全 文 ：堇叶碎米荠水溶性多糖含量测定及醇溶性提取物 HPLC分析
石爱华，李卫东* ，李 艳，黄光昱，胡百顺，牟 敏(湖北恩施州农业科学院，湖北民院附属民大医院心内科
恩施 445000)
摘要:目的 建立堇叶碎米荠原料质量标准。方法 采用紫外-可见分光光度法和 HPLC 分析法，测定堇叶碎米荠水溶性多糖含量;分析醇溶
性提取物 HPLC色谱分离条件。结果 堇叶碎米荠水溶性多糖含量为 28. 09 ± 0. 53mg·g － 1;醇溶性提取物 HPLC 色谱分离条件:Agilent1200，
YMC-Pack ODS-A(250 × 4. 6mm，S-5μm. 12nm)色谱柱，流动相:乙腈(A)-0. 2%磷酸(B)，梯度洗脱。结论 水溶性多糖和醇溶性提取物 HPLC
色谱分离条件可为堇叶碎米荠原料质量标准制定提供参考。
关键词:堇叶碎米荠;水溶性多糖含量;醇溶性提取物;HPLC色谱分离条件;质量标准
中图分类号:Ｒ927. 2 文献标识码:A 文章编号:1006-3765(2014)-11-0728-0114-02
作者简介:石爱华，女(1982 －)。学历:博士。职称:助理研究员。主
要从事植物资源开发利用研究。联系电话:18171572848，E-mail:
398348170@ qq. com
通讯作者:李卫东，男(1961 －)。职称:高级农艺师。主要从事富硒
植物资源应用研究与产品开发。
基金项目:湖北省科技支撑计划项目(编号:2013BEC048)
堇叶碎米荠为十字花科碎米荠属 Cardamine violifolia
O. E. Schulz草本植物，主要分布在高山地带较湿润的环境中，
在富硒环境条件下，堇叶碎米荠具有富集硒的作用〔1〕，可将
无机硒转化为有机硒〔2〕，有利于人体吸收，其嫩茎、叶鲜嫩可
口，是一种天然补硒的野菜资源，也是原产地民间餐桌美味佳
肴。近年来，堇叶碎米荠的研究集中在生物学特性〔3〕、栽培
技术〔4〕、资源再生〔1〕、营养成分分析〔5〕等，尤其是围绕堇叶碎
米荠硒的研究倍受关注，但对其多糖等生理活性成分分析尚
未见报道。
堇叶碎米荠作为新食品原料具有潜在的产业开发价值，
水和乙醇是食品工业产业常用的提取溶剂，分析其提取物的
化学成分，为堇叶碎米荠原料标准制定提供依据。
1 材料
堇叶碎米荠于春季采自湖北省恩施州农科院大棚，经中
国科学院武汉植物园李建强老师鉴定为 Cardamine violifolia
O. E. Schulz草本植物的干品。磷酸、甲醇、乙醇、苯酚(天津
市福晨化学试剂厂，AＲ);甲醇、乙腈(色谱纯)(德国 CNW);
浓硫酸(上海试剂总厂，AＲ)。水为双重蒸馏水(实验室自
制)。Agilent 1200 系列高效液相色谱仪(美国 Agilent公司);
YMCPack ODS-A 色谱柱(250mm × 4. 6mm，S-5μm. 12nm);
UV-1800 紫外可见分光光度计(日本岛津公司);AB204-N 电
子天平(METTLEＲ TOLEDO);双列四孔数显水浴锅(郑州长
城科工贸有限公司);ＲE-2000A 旋转蒸发器(上海亚荣生化
仪器厂);SH2-D(Ш)循环水式真空泵(巩义市予华仪器有限
责任公司);DLSB-5 /25℃低温冷却液循环泵(郑州长城科工
贸有限公司);KQ-500E超声波清洗器(昆山市超声仪器有限
公司)。
2 方法与结果
2. 1 多糖含量测定 ①对照品溶液的制备:精密称取葡萄糖
对照品 10. 1mg，置 50mL量瓶中，加水适量，超声使溶解，加水
至刻度，摇匀，即得(每 1mL 中含葡萄糖 0. 202mg)。②葡萄
糖标准曲线的制备:精密量取对照品溶液 0. 1、0. 2、0. 3、0. 4、
0. 5 与 0. 6mL，分别置具塞试管中，分别加水补至 2. 0mL，各精
