全 文 ：解放军医学院学报 Acad J Chinese PLA Med Sch Aug 2013，34（8） http://jyjxxyxb.paperopen.com 865
木果楝内酯抑制人乳腺癌脑转移细胞增殖活性的研究
李　明 1，刘　霞 2，郭书翰 2，董　玫 2，杜正伦 1，高鹏志 1，宋铁鹰 1，史清文 2
1 石家庄市第一医院， 河北石家庄　050011； 2 河北医科大学基础医学院法医学系，河北省法医学重点实验室，
河北石家庄　050017
摘要：目的 研究 3 种木果楝内酯化合物 (Xylocarpin H，Xylogranatin C 和 Xylomexicanin A) 抑制人乳腺癌脑转移细胞增殖的
作用及分子机制。方法 3 种木果楝内酯化合物分别处理人乳腺癌脑转移 (KT) 细胞，MTT 比色法检测其对 KT 细胞增殖活
性的抑制作用 ；采用 Western blot 技术检测细胞凋亡相关蛋白的表达变化。结果 MTT 比色法显示 Xylogranatin C 对 KT 细胞
增殖有较强的抑制作用，呈浓度依赖性 ；Western blot 结果显示 Xylogranatin C 处理的 KT 细胞 p53、Bax 和 Caspase-3 蛋白
表达增强，与对照组比较有统计学意义。结论 木果楝内酯化合物 Xylogranatin C 具有较强的抑制人乳腺癌脑转移细胞增殖
的作用，机制与诱导肿瘤细胞凋亡相关。
关键词：木果楝 ；木果楝内酯 ；乳腺癌 ；脑转移 ；细胞增殖
中图分类号：R 284.1 ；R 736.8　文献标志码：A　文章编号：2095-5227(2013)08-0865-04　DOI：10.3969/j.issn.2095-5227.2013.08.024
网络出版时间：2013-06-27 10:03　　　网络出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/11.3275.R.20130627.1003.001.html
Role of xylolactones in inhibiting proliferation of brain metastatic human breast cancer cells
LI Ming1, LIU Xia2, GUO Shu-han2, DONG Mei2, DU Zheng-lun1, GAO Peng-zhi1, SONG Tie-ying1, SHI Qing-wen2
1Shijiazhuang First Hospital, Shijiazhuang 050011, Hebei Province, China; 2Department of Forensic Medicine, Hebei Medical
University, Hebei Key Laboratory of Forensic Medicine, Shijiazhuang 050017, Hebei Province, China
Corresponding author: SONG Tie-ying. Email: songtiey@163.com; SHI Qing-wen. Email: shiqing-w@163.com
Abstract: Objective To study the role of xylocarpin H, xylogranatin C and xylomexicanin A in inhibiting proliferation of brain
metastatic human breast cancer cells (KT cells) and their molecular mechanisms. Methods KT cells were treated with xylocarpins
H, C and A. Inhibitory effects of xylocarpins H, C and A on proliferation of KT cells were detected by MTT assay. Apoptosis-related
protein expression level in KT cells was measured by Western blot. Results MTT assay showed that xylogranatin C inhibited the
proliferation of KT cells in a dose-dependent manner. Western blot displayed that the expression levels of p53, Bax and caspase-3
were significantly higher in xylogranatin C-treated KT cells than in controls (P＜0.01, P＜0.05). Conclusion Xylogranatin C can
effectively inhibit the proliferation of KT cells by inducing their apoptosis.
