全 文 ：第 24卷 ,第 5期 光　谱　实　验　室 Vol . 2 4 , No . 5
2 0 0 7年 9月 Chinese Journal of Spectroscopy Laboratory September , 20 07
高效液相色谱法测定余甘子中单宁酸的含量①
① 基金项目:福建省自然科学基金项目 ( E0640019)和泉州师范学院校级科研课题项目 (校 2003K JⅡ 13)
② 联系人 ,电话: ( 0595) 22919569;手机: ( 0) 13599298982; E-mail: li guoqing@ qztc. edu. cn
作者简介:郭佳莉 ( 1978— ) ,女 ,福建省龙海市人 ,助理实验师 ,研究生 ,主要从事液相色谱方面的研究。
收稿日期: 2007-06-18;接受日期: 2007-06-27
郭佳莉a　李国清②　蔡英卿　刘燕兰
(泉州师范学院化学与生命科学学院　福建省泉州市　 362000)
a (泉州师范学院化学与生命科学学院　福建省泉州市泉秀路绿榕苑 C408　 362000)
摘　要　建立了高效液相色谱法测定余甘子中单宁酸含量的方法 ,采用 Hypersil ODS( 125× 4. 0mm,
5μm )色谱柱 ;检测波长 275nm;流动相为 80% 甲醇和 20%水 ;流速为 0. 5mL· min- 1。可在 3min内完成一
次样品分析。所测单宁酸在 120— 240ng /m L的范围内有良好的线性关系。相关系数达 99. 996%以上 ,加标
回收率在 99. 7%— 107. 5%之间。 本法快速 ,方便 ,精确可靠。
关键词　高效液相色谱 ,余甘子 ,单宁酸。
中图分类号: O657. 7+ 2　　　文献标识码: B　　　文章编号: 1004-8138( 2007) 05-0911-03
1　前言
余甘子 ( Phyllanthus Embl ica L . )在我国广泛分布于福建、台湾、广东、广西、贵州、云南等省份 ,
在福建泉州市有丰富的野生资源。国内许多食品专家把余甘子、猕猴桃和山楂并列为我国三大高营
养水果。现代医药研究表明中药余甘子有较强的心血管活性 ,富含单宁类化合物 ,对动脉粥样硬化
有较好疗效 [1 ]。单宁酸 ( Tannic acid)广泛存在于植物的根、皮、叶及果实中。具有独特的化学特性及
特殊的生理和药理功能 ,因此在日用化学工业、医药工业、食品工业、皮革行业及其他方面获得了极
为广泛的应用。最新研究表明 ,单宁酸具有减少化学诱发皮肤癌 ,处理或防治免疫力缺乏综合症 (艾
滋病 )的功效 [2 ]。余甘子价廉易得且可再生 ,其应用方兴未艾 ,开发前景非常广阔。余甘子中单宁酸
含量的测定 ,对于余甘子的开发利用具有重要意义。
2　实验部分
2. 1　主要仪器与药品
HP-1100高效液相色谱仪 (美国安捷伦公司 ) ,包括 HP1100四元泵 ,自动进样器 , VWD检测器
和色谱工作站 ; UV-1800紫外 -可见分光光度计 (上海美普达有限公司 ) , U PWS-IV-107超纯水器
(杭州永洁净化科技有限公司 ) ,色谱纯甲醇 (美国天地 TEDIA)、超纯水 ,单宁酸 ( A. R.分子式
C76 H52O46 ,分子量 1701. 25)贵州遵义市第二化工厂 ,余甘子 (采集于泉州惠安县 )。
2. 2　色谱条件
色谱柱为 Hypersil ODS( 4. 0× 125mm, 5μm)色谱柱 ; VWD检测器调节检测波长为 275nm;流
动相为甲醇和水 (体积比 80∶ 20) ;流速为 0. 5mL· min- 1;柱温:室温 ;进样量 2μL。
2. 3　样品处理
筛选新鲜的余甘子 ,清洗去核 ,风干 ,称取 350. 0g果肉于搅拌机中捣碎。 将捣碎的余甘子果肉
用水浸提 ,得到 350. 0mL提取液。 用 0. 45μm滤膜过滤 ,进样 2μL。
2. 4　标准溶液的制备
于电子天平上精确称取 0. 0030g单宁酸 ( A. R. ) ,用乙醇、水、丙酮体积比为 69. 9% 、 29. 8%、
0. 3%的溶液作溶剂溶解并定容 ,制备成浓度为 30. 00μg /mL的单宁酸标准溶液 100mL。上述标准
溶液用 0. 45μm滤膜过滤备用。 进样 2μL分析 ,在该条件下 ,标样和余甘子样品色谱图见图 1— 2。
图 1　标样色谱图
1—— 单宁酸 1;2——单宁酸 2; 3—— 丙酮的溶剂峰。
图 2　余甘子样品色谱图
1—— 单宁酸 1;2——单宁酸 2。
3　结果与讨论
3. 1　色谱条件选择
用 UV-1800紫外 -可见分光光度计测得单宁酸在 275nm处有强吸收 ,虽然丙酮在 275nm附近
也有较大吸收 ,但不影响单宁酸的分析定量 ,故用 VWD检测器调节检测波长为 275nm。 实验用
Hypersil ODS色谱柱 ,改变流动相 (甲醇和水 )配比 ,流速 ,柱温 ,结果表明流动相为甲醇和水 (体积
比 80∶ 20) ;流速为 0. 5mL· min- 1 ;柱温:室温时的出峰情况为最佳。
3. 2　单宁酸标准溶液溶剂的选择
水、乙醇、丙酮都可用于单宁酸的提取 [3 ] ,为了使本方法的使用范围更广 ,分别实验了以水、乙
醇、丙酮不同配比的混和溶液作标液的溶剂 ,实验结果表明用乙醇、水、丙酮体积比为 69. 9%、