密加入 5%苯酚溶液 1. 0mL，摇匀，迅速精密加入硫酸 5. 0mL，
摇匀，放置 10min，置 40℃水浴中保温 15min，取出，迅速冷却
至室温，以相应的试剂为空白，在 490nm 最大吸收波长处测
定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
得回归方程为 Y =0. 0581X － 0. 1157(r2 = 0. 9994)其中，X 为
葡萄糖溶液浓度，Y为吸光值。③多糖提取液制备:精密称取
堇叶碎米荠 1. 003g，置 100mL 三角瓶中，加入 80% 乙醇
70mL，加热回流 1h，趁热滤过，滤渣挥干，加水 20mL，加热回
流提取 3 次，每次 1h，趁热过滤，合并滤液，浓缩至一定体积，
加入无水乙醇使醇浓度达到 80%，4℃静置，过夜，离心，弃去
上清液，沉淀挥干，加适量的水溶解，转移至 10mL 容量瓶中，
加水定容至 10mL。④多糖含量测定:精密吸取 0. 1mL 置具
塞试管中，照标准曲线制备项下的方法，自“加水补至
2. 0mL，”起，依法测定吸光度，结果堇叶碎米荠多糖含量为
28. 09 ± 0. 53mg·g －1。
2. 2 乙醇提取液 HPLC分析 ①乙醇提取液制备:精密称取
堇叶碎米荠粉末 2. 007g，置 100mL三角瓶中，加 40mL 95%乙
醇，室温浸泡过夜。30℃超声提取 3 次，每次 15min，过滤，合
并滤液，浓缩至干。加甲醇使溶解，并定容至 10mL，取甲醇溶
液适量，过 0. 22μm 有机滤膜，备用。②HPLC 分析条件:Agi-
lent1200，YMC-Pack ODS-A(250 × 4. 6mm，S-5μm. 12nm)色谱
柱，流动相:乙腈(A)-0. 2%磷酸(B)，梯度洗脱(见图 1)。
图 1 堇叶碎米荠乙醇提取物 HPLC分析
3 讨论
·411·
海峡药学 2014 年 第 26 卷 第 11 期
近年来，随着人们对堇叶碎米荠研究的不断深入，尤其是
其富含硒成分，作为新食品原料已被食品和保健品行业所关
注，新食品原料的质量标准是基于其内在化学成分，堇叶碎米
荠不仅富含有硒成分〔4〕，而且含有氨基酸、蛋白质、维生素等
营养性成分〔6〕，但这些营养性成分还不足以体现堇叶碎米荠
的生物活性的特殊性，堇叶碎米荠含有水溶性多糖，由于植物
水溶性多糖具有重要的生物活性，如香菇多糖具有抗肿瘤活
性，黄芪多糖具有增强免疫功能的作用〔7〕，因此深入研究堇
叶碎米荠多糖对提升其新食品原料的保健价值提供依据。
植物提取物作为保健品已被国内外消费者所亲睐，如银
杏叶提取物、三七提取物等，其质量标准是确保产品质量的关
键，近年来，随着植物化学成分指纹图谱技术的引入，不仅确
保产品质量的“安全、有效、稳定、可控”，而且是构建产品质
量技术壁垒的关键技术，HPLC 指纹图谱是最常用的技术之
一，已被国内外保健品和中药质量标准控制所采用，其核心技
术是植物提取物 HPLC 分析条件的研究〔8〕，本文初步分析堇
叶碎米荠醇溶性成分的 HPLC分析条件，基线平稳，分离效果
好，为进一步研究堇叶碎米荠 HPLC 化学成分指纹图谱的构
建提供依据。
植物化学成分主要包括强极性、中等极性和弱极性成分，
强极性成分，包括多糖和蛋白质等大分子亲水性成分，可溶解
在水中，中等极性和弱极性成分可溶解在 95%乙醇中。作为
新食品原料质量标准制定，选择内在化学成分指标应涵盖水
溶性和醇溶性成分，才能比较系统获得植物化学成分信息，为
其质量标准研究提供依据。
参考文献
〔1〕杨松，陈玲，赵财 . 堇叶碎米荠组织培养研究〔J〕. 贵州师范大学
学报(自然科学版)，2010，28(2) :10-12.
