全 文 ：China Pharmacy 2014Vol.25No.39 中国药房 2014年第25卷第39期
Δ基金项目：江苏高校优势学科建设工程资助项目（No.2011
ZYX6-004）；高等学校博士学科点专项科研基金资助项目（No.20103237
120011）
＊副教授，博士。研究方向：中药及复方药效物质基础。电话：
025-85811512。E-mail：honglanwang2004@163.com
# 通信作者：教授，博士研究生导师，博士。研究方向：中药及复
方药效物质基础。电话：025-85811512。E-mail：lixiang_8182@163.com
瓜子金始载于《植物名实图考》，又名小远志、地藤草、银
不换，是远志科远志属植物瓜子金（Polygala japonica Houtt.）
的全草，主要分布于我国南方各省 [1]。瓜子金味苦、微辛，性
平，能镇咳祛痰、益智安神、活血散瘀，民间应用十分普遍且疗
效显著。瓜子金中的化学成分包括三萜皂苷、黄酮、寡糖酯
等，已有研究表明，瓜子金中的三萜皂苷类化合物具有显著的
生理活性[2-6]。大孔吸附树脂是一类非离子型高分子化合物，
具有吸附性和筛选性相结合的分离、纯化等功能，近年来在药
学领域特别是天然药物精制中应用日益广泛，成为纯化中药
有效成分的一种有效方法[7-10]。本研究以吸附容量、洗脱率、精
制度为评价指标，考察大孔吸附树脂纯化瓜子金总皂苷的工
艺条件，进一步探索纯化瓜子金总皂苷的工艺流程。
1 材料
1.1 仪器
752型紫外-可见分光光度计（上海光谱仪器有限公司）；
420型三用恒温水箱（江苏国盛实验仪器厂）；RE52CS型旋转
蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；KQ-500DE型数控超声波清洗
器（昆山市超声仪器设备厂）；EK-182A型电子分析天平（河南
兄弟仪器设备有限公司）。
1.2 药材
瓜子金购于江苏省药材有限公司，经南京中医药大学药
学院陈建伟教授鉴定为真品，凭证标本（GZJ-PJ-2010-09）存放
于南京中医药大学中药化学教研室。
1.3 试剂
瓜子金总皂苷对照品（南京中医药大学药学院中药化学
实验室自制，纯度：＞95％）；D101，AB-8大孔树脂（南开大学
化工厂）；石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、乙醇、高氯酸、冰醋酸、香
草醛均为分析纯，水为蒸馏水。
2 方法与结果
2.1 瓜子金醇提物的制备
取瓜子金药材饮片9kg，乙醇回流提取3次，浓缩得总浸
膏约1500g。
2.2 总皂苷含量的测定
2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取瓜子金总皂苷对照品
50. mg，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并定容，摇匀，即得对照
品溶液（每1ml中含瓜子金总皂苷对照品5mg）。
2.2.2 供试品溶液的制备 精密称取瓜子金醇提物浸膏2.0
瓜子金总皂苷的含量测定及其纯化工艺研究Δ
王洪兰1＊，张亚楠2，陈丽红1，李 祥1#（1.南京中医药大学药学院，南京 210046；2.第二军医大学航海与潜水医
学教研室，上海 200433）
中图分类号 R284.2；R282.17 文献标志码 A 文章编号 1001- 408（2014）39-3670-03
DOI 10.6039/j.issn.101-0408.2014.39.08
摘 要 目的：建立瓜子金总皂苷含量测定的方法学，研究瓜子金中总皂苷的纯化工艺。方法：采用紫外分光光度法测定瓜子金
中总皂苷含量，考察大孔树脂吸附、富集、纯化瓜子金总皂苷工艺。结果：瓜子金总皂苷在测定范围内均显示较好的线性关系（r＝
0.9997）；精密度、重复性、稳定性试验中RSD值均小于3.00％；加样回收率平均值为99.51％。大孔树脂纯化试验结果表明，70％
乙醇洗脱部位总皂苷含量达71.53％。结论：本研究所建立的方法快速、准确，可测定瓜子金总皂苷的含量；大孔树脂可有效富集、
纯化总皂苷，为远志属药用植物瓜子金资源的综合利用提供理论支撑。
关键词 瓜子金；总皂苷；含量测定；大孔吸附树脂
Content Determination and Purification Technology of Total Saponins from Polygala japonica
WANG Hong-lan1，ZHANG Ya-nan2，CHEN Li-hong1，LI Xiang1（1.School of Pharmacy，Nanjing University of
TCM，Nanjing 210046，China；2.Dept. of Sailing and Diving Medicine，Second Military Medical University，
Shanghai 200433，China）
ABSTRACT OBJECTIVE：To establish a method for the content determination and purification technology of total saponins from
Polygala japonica. METHODS：The content of total saponins from P. japonica was determined by UV visible spectrophotometry.