29. 8% 、 0. 3%的溶液作溶剂时出峰情况为最佳。
3. 3　线性回归方程、相关系数
分别配制单宁酸标准溶液 120、 150、 180、 210、 240ng /mL用 0. 45μm滤膜过滤 ,进样后得到两种
单宁酸的回归方程 ,单宁酸 1: y= m1x+ b1 ,m1= 3. 61220× 10- 1 ,b1= - 12. 62814, r= 0. 99996;单
宁酸 2: y= m2x+ b2 , m2= 3. 30394× 10- 1 , b2= - 4. 24693, r= 0. 99998。 线性范围为 120— 240
ng /mL。
3. 4　精密度实验
用 120ng /mL单宁酸标准溶液 ,重复进样 4次 ,测定结果见表 1。
912 光谱实验室 第 24卷
表 1　单宁酸精密度实验结果
物质
测定次数
单次测定值 ( ng· mL- 1 )
1 2 3 4
平均值
( ng· mL- 1 )
相对标准偏差
(% )
单宁酸 1 95. 20 96. 01 96. 51 97. 36 96. 28 0. 9
单宁酸 2 93. 78 93. 35 92. 49 92. 27 92. 97 0. 8
3. 5　余甘子中单宁酸提取液加标回收率的测定
取已知单宁酸含量的余甘子水提液稀释液 5mL,加入 240ng /mL的单宁酸标准溶液 5mL,再
用 70%乙醇稀释 ,定容至 25mL。将以上溶液用 0. 45μm滤膜过滤 ,按 2. 2项色谱条件进行 HPLC
分析 ,测定单宁酸的回收率 ,结果见表 2。
表 2　单宁酸加标回收率的测定
测定次数 单宁酸 1
1 2 3
单宁酸 2
1 2 3
单宁酸含量 ( ng /mL) 90. 34 178. 11
添加量 ( ng /m L) 100. 14 102. 48 102. 27 183. 43 187. 91 189. 07
加标测得量 ( ng /mL) 194. 89 200. 40 199. 87 360. 98 369. 99 369. 47
回收率 (% ) 104. 40 107. 40 107. 10 99. 70 102. 10 101. 20
平均回收率 (% ) 106. 30 101. 00
4　结论
应用高效液相色谱法测定余甘子中单宁酸的含量操作简便 , 3min可完成单次检测 ,在 120—
240ng /mL的范围内有良好的线性关系 ,相关系数达 99. 996%以上 ,加标回收率在 99. 7%—
107. 5%之间。本方法快速 ,方便 ,精确可靠 ,可用于多种物质中单宁酸含量的测定。
参考文献
[1 ]周涛 ,邱德文 ,廖波 .民族药余甘子的现代研究进展 [ J ].贵阳中医学院院报 , 2002, 24( 50): 50— 52.
[2 ]马志红 ,陆忠兵 ,石碧 .单宁酸的化学性质及应用 [ J ].天然产物研究与开发 , 2003, 15( 1): 87— 91.
[3 ]黄绍华 ,严慧和 ,孙健 .单宁的提取与纯化 [ J ].南昌大学学报 (理工版 ) , 2000, 24( 3): 278— 282.
Determination of Tannic Acid inPhyllanthus Emblica L.
by High Performance Liquid Chromatography
GUO Jia-Li　 LI Guo-Qing　 CAI Ying-Qing　 LIU Yan-Lan
(School of Chemist ry and Li fe Science,Quanzhou Normal University, Quanzhou ,Fu jian 362000, P. R.China)
Abstract　 Tannic acid in Ph yllanthus Emblica L . was determined by high performance liquid
ch romatog raphy ( HPLC) with a Hypersil ODS column( 125× 4. 0mm , 5μm) , 80% CH3OH-20% H2O
as mobile phase at the flow rate of 0. 5mL /min and the UV detector at 275nm. The linear range of
tw o tannic acids covered 120— 240ng /mL. The correlation coefficients of the calibration g raphs a re
0. 99996— 0. 99998 while the RSDs are 0. 9%— 0. 8% . The runtime was less than 3min. The method
is fast, simple, accurate and reliable.
Key words　 High Performance Liquid Chromatog raphy ( HPLC) , Phyllanthus Emblica L . , Tan-
nic Acid.
913第 5期 郭佳莉等:高效液相色谱法测定余甘子中单宁酸的含量