Key words: xylocarpus granatum; xylolactone; breast cancer; brain metastasis; cell proliferation
近年来随着医疗技术水平的提高，原位乳腺
癌患者生存期明显延长，但当乳腺癌发生远处转
移时严重影响了患者的预后，尤其脑转移患者预
后最差 [1]，且据统计，脑转移发生率呈增加趋势 [2]。
由于目前医学界尚缺乏特效药物降低肿瘤转移率、
延长患者生存期，因此开发可有效抑制肿瘤转移、
不良反应小、价格低廉的天然植物药物一直是当前
医药学界研究的热点。楝科植物木果楝 (xylocarpus
granatum) 是一种生长在热带沿海地带的红树林植
物，在我国主要生长于海南地区，民间用其树皮
治疗赤痢，种仁用作滋补品 [3-4]。已有学者发现木
果楝中的植物化合物成分具有抗宫颈癌及肺癌作
用 [5]。本研究首次检测了三种木果楝内酯抑制人
乳腺癌脑转移 (KT) 细胞增殖的效应，通过检测凋
亡相关蛋白 p53、Bax 和 Caspase-3 蛋白表达变化，
探讨木果楝内酯抑制人乳腺癌脑转移细胞增殖的
分子机制。
材料和方法
1 主要材料　三种木果楝内酯化合物 Xylogranatin
C[6]、Xylocarpin H[7] 和 Xylomexicanin A[8] 由 河 北 医
科大学药学院天然药物化学教研室从木果楝种子
中纯化提供，经 1H-NMR 检查，纯度在 99％以上
( 图 1) ；KT 细胞由日本千叶大学医学部第二生物化
学教室提供，细胞培养用 RPMI 1640 培养基 ( 美国，
GIBCO) ；噻唑蓝 (MTT，美国 Sigma 公司，M-2128) ；
顺铂 (Cisplatin，美国 Sigma，034k3693) ；鼠抗 Bax
多克隆抗体 (sc-7480)、鼠抗 p53 多克隆抗体 (sc-
1615-R) 以及二抗 (sc-2056，sc-2054) 均为 SANTA
收稿日期：2013-05-23　　　　　
基金项目：河北省卫生厅指导性课题 (20110550)
作者简介：李明，男，硕士，主治医师。研究方向 ：乳腺肿瘤研究
与防治。Email: lm97111295@163.com
通信作者：宋铁鹰，男，硕士，主任医师。Email: songtiey@163.com ；
史清文，男，博士，教授。Email: shiqing-w@163.com
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CRUZ BIOTECHNOLOGY 产 品 ；兔 抗 Caspases-3
多克隆抗体 (2305-PC-020 ；Trevigen，MD，USA)，
caspase 抑制剂 Z-VAD-FMK(Promega，USA)。
图 1　木果楝内酯化合物Xylogranatin C (1)、 Xylocarpin H (2)和
Xylomexicanin A (3)的结构
Fig. 1　Chemical structures of xylogranatins C (1), H (2) and A (3)
2 MTT 法检测木果楝内酯化合物抑制 KT 细胞增
殖活性　取对数生长期 KT 细胞，0.125% 胰酶消
化，接种于 96 孔培养板，每孔含 1×104 个细胞。
实验分组为 ：溶剂对照组 ( 含终浓度 0.1% DMSO)、
5- 氟尿嘧啶 (5-FU)、顺铂及木果楝内酯化合物
Xylogranatin C、Xylocarpin H 和 Xylomexicanin A。后
5 组中药物终浓度分别设为 1 μmol/L、10 μmol/L
和 100 μmol/L ；上述实验各组药物均用终浓度
0.1% DMSO 溶解。每组均设 3 个复孔，置于饱和
湿度、37 ℃和 5% CO2 培养箱中培养 48 h，于培
养结束前 4 h，各培养孔加入 5 mg/ml 四甲基偶氮
唑蓝 (MTT)10 μl，酶联免疫检测仪测定各孔吸光