The enrichment and purification of total saponins from P. japonica was determined by macro-porous resin adsorption chromatogra-
phy. RESULTS：The amount of total saponins from P. japonica showed good linear relationship in the range of determination（r＝
0.9997）. RSDs of precision，repeatability and stability tests were all less than 3.00％. The average recovery rate was 99.51％. The
content of total saponins in 70％ ethanol elution fraction was 71.53％ in macro-porous resin purification test. CONCLUSIONS：The
established method is rapid，accurate and can be applied for the content determination of total saponins from P. japonica. The en-
richment and purification of total saponins can be determined by macro-porous resin，which provide theoretical support for compre-
hensive utilization of the resource of P. japonica.
KEYWORDS Polygala japonica；Total saponins；Content determination；Macro-porous resin
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中国药房 2014年第25卷第39期 China Pharmacy 2014Vol.25No.39
g，加水50ml 溶解后，用水饱和的乙酸乙酯萃取3次，每次
25ml，合并水层，转移至量瓶并定容至100ml，即得供试品
溶液。
2.2.3 测定波长的选择 精密量取供试品溶液0.25ml和对照
品溶液0.2ml，分别置10ml具塞试管中，水浴挥干溶剂，分别
加入0.2ml的5％香草醛-冰醋酸溶液和0.8ml高氯酸，摇匀，
置于60℃水浴中加热15min，冷却后分别加入冰醋酸5ml，摇
匀，放置10min，于紫外分光光度计下进行全波长扫描，随行试
剂作空白。扫描结果发现，两者在580nm波长处均有较大吸
收，故确定最适检测波长为580nm。
2.2.4 标准曲线的制备 精密量取5.00mg/ml 对照品溶液
0.10、0.20、0.30、0.35、0.40ml，置于5支具塞刻度试管中，随行
试剂作空白，按“2.2.3”项下方法显色并进行紫外测定。以吸
光度（y）为纵坐标，对照品进样量（x）为横坐标，进行线性回
归，得回归方程为 y＝0.3694x+0.1018（r＝0.9997）。结果表
明，对照品进样量在0.5～2.0mg 范围内与吸光度呈良好线
性关系。
2.2.5 精密度试验 精密量取对照品溶液0.2ml，按“2.2.3”项
下方法显色并进行紫外测定，在580nm波长处测定吸光度，平
行测定6次。结果，RSD＝0.41％，表明仪器精密度良好。
2.2.6 稳定性试验 按“2.2.2”项下方法制备1份供试品溶
液，精密量取0.25ml，按“2.2.3”项下方法显色并进行紫外测
定，每隔10min测定吸光度，连续测定1h。结果，30min内的
RSD＝2.37％，表明供试品溶液在30min内稳定，故测定时间
最好控制在30min以内。
2.2.7 重复性试验 按照“2.2.2”项下方法制备6份供试品溶
液，精密量取0.25ml，按“2.2.3”项下方法显色并进行紫外测
定。结果，RSD＝1.52％，表明该方法重复性良好。
2.2.8 加样回收率试验 精密称取6份样品粉末各1.0g，分别
加入一定量的对照品，按照“2.2.2”项下方法制备成6份供试品
溶液，精密量取0.25ml，按照“2.2.3”项下方法显色并进行紫外
测定，计算加样回收率。结果表明，平均加样回收率为
99.51％，RSD＝2.92％。
