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飞扬草有效成分的定性分析



全 文 :药 物 研 究
The medicine study
飞扬草有效成分的定性分析
黄 毅 郑维思 郑莹莹 彭东洲 谭 红
广东省珠海市慢性病防治站,广东 珠海 519000
【摘 要】 目的:对飞扬草进行化学成分初步研究。方法:采用化学法和 HPLC法对飞扬草水提液、乙醇提取液、石油醚提取液进行
化学成分系统预试,对其化学成分进行分析鉴别。结果:通过化学鉴别,初步推断其主要含有糖和苷类、氨基酸、酚类或鞣质、有机酸、
甾体或三萜类和黄酮成分;进一步采用 HPLC法对其提取物中所含的多酚类成分进行鉴别,可检测出没食子酸和槲皮素。结论:该研究提
示飞扬草提取物可能含有的化学成分的种类,为其开发利用提供了实验基础。
【关键词】 飞扬草;鉴别;化学法;薄层色谱法
【中图分类号】R284. 1 【文献标识码】A 【文章编号】1007 - 8517 (2013)06 - 0026 - 02
Qualitative Analysis on Effective Constituents of Euphorbiae hirtae herba
HUANG Yi,ZHEN WeiSi,ZHENG Yingying,PENG dongzhou,TAN Hong
(Zhuhai Chronic Disease Prevention And Control Station,GUANG DING,Zhuhai,519000,China)
Abstract:Objective:To analyze the effective constituents of Euphorbiae hirtae herba. Methods:Used the method of systematic
pretest and HPLC to identify its chemical composition in the ethanol extract,water extract and ligroin extract。Results:It is concluded
that Euphorbiae hirtae herba might contain carbohydrates and their glycosides,amino acids,phenols and tannin,organic acids,ster-
oidal triterpene,flavonoids. The results of HPLC showed that Gallic acid and Quercetin can be found in the extract. Conclusion:The
research shows the kinds of the chemical compositions in the Euphorbiae hirtae herba and provides evidence for its further development
and utilization of the drug resources.
Key words:Euphorbiae hirtae herba;identification ;chemical methods;HPLC
飞扬草 (Euphorbiae hirtae herba)为大戟科大戟属
(Euphorbia)植物,又名飞扬、脚癣草、大乳汁草、奶子
草、天泡草等,为一年生草本。分布于热带与亚热带,在
我国广泛分布于南方地区,主产广东,资源十分丰富,是
南方民间临床作为外用,应用于湿疹、皮炎及顽癣疗效显
著的一味常用草药,在民间广为流传。飞扬草有清热解毒、
杀虫止痒功效,可用于治疗肠炎、菌痢、上呼吸道感染、
尿路感染,还可通乳,消肿,治疗各种出血[1]。本文通过
化学法和 HPLC法,研究了飞扬草提取物化学成分的主要
类别,为其进一步研究开发提供科学依据。
1 仪器与试药
岛津 LC - 20A型高效液相色谱仪,岛津 SPD - 20A 紫
外检测器;Sartorius BS 分析天平;C5860A 型超声波清洗
器;没食子酸对照品 (批号 110831 - 200803)、芦丁对照品