度值 (OD 值 )，计算细胞生存率，细胞生存率 (%)=
实验组 OD 值 / 对照组 OD 值 ×100%。实验数据
用 Origin 7.0 软件进行处理，受试药物对细胞增殖
活性的浓度 - 效应曲线用 Hill 数学模型拟合，计
算药物的 IC50 值。
3 Western blot 检测凋亡相关蛋白的表达变化　
将 KT 细胞接种于培养皿中，待细胞生长融合至
60%~70%，分别加入终浓度为 10 μmol/L 的 5- 氟
尿嘧啶、顺铂和 Xylogranatin C 的含 0.1% DMSO 的
1640 培养基，溶剂对照组加入终浓度为 0.1% DMSO
的 1640 培 养 基， 培 养 细 胞 24 h， 用 PBS 洗 涤 细
胞后，胰酶消化细胞，离心收集细胞，加入蛋白
裂解液，冰浴下超声波处理 5 min，15 000 r/min 离
心 15 min，取上清液，BCA 法测定蛋白浓度，100 ℃
加热 3 min 使蛋白质变性，取 50 μg 蛋白在 SDS-
PAGE 电泳下分离，分离胶为 12%，浓缩胶为 5%。
根据预染的蛋白 Marker 指示，小心割取目标蛋白
所在的区带，电转移至硝酸纤维膜，用 5% 脱脂奶
粉于室温下摇动封闭 1 h。Caspases-3 兔多克隆抗
体 (1∶800)、Bax 鼠多克隆抗体 (1∶1 000)、p53 鼠
多克隆抗体 (1∶1 000) 稀释液封闭 4 ° 过夜，1×TBS
洗膜 15 min，3 次，二抗稀释液 ( 抗鼠 1 ∶ 20 000，抗
兔 1 ∶ 20 000) 孵育 20 min，再次洗膜后加入 ECL
试剂，反应 5 min，用 X 线片曝光 1~10 min 后，显影。
4 Caspase 抑制剂在木果楝内酯化合物抑制人 KT
细胞增殖中作用　MTT 方法同前，96 孔培养板，
每孔含 1×104 个细胞，实验分组为 ：溶剂对照组、
终浓度分别为 1 μmol/L、10 μmol/L 和 100 μmol/L
的 Xylogranatin C 组，20 μmol/L 的 Caspase 抑制剂
Z-VAD-FMK 与 1 μmol/L、10 μmol/L 和 100 μmol/L
Xylogranatin C 共同孵育组，细胞生存率计算方法
同前，比较给予 Z-VAD-FMK 前后 KT 细胞的生存
率变化。
5 统计学处理　数据用 -x±s 表示 ；两组间数据用
t 检验，多组间数据用单因素方差分析。应用 SAS
6.12 统计软件进行统计学分析。
结　果
1 三种木果楝内酯化合物对 KT 细胞增殖抑制作用
　MTT 结果显示 ：与溶剂对照组 ( 生长率为 100%) 相
比，顺铂对 KT 细胞的增殖显示了较强的抑制活性，
IC50 为 6.61 μmol/L ；Xylogranatin C 对 KT 细 胞 的
增殖亦显示了较强的抑制作用，IC50 为 5.09 μmol/L，
并呈现剂量依赖性 ；且 10 μmol/L Xylogranatin C
与顺铂相比具有相同的抑制作用，两者相比无统
计 学 差 异 (P ＞ 0.05) ；5-FU 以 及 Xylocarpin H 和
Xylomexicanin A 对 KT 增殖显示较弱或不显示抑制
活性。见图 2。
图 2　三种木果楝内酯化合物对KT细胞增殖的抑制作用
Fig. 2　Inhibitory effects of xylogranatins C, H and A on proliferation
of KT cells
2 Xylogranatin C 对 KT 细胞 p53、Bax 和 Caspaes-3
的上调作用　Weston 结果显示 ：Xylogranatin C 作
用 KT 细胞后，可上调细胞内 p53、Bax 和 Caspaes
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-3 蛋白的表达，与溶剂对照组相比，有统计学差