〔2〕彭诚 . 土壤施硒对白菜和堇叶碎米荠生理指标的影响〔J〕. 湖北
民族学院学报(自然科学版)，2007，25(1) :88-90.
〔3〕彭诚，丁莉 . 温度对堇叶碎米荠生理特性的影响〔J〕. 安徽农业科
学，2006，34(12):2631.
〔4〕向极钎，杨永康，殷红清，等 . 堇叶碎米荠人工补硒栽培技术研究
〔J〕. 湖北民族学院学报(自然科学版)，2012，30(4) :421-423.
〔5〕彭诚，丁莉，罗红艺 . 堇叶碎米荠不同生长期营养成分与含硒量
的关系〔J〕. 安徽农业科学，2006. 34(9):1860-1861.
〔6〕丁莉，彭诚 . 堇叶碎米荠营养成分的分析与评价〔J〕. 北民族学院
学报(自然科学版)，2005，23(3) :293-295.
〔7〕匡海学主编 . 中药化学〔M〕. 北京:中国中医药出版社，2003，41.
〔8〕Jin-ZhongWu，Yuan-Bin Zheng，Ti-Qiang Chen，Jun Yi，Lu-Ping Qin，
Khalid Ｒahman，Wen-Xiong Lin. Evaluation of the quality of lotus seed
of Nelumbo nucifera Gaertn from outer space mutation〔J〕. Food Chem-
istry，2007，105(2):540-547.
HPLC法测定附子理中丸中乌头碱的含量
钟碧华1，陆 帅2(1. 浙江省杭州市萧山区第一人民医院 杭州 311201;2. 浙江萧山医院 杭州 311201)
摘要:目的 建立附子理中丸中乌头碱的含量测定方法。方法 采用 HPLC 法进行含量测定，色谱条件:色谱柱 Orbax Extend-C18(4. 6 ×
150mm，5μm)，流动相 40mmol·L －1醋酸铵水溶液(pH 9. 0 ～ 9. 5)∶乙腈 = 55∶45，流速 1. 0mL·min －1，柱温 35℃，检测波长 235nm。结果 乌头
碱在 0. 1031 ～ 3. 092μg范围线性关系良好(r = 0. 9990)，平均加样回收率 98. 6%，(ＲSD为 1. 3%) (n = 6)。结论 本方法简便、准确、分离效果
好、线性范围宽、灵敏度高，可用于本品质控。
关键词:附子理中丸;HPLC;乌头碱;含量测定
中图分类号:Ｒ927. 2 文献标识码:A 文章编号:1006-3765(2014)-11-0767-0115-03
作者简介:钟碧华，女(1986 －)。职称:药师。从事医院药学工作。E-
mail:530277205@ qq. com
附子理中丸是由附子(制)、党参等五味中药制成，主治
疗脾虚寒、脘腹冷痛、手足不温〔1〕。方中君药附子的有效成
分为乌头碱、中乌头碱等乌头类生物碱，其中，乌头碱为双酯
类生物碱，毒性强，中毒剂量为 0. 2mg·kg －1，中毒时可出现
恶心、呕吐、头晕、呼吸困难等症，致死量 2. 5mg〔2〕。为更好地
控制该药品的内在质量，保证安全有效，本研究选用乌头碱作
为质控指标，采用 HPLC法对其成分进行测定。
1 材料
1. 1 药品和试剂 乌头碱对照品(中国药品生物制品检定
所，批号 110720-200403);附子理中丸;甲醇、乙腈(色谱纯，美
国 MEＲCK公司);甲醇、乙醇等试剂均为分析纯;水为过
0. 45μm滤膜的纯水。
1. 2 仪器 Waters1525-2998 高效液相色谱仪，AE-240 电子
分析天平。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件与提取方法考察
2. 1. 1 色谱条件:采用 Zorbax Extend-C18 (4. 6 × 150mm，
5μm)色谱柱，流动相 40mmol·L －1醋酸铵水溶液 ∶乙腈 = 55
∶45，流速 1. 0mL·min －1，柱温箱温度 35℃，进样量 20μL;分
离度 ＞ 1. 5;DAD参数:235nm;理论塔板数以乌头碱峰计不低
于 3000。
2. 1. 2 提取方法考察:比较离心法、过滤法、萃取法，提取方
法考察结果(见表 1)，萃取法为最佳提取方法。
·511·
Strait Pharmaceutical Journal Vol 26 No. 11 2014