(批号 100080 - 200707)购于中国药品生物制品检定所;槲
皮素对照品 (批号 090426,纯度 > 98%,上海融禾医药有
限公司) ,飞扬草 (采自珠海,风干粉碎,备用。) ;试剂
均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 化学法鉴别[2] 根据药材成分在各种溶剂中溶解度的
不同,分别采用水、乙醇、石油醚 (60 - 90℃)提取,进
行化学鉴别。
2. 1. 1 水浸液的化学鉴别 飞扬草粗粉 10g 加水 100ml,
在 50 - 60℃的水浴上加热 1h 后过滤,滤液作为供试品溶
液,按表 1 中的项目进行化学鉴别。
2. 1. 2 乙醇提取液化学鉴别[3] 取 10g 飞扬草粗粉,加
100ml乙醇,沸水浴中回流提取 1 小时 (若以叶子为原料,
要除叶绿素,方法是滤液加水稀释成 70%浓度,加等量石油
醚萃取叶绿素,分出下层 70%乙醇层,按下列步骤操作) ,
滤过。滤液回收乙醇至无醇味,取1 /2量浓缩液,加10ml乙
醇溶解,供甲项检识。剩余的浓缩液加 10ml 5%盐酸,充分
搅拌,滤过,滤液部分供乙项检识。酸水不溶部分,加 10ml
醋酸乙酯溶解,醋酸乙酯液用 5%氢氧化钠溶液振摇洗涤 2
次 (每次 2 ~3ml) ,弃去碱水层。醋酸乙酯层再用蒸馏水洗
1 ~2次,至水洗液呈中性,弃去水洗液,置于水浴上蒸发除
去醋酸乙酯,残留物用 15ml乙醇溶解,供丙项检识。
表 1 样品水浸液的化学鉴别
鉴别项目 化学反应 反应阳性判别依据
糖和苷类
(1)Molish反应 在两液层交界面出现紫红色环。
(2)银镜反应 若含还原糖,产生银褐色。
蛋白质 双缩脲反应
样品水浸液与双缩脲反应呈紫红
色、红色、紫色。
氨基酸 茚三酮反应 溶液变为紫红色或蓝色。
酚类或
鞣质
(1)Fecl3 反应 可水解鞣质显蓝至蓝黑色。
(2)Fecl3 -铁氰化钾 立即显蓝色,可能含有鞣质
(3)明胶 -氯化钠反应 产生白色浑浊或沉淀。
有机酸
(1)pH试纸检查 pH < 7
(2)溴酚蓝反应 蓝色背景上产生黄色斑点
皂苷 泡沫试验
样品水浸液置试管中,经强烈振摇可
产生持久性泡沫,不因加热而消失。
表 2 样品乙醇提取液化学鉴别 -甲项检识
鉴别项目 化学反应 反应阳性判别依据
酚类或鞣质
(1)Fecl3 反应 可水解鞣质显蓝至蓝黑色。
(2)Fecl3 -铁氰化钾 立即显蓝色,可能含有鞣质
(3)明胶 -氯化钠反应 产生白色浑浊或沉淀。
有机酸
(1)pH试纸检查 pH < 7
(2)溴酚蓝反应 蓝色背景上产生黄色斑点
黄酮
(1)三氯化铝反应
斑点呈鲜黄色,如在紫外灯下观
察,斑点有明显的黄绿色荧光
(2)盐酸 -锌粉反应
多数黄酮醇、二氢黄酮醇显红
-紫红色,黄酮类呈橙色。异
黄酮及查耳酮无变化。
(3)氨熏反应
斑点呈亮黄色,在紫外灯下观
察,斑点呈黄色荧光
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Chinese journal of ethnomedicine and ethnopharmacy
药 物 研 究
The medicine study
鉴别项目 化学反应 反应阳性判别依据
甾体或
三萜类
(1)氯仿 -浓硫酸反应
氯仿层显红色或青色,硫酸层
有绿色荧光
(2)三氯化锑 -三氯甲
烷反应
白色沉淀
蒽醌 碱液反应
加入 10%KOH液,若显红色或
紫红色,加酸后颜色消失。
表 3 样品乙醇提取液化学鉴别 -乙项、丙项检识
鉴别项目 化学反应 反应阳性判别依据
生物碱 苦味酸反应
在中性溶液中,反应生成淡黄
色沉淀。
(乙项)
碘化汞钾反应 产生白色或类白色沉淀
碘 -碘化钾反应 产生褐色或暗褐色沉淀
强心苷类 碱性苦味酸反应
溶液即刻或 15 分钟内显红色
或橙红色
(丙项) 冰醋酸 -三氯化铁反应
上层为蓝绿色,界面处为紫色
或红色环
香豆素
与内酯
(丙项)
开环与闭环反应
在稀碱液中可水解成黄色溶
液,经酸化后黄色褪去。
荧光反应
干燥后置紫外灯下观察,如呈
现蓝 - 绿色荧光,再喷洒 1%
氢氧化钾试剂,荧光加强
2. 1. 3 石油醚提取液化学鉴别 取 2g 中药粗粉,加
10ml石油醚,室温下浸渍提取 2 ~ 3 小时,滤过,滤液作为供
试品溶液,按表 4 中的项目进行化学鉴别。