异 (P ＜ 0.05) ；顺铂作用 KT 细胞后，显著上调细
胞内的 Bax 和 Caspaes-3 蛋白表达，与溶剂对照组
相比较，有统计学差异 (P ＜ 0.01) ；Xylogranatin C
组与顺铂组比较，Bax 和 Caspaes-3 的蛋白表达低
于顺铂组，且有统计学差异 (P ＜ 0.01)。见图 3。
图 3　Xylogranatin C(10 μmol/L)对KT细胞增殖作用的分子机制
Fig. 3　Molecular mechanism of xylogranatin C (10 μmol/L)
underlying proliferation of KT cells
3 Caspase 抑制剂减弱了 Xylogranatin C 的细胞毒
性作用　使用 1μmol/L、10μmol/L 和 100 μmol/L
的 Xylogranatin C 处理 KT 细胞，KT 细胞生存率分
别为 71.97%、39.91% 和 11.15% ；使用 20 μmol/L
的 Caspase 抑制剂 Z-VAD-FMK 与 1μmol/L、10μmol/L
和 100 μmol/L Xylogra-natin C 共 同 孵 育 KT 细 胞
后， 细 胞 生 存 率 分 别 上 升 为 82.78%、46.27% 和
30.99%。见图 4。
图 4　Z-VAD-FMK减弱Xylogranatin C对KT细胞增殖的作用
Fig. 4　Role of Z-VAD-FMK in reversing the inhibitory effect of
xylogranatin C on KT cells
讨　论
乳腺癌患者预后与其是否发生转移密切相关，
一旦发生远端转移，如脑转移、肝脏转移、骨转
移等预后较差，生存期明显下降，增加了临床治
疗的困难 [9]。此外，以腋窝淋巴结转移为首发症状
的隐性乳腺癌的发生呈增加趋势 [10]，目前针对乳
腺癌，除手术切除原发灶外，化疗、内分泌治疗及
分子靶向治疗相结合在乳腺癌远位转移中的应用受
到越来越多的关注 [11-12]，但寻找高效低毒、价格
低廉的抑制肿瘤转移的天然植物药物仍是目前医药
学界一直研究的热点，具有一定的临床应用前景。
本实验室前期实验结果证实从楝科植物木果楝种
子中提纯的木果楝内酯 Xylogranatin C 化合物具有较
强抑制人肺肿瘤细胞增殖活性的能力 [13]，其是否
具有抑制乳腺癌肿瘤细胞的增殖作用尚未研究。
本实验首次选用从楝科植物木果楝种子中纯
化的三种木果楝内酯 Xylocarpin H、Xylogranatin C
和 Xylomexicanin A 为实验对象，观察了三种木果
楝内酯对人乳腺癌脑转移细胞增殖的抑制活性，
实验结果显示 Xylogranatin C 对 KT 细胞增殖显示
较强的抑制活性，且与顺铂作用相当，而 5-FU 对
KT 细胞增殖的抑制作用不明显。
在探究药物抗肿瘤细胞的机制方面，能否引起
肿瘤细胞凋亡已成为评价抗癌药物的一项重要指
标 [14]。目前已知多条途径诱导细胞凋亡，Caspase
属于半胱氨酸蛋白酶家族，在细胞凋亡调节网络
中起关键作用，Caspase 3 被认为是 Caspase 级联反
应中最关键的效应蛋白酶 ；Bax 是另一种促进凋亡
因子，Bcl-2/Bax 镶嵌在线粒体膜上，调控凋亡诱
导蛋白的释放和线粒体功能 ；此外，p53 对诱导和
执行细胞死亡起重要作用 [15]，p53 非转录依赖性凋
亡调控功能依赖于 p53 蛋白与 Bcl-2 蛋白超家族成
员 (Bak，Bax，Bcl-2) 间的相互作用。因此本实验观
察了与细胞凋亡相关蛋白因子 p53、Bax、Caspase-3
的蛋白表达变化。实验研究发现，Xylogranatin C
可明显诱导 KT 细胞内的 p53、Bax 和 Caspase-3 蛋
白表达上调，表明 Xylogranatin C 通过诱导 KT 细胞
凋亡抑制了肿瘤细胞增殖。使用 Caspase 抑制剂
Z-VAD-FMK 可以减弱 Xylogranatin C 的细胞毒性作
