全 文 ：第４３卷　第１期
２０１５年１月
西北农林科技大学学报（自然科学版）
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ　Ａ＆Ｆ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔ．Ｓｃｉ．Ｅｄ．）
Ｖｏｌ．４３ Ｎｏ．１
Ｊａｎ．２０１５
网络出版时间：２０１４－１２－１２　０９：３０ ＤＯＩ：１０．１３２０７／ｊ．ｃｎｋｉ．ｊｎｗａｆｕ．２０１５．０１．０２１
网络出版地址：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／６１．１３９０．Ｓ．２０１４１２１２．０９３０．０２１．ｈｔｍｌ
堇叶碎米荠硒蛋白的体内抗氧化作用研究
　［收稿日期］　２０１３－０８－２０
　［基金项目］　国家自然科学基金项目（３１３６０４９８）；湖北省科技计划项目（２０１２ＦＦＣ０２５０１）；国家民委科研项目（１２ＨＢＺ００８）；湖北省教
育厅自然科学研究重点项目（Ｄ２０１３１９０２）；湖北民族学院博士启动基金项目（ＭＹ２０１１Ｂ００６）
　［作者简介］　雷红灵（１９６７－），女，湖北鹤峰人，教授，博士，主要从事硒生理生化研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｅｉｈｌ１２３３６６＠１６３．ｃｏｍ
雷红灵，方响亮，周大寨
（湖北民族学院 生物科学与技术学院，生物资源保护与利用湖北省重点实验室，湖北 恩施４４５０００）
［摘　要］　 【目的】探讨富硒植物堇叶碎米荠硒蛋白的生理活性，为富硒植物的深度开发利用提供依据。【方
法】以从湖北恩施富硒植物堇叶碎米荠叶片中提取的硒蛋白作为硒来源，设置硒质量浓度分别为２．２５，４．４５，８．９０，
１７．７９μｇ／ｍＬ的硒蛋白液灌胃饲喂小鼠４周，研究不同的硒蛋白溶液对小鼠体质量、血硒水平、血液和肝组织总抗氧
化能力（Ｔ－ＡＯＣ）、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性、谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－Ｐｘ）活力及丙二醛（ＭＤＡ）含量的影响。
【结果】硒蛋白液的硒质量浓度为８．９０μｇ／ｍＬ时，小鼠体质量增加最多；在本试验条件下，小鼠血硒水平随硒质量浓
度的增加而升高；硒质量浓度为４．４５～１７．７９μｇ／ｍＬ的硒蛋白液可明显提高小鼠血液及肝组织的Ｔ－ＡＯＣ、ＳＯＤ活性
和ＧＳＨ－Ｐｘ活力，抑制 ＭＤＡ的生成，但硒质量浓度为８．９０～１７．７９μｇ／ｍＬ时，促进效应减缓。【结论】堇叶碎米荠硒
蛋白可以促进小鼠的生长及抗氧化能力，最适硒质量浓度为８．９０μｇ／ｍＬ。
［关键词］　堇叶碎米荠；硒蛋白；血硒；抗氧化作用
［中图分类号］　Ｑ４９３．９９ ［文献标志码］　Ａ ［文章编号］　１６７１－９３８７（２０１５）０１－０２０１－０５
Ｉｎ　ｖｉｖｏ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｅｌｅｎｏｐｒｏｔｅｉｎ　ｉｎ　Ｃａｒｄａｍｉｎｅ　ｖｉｏｌｉｆｏｌｉａ
ＬＥＩ　Ｈｏｎｇ－ｌｉｎｇ，ＦＡＮＧ　Ｘｉａｎｇ－ｌｉａｎｇ，ＺＨＯＵ　Ｄａ－ｚｈａｉ
（Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ
Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｈｕｂｅｉ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，Ｈｕｂｅｉ　Ｍｉｎｚｕ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｅｎｓｈｉ，Ｈｕｂｅｉ　４４５０００，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：【Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ】Ｔｈｅ　ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｓｅｌｅｎｏｐｒｏｔｅｉｎ　ｉｎ　ｈｙｐｅｒａｃｃｕｍｕｌａｔｏｒ　ｗｅｒｅ　ｉｎｖｅｓｔｉ－
ｇａｔｅｄ　ｔｏ　ｉｍｐｒｏｖｅ　ｔｈｅ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ａｎｄ　ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｓｅ－ｒｉｃｈ　ｐｌａｎｔｓ．【Ｍｅｔｈｏｄ】Ｓｅｌｅｎｏｐｒｏｔｅｉｎ，ｐｕｒｉｆｉｅｄ　ｆｒｏｍ
