,醋酸地塞米松可显著降低血清
TNF-a和IL-1β。结果见表2。
3.3 余甘子对大鼠棉球肉芽肿周围血管形态的
影响 肉眼观察,模型组大鼠皮下棉球肉芽肿周
围血管明显,充血,血管颜色深,部分血管有淤血。
醋酸地塞米松组大鼠皮下棉球肉芽肿周围组织颜
色较浅,血管不明显,无充血,棉球肉芽肿与周围
组织易剥离。余甘子各给药组大鼠皮下棉球肉芽
肿周围组织颜色比醋酸地塞米松组深,比模型组
浅,周围血管充血程度较轻。
4 讨 论
炎症是在致炎因素作用下由各种炎症细胞及
其释放的炎症介质和细胞因子共同参与,引起毛
细血管扩张、通透性增加,中性粒细胞趋化、游走
至炎症反应灶并释放炎症介质和细胞因子以及后
期的细胞外基质的改变。急性炎症后期的病理与
慢性炎症的病理过程相似,主要是细胞修复。其实
质是多种免疫细胞和炎症细胞的功能紊乱,其合
第4期 王瑞国等:余甘子抗大鼠棉球肉芽肿形成及其机制的实验研究 23
成和释放的细胞因子和炎症介质交互作用,反过
来又促进免疫细胞和炎症细胞功能紊乱。其中,细
胞因子如TNF-a、IL-1β和 NO起重要作用。TNF-
a和IL-1β对炎症细胞有趋化和粘附作用,可促进
活化细胞进入炎性部位,促进炎症细胞附壁增殖,
且能增加血管通透性、刺激内皮细胞释放血小板
活性因子及前列环素等,在慢性炎症和急性炎症
后期都起重要作用。TNF-a和 IL-1β的合成释放
是密切地互相影响的:IL-1β诱发靶细胞合成释
放 TNF-a,而 TNF-a又引发它的靶细胞生成 IL-
1β。IL-1β还能使靶细胞合成释放 IL-1β,释出的
IL-1β作用于该靶细胞本身的 IL-1β受体,呈自
分泌的形式。NO也是一种重要的信使物质,同时
也是一种重要的炎症介质,在炎症反应的许多环
节发挥复杂的调节作用,其促炎症反应包括促进
血管扩张,增强血管通透性,激活前列腺素合成酶
等,在慢性炎症反应中起重要作用。本实验结果表
明,余甘子可以降低血清 TNF-a和 IL-1β以及血
清 NO水平,改善棉球肉芽肿周围血管的形态,抑
制棉球肉芽肿形成。但是,由于 TNF-a、IL-1β和
NO都是多细胞来源,包括巨噬细胞、中性粒细胞
和血管内皮细胞等,不同来源的 TNF-a、IL-1β和
NO对这些细胞有复杂影响,同时存在自分泌形
式,从而构成复杂的网络。本实验未能确切揭示具
体的靶细胞,有待进一步的研究。
本实验中观察到,醋酸地塞米松组棉球肉芽
肿干重低于 20mg,即低于原先植入的棉球重量,
可能是由于放烘箱中 50℃烘干24h引起。醋酸地
塞米松也使血清 TNF-a和 IL-1β降低,与正常组
有显著差异,说明其抑制免疫的作用很强,使用时
须注意。和以往抗棉球肉芽肿形成的文献相比,本
实验注意观察棉球肉芽肿周围的血管形态,发现
模型组和给药组棉球肉芽肿周围的血管形态有明
显区别,这一点对于今后抗炎药物研究可能具有
参考价值。棉球肉芽肿周围血管形态可否作为这
一模型的观察指标,值得探讨。
余甘子主要的化学成分是鞣质类,鞣质含多
羟基,在一定浓度下有很强的抗氧化作用,可减少
自由基产生并降低自由基对细胞膜的攻击,从而
对许多病理环节进行干预,表现多种形式的药理
作用。综上所述,可以初步推断,余甘子中的鞣质
类成分减少自由基产生并降低自由基对细胞膜的
攻击,或者直接通过对巨噬细胞、中性粒细胞和血
管内皮细胞等的保护作用,减少高浓度 TNF-a、
IL-1β和NO造成的病理损害,从而抑制棉球肉芽
肿形成和改善棉球肉芽肿周围血管形态,改善炎
症后期以及慢性炎症的病理过程,具有抗炎作用。
参考文献:
[1] 王锦菊,王瑞国,林久茂,等.余甘子对急性肝损伤的干预作
用[J].福建中医学院学报,2006,16(1):42-43.
ExperimentalStudyonInhibitiveEfectandMechanismofPhylanthus
EmblicaontheFormationofCotonBalGranulomainRats
WANGRui-guo1,ZHENGLiang-pu2,LINJiu-mao2,etal
(1.DepartmentofPharmacy,FCTCM,Fuzhou,Fujian350108,China;
2.FujianAcademyofIntegrativeMedicine,FCTCM,Fuzhou,Fujian350108,China)
Abstract:ToexploretheinhibitiveefectanditsmechanismofPhylanthusemblicaonthechronic
inflammation.ThecotonbalgranulomamodelsweremadeinratsandadministeredwithPhylanthusemblica.
TheresultsshowedthatPhylanthusemblicacouldinhibittheformationofcotonbal granuloma,reducethe
levelsofserumTNF-α,IL-1βandNO.Conclusion:Phylanthusemblicacouldinhibittheformationof
granuloma,whichisinvolvedinreducingthelevelsofserumTNF-α,IL-1βandNO.
Keywords:PhylanthusemblicaL.;granuloma;TNF-α;IL-1β;NO
福建中医学院学报 第17卷24