2.2.9 样品含量测定 分别精密称取3份瓜子金醇提物浸膏
2.0g，按照“2.2.2”项下方法制备得3份供试品溶液，分别精密
量取0.25ml，按照“2.2.3”项下方法显色并进行紫外测定，计算
总皂苷含量。结果表明，瓜子金总皂苷的平均含量为20.88％，
RSD＝0.89％。
2.3 瓜子金总皂苷的纯化工艺研究
2.3.1 大孔树脂的预处理、装柱与再生 将D-101、AB-8两种
型号树脂均用95％乙醇浸泡24h后，湿法装柱，用5倍柱体积
95％乙醇洗脱，水洗至无醇味，然后依次用5％ 盐酸（浸泡6h，
洗脱3倍柱体积，水洗至中性）和5％氢氧化钠（浸泡6h，洗脱3
倍柱体积，水洗至中性）处理，之后用95％乙醇洗脱，至乙醇洗
脱液与水1∶5（V/V）混合不呈白色混浊为止，最后水洗至无醇
味，取部分湿树脂备用。将剩余树脂置真空干燥器中于热力
学温度（T）333K干燥至恒质量得干树脂，备用。
2.3.2 大孔树脂类型与选择 大孔吸附树脂常因类型不同，
比表面积、孔径、极性差异较大，由此决定的吸附容量也有较
大的差异[11-12]。本研究以吸附容量为指标，对 D101、AB-8大孔
吸附树脂的吸附能力进行考察，以确定富集、纯化瓜子金总皂
苷的大孔吸附树脂类型。分别取上述处理得到的大孔树脂
D101、AB-8各10g（干质量），以蒸馏水湿法装柱（一柱床约
100ml），精密量取瓜子金醇提物溶液各10ml，分别上样于上
述两种树脂柱内，预吸附2h，流速1BV/ h（BV为柱床体积），
过柱流出液重吸附2次，收集流份。测定流份中瓜子金总皂苷
含量，比较树脂吸附量。结果表明，D101大孔吸附树脂吸附量
较大，故选择 D101大孔吸附树脂纯化、富集瓜子金总皂苷。
D101、AB-8两种树脂吸附能力比较见表1。
表1 D101、AB-8两种树脂吸附能力比较（mg）
Tab 1 Comparison of adsorption ability between D101and
AB-8（mg）
树脂型号
D 101
AB- 8
上柱液中总皂苷量
41.76
41.76
过柱液中总皂苷量
5.78
16.65
树脂吸附总皂苷量
35.98
25.11
2.3.3 洗脱溶媒的确定 精密量取瓜子金醇提取物供试品溶
液10ml，依次用蒸馏水、30％乙醇、50％乙醇、70％乙醇、95％
乙醇各4BV洗脱，洗脱速度1BV/ h，按1BV/份（100ml）收集
流份。测定各流份中瓜子金总皂苷含量，计算洗脱率。结果
表明，50％乙醇和70％乙醇洗脱部位为瓜子金总皂苷类成分
的主要存在部位，且70％乙醇洗脱能力强于50％乙醇，故确定
以70％乙醇作为瓜子金总皂苷类成分的洗脱溶媒。蒸馏水、
30％乙醇洗脱时均有一定量的固形物存在（但是因为含量比
较少，无法每份流液均测得固体物具体含量，仅目测发现）。
表明蒸馏水、30％乙醇洗脱可达到除杂的目的。不同浓度乙
醇洗脱试验数据见表2[洗脱率＝洗脱液中总评苷量/树脂吸附
总皂苷量×100％]。
2.3.4 洗脱溶媒用量的确定 精密量取瓜子金醇提物供试品
表2 不同浓度乙醇洗脱试验数据
Tab 2 Elution test of ethanol with different concentrations
洗脱溶酶
蒸馏水
30％乙醇
50％乙醇
70％乙醇
95％乙醇
1 BV
洗脱液中总皂苷量，mg
2.35
－
4.71
9.16
－
洗脱率，％
6.53
－
13.09
25.46
－
2 BV
洗脱液中总皂苷量，mg
－
－
7.69
－
－
洗脱率，％
－
－
21.37
－
－
3 BV
洗脱液中总皂苷量，mg
－
－
2.77
－
－
洗脱率，％
－
－
7.70
－
－
4 BV
洗脱液中总皂苷量，mg
－
－
2.35
－
－
洗脱率，％
－
－
6.53
－
－
注：“-”表示未检出
note：“-”means no detected
溶液10ml，依法上柱，依次用蒸馏水3BV，30％乙醇、70％乙
醇、95％乙醇各4BV洗脱，洗脱速度1BV/ h，以1BV/ 份收集
流份。测定各流份中瓜子金总皂苷含量，计算洗脱率并测定
固形物量。 结果表明，蒸馏水洗脱用量至1BV时，极少部分
瓜子金总皂苷析出；30％乙醇洗脱用量至4BV时，在流份中未
检出瓜子金总皂苷；但30％乙醇洗脱至3BV时有明显的固形
物存在；而洗脱用至4BV时未发现固形物。表明30％乙醇洗
脱可达到除杂质的目的，并且可以初步确定30％乙醇用量为
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3BV。70％乙醇洗脱用量至2BV时，瓜子金总皂苷已基本被
解吸附完全；当70％乙醇用量至3BV时，流出液中未检出皂苷