表 4 样品石油醚提取液化学鉴别
鉴别项目 化学反应 反应阳性判别依据
甾体或
三萜类
氯仿 -浓硫酸反应
氯仿层显红色或青色,硫酸层
有绿色荧光
三氯化锑 -三氯甲烷反应 白色沉淀
挥发油
和油脂
油斑试验
石油醚滴于滤纸片上,观察有
无油斑,在加热后能否挥发。
2. 1. 4 药材直接化学检识
表 5 药材直接化学检识
鉴别项目 化学反应 反应阳性判别依据
氰苷类
成分
苦味酸钠反应 试纸由黄色变为砖红色
普鲁士蓝反应 滤纸蓝色
2. 1. 5 结果 结果见表 6。
表 6 样品提取液的化学鉴别
编号 鉴别项目 提取溶剂 反应(1) 反应(2)反应(3)
1 糖和苷类 水 + + + + + +
2 蛋白质 水 -
3 氨基酸 水 +
4 酚类或鞣质
水 + + + + + + + + +
乙醇 + + + + + + +
5 有机酸
水 4. 6 - 4. 8 + + +
乙醇 5 - 6 +
6 皂苷 水 -
7 黄酮 乙醇 + + +
8 甾体或三萜类
乙醇 + + + +
石油醚 + +
9 蒽醌 乙醇 +
编号 鉴别项目 提取溶剂 反应(1) 反应(2)反应(3)
10 生物碱 乙醇 - - -
11 强心苷类 乙醇 - -
12 香豆素与萜类内酯 乙醇 - -
13 挥发油和油脂 石油醚 -
14 氰苷类成分 不提取 - -
注:+:化学反应阳性 + +:化学反应现象较明显 + + +化学反
应现象很明显 -:化学反应阴性
2. 2 有机酸及多酚类成分的 HPLC鉴别
2. 2. 1 供试品溶液的制备
样 1:取飞扬草细粉 l g,精密称定,加入水 50 ml、加热回流 1
小时,滤过,定容至 50 ml作为供试液。
样 2,3:取飞扬草细粉 l g,精密称定,分别加入
50ml50%乙醇、乙醇超声提取 30 分钟,滤过,定容至 50 ml作
为供试液。
样 4:取飞扬草细粉 l g,精密称定,加入盐酸 -甲醇(1:
20)50 ml回流 60 分钟,迅速冷却至室温,过滤,残渣加少量
甲醇洗涤,洗液并入滤液中,转移至 50 ml 量瓶中,加甲醇稀
释至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0. 45 m)过滤,取续滤液,即得。
2. 2. 2 对照溶液的制备 分别取没食子酸、槲皮素、芦丁对
照品适量,精密称定,加甲醇制成浓度为每 1ml 分别含 40μl
的溶液,即得。
2. 2. 3 色谱条件 色谱柱:CLC—ODS 柱(250 mm × 4. 6
mm,5 m)。检测波长 256 nm,柱温 40℃,流速 1 ml /min,进样
量 10ul。流动相:溶剂 A,0. 5%(体积分数)甲酸;溶剂 B,甲
醇;梯度洗脱。
2. 2. 4 结果 结果如图 1 所示。
3 讨论
3. 1 系统预试法,即在未知情况下对植物中可能含有的各
类成分进行比较全面系统的定性检查。本试验采用植物化
学成分系统预试法,对飞扬草提取物进行了化学成分研究,
初步推断飞扬草中主要含有糖和苷类、氨基酸、酚类或鞣质、
有机酸、甾体或三萜类和黄酮成分。
3. 2 如图 1 所示,分别采用水、50%乙醇和 95%乙醇提取样
品,HPLC指纹图谱较为相似,但随乙醇浓度的增加,没食子
酸及 tR为 11. 5、24. 5 的成分量有所减少。
3. 3 甲醇提取液经酸水解样品,原 tR 为 26. 5 和 21. 5min 左
右的峰减小,24. 5左右的峰增大,并出现了槲皮素的峰。说明
原药材中可能含有槲皮苷类的成分。样品中芦丁峰不明显。
3. 4 水提取样品及甲醇提取液经酸水解样品中含有没食子
酸,乙醇提取液中未检出。根据没食子酸易溶于乙醇的性质,
且其为可水解鞣质的结构单元,加热提取及酸水解会使可水
解鞣质水解而转化成没食子酸,可推测出原药材中含有鞣质。
参考文献
[1]章佩芬,罗焕敏.飞扬草药理作用研究概况[J].中药材,2005,28(5) :437.
[2]肖崇厚,畅松松. 洪筱坤,等. 中药化学[M]. 上海:海科学技术出版社,
1997:595.
[3]国家药典委员会.中国药典(I部) [S].北京:化学工业出版社,2010:46.
(收稿日期:2013. 01. 25)
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