用，提示 Xylogranatin C 可能通过激活 Caspase 通
路诱导 KT 细胞凋亡发挥抗肿瘤细胞增殖的作用。
本实验初步研究了木果楝内酯化合物抑制人
乳腺癌脑转移细胞增殖的分子机制，限于体外实
验的局限性，Xylogranatin C 是否能够应用于整体
实验抑制肿瘤增殖，以及其抗肿瘤细胞增殖的分
子机制还需要进一步研究和完善。
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弥漫性脂肪纤维瘤病 1例诊治
山院飞 1,2，张瑞明 3，赵胤铭 1
1 空军航空医学研究所附属医院 普外科，北京　100089 ；2 内蒙古医科大学，呼和浩特　010059 ；
3 内蒙古医科大学附属医院 普外科，呼和浩特　010059
关键词：脂肪纤维瘤病 ；诊断 ；治疗
中图分类号：R 739.92　文献标志码：B　文章编号：2095-5227(2013)08-0868-02　DOI：10.3969/j.issn.2095-5227.2013.08.025
网络出版时间：2013-05-20 08:28　　　网络出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/11.3275.R.20130520.0828.001.html
脂肪纤维瘤病是一种罕见的软组织交界性肿瘤，术后
易复发，但不转移，因少见易造成误诊。本病国内外报道
较少，其临床表现为无痛性、生长缓慢肿块 [1-2]。本文报告
1 例颈背部弥漫性脂肪纤维瘤病患者的诊治。
1 病例资料　患者女，47 岁，2005 年因颈、背部肿物 ( 约
10 cm×10 cm) 就诊于当地医院，考虑为脂肪瘤，遂行手术
切除。2008 年患者颈背部肿物复发，就诊于我院。超声及
CT 检查提示： 颈、背部脂肪样组织堆积。查体： 颈部、肩
背部可触及 20 cm×15 cm，10 cm×8 cm 大小肿物，边缘较
光滑，质软、不易推动，与周围组织界限不清，有轻度压痛。
2008年6月24日在全麻下行颈部、肩背部肿物切除术。术
中见肿物呈不规则脂肪颗粒团结构，质软偏韧，色黄其间夹
杂白色纤维状组织，界不清，无明显包膜。大小约20 cm×
15 cm×12 cm，10 cm×8 cm×6 cm。术后病理诊断为纤维
脂肪瘤。2012 年 5 月，患者颈背部肿物复发再次来我院就
诊，查体： 颈前双侧明显肿胀，颈部、肩背部可触及弥漫性
增生物，大小约 20 cm×60 cm，边缘较光滑，质软、不易
推动，与周围组织界限不清，有轻度压痛。5 月 15 日在局麻
下行活检术。病理镜下见： 肿物由纤维组织和大量成熟脂
肪组织构成，纤维束将脂肪分隔成小叶状，脂肪细胞和梭
形成纤维细胞均无显著异形性，无核分裂 ( 见图 1)。免疫组
化结果： 肿瘤组织中纤维组织和脂肪组织波形蛋白 Vimentin
阳性，脂肪细胞 S100 蛋白阳性，平滑肌肌动蛋白 SMA 阴性。
病理诊断为脂肪纤维瘤病(弥漫性)。患者肿物呈弥漫性，暂
图 1　患者脂肪纤维瘤病组织病理切片 (HE 10×10)
无完整扩大性切除条件，且术后复发率高，经与患者商议，
暂予以观察。
2 讨论　脂肪纤维瘤病 (lipofibromatosis) 是一种发生于儿童
的组织学表现独特的纤维脂肪性肿瘤，过去称婴儿非韧带
样型纤维瘤病，好发于四肢末端 [3]，偶可见于背部 [4]、躯干、
眼眶 [5] 等，男童多见，男女比例＞2∶1[6]。该病复发率高，
但不发生恶变和转移，无家族史。典型病例表现为皮下组织
收稿日期：2013-03-11　　　　　
作者简介：山院飞，主治医师 , 内蒙古医科大学 2011 级硕士研究生。
专业方向 ：普通外科学研究。Email: 45189956@qq.com
通信作者：张瑞明，主任医师。Email: zrm005@sohu.com
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