类成分，但为了保证洗脱完全，故将乙醇用量加至3BV。进一步
确定了洗脱溶媒用量为蒸馏水3BV、30％乙醇、70％乙醇各3
BV，收集70％乙醇洗脱部位。洗脱溶媒用量的确定见表3。
综上所述，初步确定最佳工艺为D101大孔吸附树脂纯化
表3 洗脱溶媒用量的确定
Tab 3 The amount of elution solvent
洗脱溶酶
蒸馏水
30％乙醇
70％乙醇
95％乙醇
1 BV
洗脱液中总皂苷量，mg
2.12
－
24.46
－
洗脱率，％
5.89
－
67.98
－
2 BV
洗脱液中总皂苷量，mg
－
－
2.46
－
洗脱率，％
－
－
6.84
－
3 BV
洗脱液中总皂苷量，mg
－
－
－
－
洗脱率，％
－
－
－
－
4 BV
洗脱液中总皂苷量，mg
－
－
－
－
洗脱率，％
－
－
－
－
固体量，mg
49.79
40.89
33.25
－
注：“-”表示未检出
note：“-”means non detected
瓜子金总皂苷，蒸馏水、30％乙醇、70％乙醇各3BV以1BV/ h
速度依次洗脱，收集70％乙醇洗脱部位。
2.3.5 工艺验证试验 精密量取瓜子金醇提物溶液10ml，依
法上柱，平行2份，分别用蒸馏水、30％乙醇、70％乙醇各3BV
洗脱，洗脱速度1BV/h，以1BV/份收集流份。测定各流份中
瓜子金总皂苷含量、固形物量，计算洗脱率及精制度。蒸馏水
仅能够洗脱出少量的总皂苷，30％乙醇洗脱部位未检出瓜子
金总皂苷，但30％乙醇洗脱部位有固形物存在，表明达到了除
杂、纯化的目的。70％乙醇洗脱部位总皂苷洗脱率71.53％ ，
为其主要富集部位，且精制度达343. 0％，纯化效果较好，表明
所选工艺条件适宜瓜子金总皂苷的富集、纯化且重现性良
好。工艺参数验证性试验结果见表4[瓜子金总皂苷精制度＝
（70％乙醇洗脱液固形物中总皂苷含量/瓜子金上柱液固形物
中总皂苷含量）×100％]。
表4 工艺参数验证性试验结果
Tab 4 Results of technique parameter validation test
评价指标
树脂吸附总皂苷量，mg
上柱液中总固形物中总皂苷含量，％
水洗脱部位总皂苷量，mg
水洗脱部位总固形物量，mg
30％乙醇洗脱部位总皂苷量，mg
30％乙醇洗脱部位总固形物量，mg
70％乙醇洗脱部位总皂苷量，mg
70％乙醇洗脱部位总固形物量，mg
70％乙醇洗脱部位总固形物中总皂苷含量，％
70％乙醇洗脱部位洗脱率，％
瓜子金总皂苷精制度，％
试验1
35.98
20.88
2.36
50.13
－
42.75
26.35
34.23
71.26
73.24
341.28
试验2
35.98
20.88
2.62
49.70
－
43.66
25.12
32.91
72.10
69.82
345.31
平均结果
35.98
20.88
2.49
49.92
－
43.21
25.24
33.57
71.68
71.53
343.30
3 讨论
皂苷类成分大多无色，在近紫外区无明显吸收峰，但与某
些试剂反应后能产生颜色，利用这一性质可进行比色测定[12]。
本次紫外分光光度法测定瓜子金总皂苷含量发现，瓜子金总
皂苷在一定范围内均显示较好的线性关系（r＝0.9997）；精密
度、重复性、稳定性试验测定结果显示，其 RSD 值均小于
3.00％，回收率平均值为99.51％。使用紫外分光光度法测定
瓜子金中总皂苷含量快速、准确。紫外分光光度法测定瓜子
金总皂苷虽然反应比较灵敏、方法简单易行，但反应所产生的
颜色受试剂的浓度、反应温度、反应时间等影响较大，因此试
验过程中必须注意反应条件的控制。
大孔树脂吸附法是一种工艺简单、操作安全、节省成本且
分离效果较好的分离方法。大孔吸附树脂是利用大孔树脂的
多孔结构和树脂的选择性吸附功能，从中药提取液中分离精
制有效成分或有效部位的技术，它既有物理吸附作用，又因多
孔状结构而能选择性筛析，所以在中药的总皂苷纯化富集工
艺中有良好的发展前景。结果显示，大孔树脂70％醇洗部位
总皂苷含量为71.68％，洗脱率可达71.53％。本研究得出纯化
瓜子金总皂苷的工艺条件为D101大孔树脂纯化瓜子金总皂
苷，蒸馏水、30％乙醇、70％乙醇3BV，以1BV/h速度依次洗
脱，收集70％乙醇洗脱部位。
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（收稿日期：2013-12-03修回日期：2014-04-30）
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