ｌｅａｖｅｓ　ｏｆ　Ｃａｒｄａｍｉｎｅ　ｖｉｏｌｉｆｏｌｉａｉｎ　Ｅｎｓｈｉ，Ｈｕｂｅｉ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，ｗａｓ　ｆｅｅｄ　ｔｏ　Ｋｕｎｍｉｎｇ　ｍｉｃｅ　ｂｙ　ｇａｓｔｒｏ　ｇａｖａｇｅ　ｆｏｒ　４
ｗｅｅｋｓ．Ｔｈｅ　ｍａｓｓ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｓｅｌｅｎｉｕｍ　ｉｎ　ｓｅｌｅｎｏｐｒｏｔｅｉｎ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ　ｗｅｒｅ　２．２５，４．４５，８．９０ａｎｄ　１７．７９
μｇ／ｍＬ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ　ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ　ｗｅｉｇｈｔ，ｂｌｏｏｄ　ｓｅｌｅｎｉｕｍ　ｌｅｖｅｌｓ，ｔｈｅ　ｔｏｔａｌ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ
ｃａｐａｃｉｔｙ，ＳＯＤ，ＧＳＨ－Ｐｘ，ａｎｄ　ＭＤＡ　ｉｎ　ｂｌｏｏｄ　ａｎｄ　ｌｉｖｅｒ　ｔｉｓｓｕｅ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ．【Ｒｅｓｕｌｔ】Ｔｈｅ　ｗｅｉｇｈｔ　ｏｆ　Ｋｕｎ－
ｍｉｎｇ　ｍｉｃｅ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｔｈｅ　ｍｏｓｔ　ｗｈｅｎ　ｓｅｌｅｎｉｕｍ　ｍａｓｓ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｗａｓ　８．９０μｇ／ｍＬ．Ｂｌｏｏｄ　ｓｅｌｅｎｉｕｍ　ｌｅｖｅｌｓ
ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｉｎｃｒｅａｓｅ　ｏｆ　ｓｅｌｅｎｉｕｍ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ．Ｗｈｅｎ　ｔｈｅ　ｍａｓｓ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｓｅｌｅｎｉｕｍ　ｗｅｒｅ
４．４５－１７．７９μｇ／ｍＬ，ｓｅｌｅｎｏｐｒｏｔｅｉｎ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｅｎｈａｎｃｅｄ　ｔｈｅ　ｔｏｔａｌ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ｃａｐａｃｉｔｙ，ＳＯＤ，ＧＨＳ－Ｐｘ　ａｃ－
ｔｉｖｉｔｙ　ａｎｄ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｎ　ＭＤＡ　ｆｏｒｍａｔｉｏｎ，ｂｕｔ　ｔｈｅ　ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ　ｒａｔｅｓ　ｄｅｃｒｅａｓｅｄ　ｗｈｅｎ　ｓｅｌｅｎｉｕｍ　ｍａｓｓ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａ－
ｔｉｏｎｓ　ｗｅｒｅ　８．９０－１７．７９μｇ／ｍＬ．【Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ】Ｓｅｌｅｎｏｐｒｏｔｅｉｎ　ｉｎ　ｌｅａｖｅｓ　ｏｆ　Ｃａｒｄａｍｉｎｅ　ｖｉｏｌｉｆｏｌｉａ　ｐｒｏｍｏｔｅｄ
ｔｈｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ａｎｄ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　Ｋｕｎｍｉｎｇ　ｍｉｃｅ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｕｍ　ｓｅｌｅｎｉｕｍ　ｍａｓｓ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｗａｓ
８．９０μｇ／ｍＬ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｃａｒｄａｍｉｎｅ　ｖｉｏｌｉｆｏｌｉａ；ｓｅｌｅｎｏｐｒｏｔｅｉｎ；ｂｌｏｏｄ　ｓｅｌｅｎｉｕｍ　ｌｅｖｅｌ；ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ
　　硒是人和动物必需的微量元素，它具有抗氧化、
抗肿瘤、解毒重金属以及增强机体对病毒感染的免
疫力等功能［１－２］，但是硒在有益和致毒之间的剂量差
异很小。甘璐等［３］研究表明，补硒量为２０μｇ／ｋｇ的
大鼠，其机体内的丙二醛（Ｍａｌｏｎｄｉａｌｄｅｈｙｄｅ，ＭＤＡ）
含量降低，同时超氧化物歧化酶（Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ　ｄｉｓ－
ｍｕｔａｓｅ，ＳＯＤ）、过氧化氢酶（Ｃａｔａｌａｓｅ，ＣＡＴ）、谷胱
甘肽过氧化物酶（Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ　ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ，ＧＳＨ－
Ｐｘ）活性升高，而补硒量为４０，８０μｇ／ｋｇ的大鼠，其
体内 ＭＤＡ含量增加，ＣＡＴ、ＧＳＨ－Ｐｘ和硫氧还蛋白
还原酶（Ｔｈｉｏｒｅｄｏｘｉｎ　ｒｅｄｕｃｔａｓｅ，ＴＲ）活性降低，同时
伴随着ＴＲ　ｍＲＮＡ表达水平降低，表明体内的氧化
系统被激活，抗氧化系统受抑制，发生了一定程度的
脂质过氧化反应，说明硒只能在一定的剂量范围内
有效抑制脂质过氧化。相比无机硒，天然有机硒的
毒性更低、更安全，营养更全面，生物利用度高［４－５］，
因此抗氧化能力更优。罗培林等［６］研究显示，酵母
有机硒比亚硒酸钠具有更高的生物学效价；李改平
等［７］比较了有机硒和无机硒对小鼠全血 ＧＳＨ－Ｐｘ
活性、肝ＳＯＤ活性的影响，结果显示，有机硒能显著
增强小鼠ＧＳＨ－Ｐｘ活性，提高ＳＯＤ活性，且硒蛋白
的生物效应比硒多糖的更为明显；张劲松等［８］研究
表明，烟叶硒蛋白制剂能显著提高大鼠血清 ＧＳＨ－
Ｐｘ活性，降低大鼠血清中 ＭＤＡ含量；烟叶的含硒
Ｒｕｂｉｓｃｏ蛋白对清除自由基、防护红细胞溶血、保护
化学性肝损伤的效果优于不含硒蛋白质［９］。
植物通过根部和叶片吸收的无机硒，可在体内
转化成硒氨基酸、硒蛋白、硒多糖等有机形式，其中
硒蛋白是最主要的存在形式。植物硒蛋白是一种高
效、优良的补硒源，尤其是纯化的硒蛋白，可以作为
保健品的添加剂和原料药加以利用。湖北恩施的鱼
塘坝，是世界上惟一的独立硒矿床所在地，生长着一
种富硒能力极强的植物———堇叶碎米荠，其苗期叶
片硒含量超过１　０００ｍｇ／ｋｇ，这是在我国首次发现
的超富硒植物。为了了解该植物硒蛋白的生物活
性，本试验以昆明小鼠为对象，研究堇叶碎米荠叶片
硒蛋白在小鼠体内的抗氧化活性，以期为该植物的
深层次开发和利用提供依据。
１　材料与方法
１．１　材　料
供试硒蛋白从成熟野生堇叶碎米荠叶片（含硒
量６２７．５９ｍｇ／ｋｇ，可溶性蛋白含量８６．３５ｇ／ｋｇ）中
分离纯化而得，硒蛋白的含硒量为１７７．９３μｇ／ｇ。
试验动物为ＳＰＦ级昆明种小白鼠（２５ｇ／只左
右，购于湖北省预防医学科学院），饲料由湖北省实
验动物研究中心提供。
１．２　方　法
１．２．１　试验设计　以我国推荐的人体硒最高摄入
量［１０］为依据，按照人与试验小鼠的换算系数（１∶
９．０１）及小鼠体质量，计算确定试验小鼠饲喂硒量最
高为１．８０μｇ／（ｄ·只）。采用随机分组法将小白鼠
分为６组，每组１２只，雌雄各半。适应性喂养１周
后，其中１组不做任何操作（空白对照，ｃｋ１），１组灌
胃纯水（阳性对照，ｃｋ２），另４组分别饲喂硒质量浓
度为２．２５，４．４５，８．９０，１７．７９μｇ／ｍＬ的硒蛋白溶
液，每天１次，每次０．２ｍＬ／只。常规喂养饲料，试
验期间每周称体质量１次，连续４周。
１．２．２　小鼠血清、溶血液和肝组织匀浆的制备　小
鼠喂养第４周末，空腹断头处死，采血，取脏器。血
液分成２份：一份不加防凝剂，静置１０ｍｉｎ，２　０００
ｒ／ｍｉｎ低温离心１０ｍｉｎ，取血清，４℃保存；另一份
加肝素抗凝，４℃冷藏备用，测试时用蒸馏水稀释
５０倍，制备溶血液。肝脏用预冷生理盐水漂洗，吸
干水分，制备成质量分数１０％的肝组织匀浆，４℃、
２　０００ｒ／ｍｉｎ离心１５ｍｉｎ，取上清液备用。
１．２．３　小鼠肝组织匀浆和血液抗氧化指标的测定
　分别取质量分数 １０％ 的肝组织匀浆和血清
０．１０～０．２０ｍＬ，参照南京建成生物制品公司试剂
盒说明书测定以下指标。
（１）ＭＤＡ 含量。以四氧甲基丙烷为标准，在
５３２ｎｍ波长处比色，计算肝组织匀浆的 ＭＤＡ含量
（ｎｍｏｌ／ｍｇ）和血清的 ＭＤＡ浓度（ｎｍｏｌ／ｍＬ）。
（２）总抗氧化能力（Ｔ－ＡＯＣ）。３７℃时，以每分
钟每毫升血清或每毫克组织蛋白使反应体系的吸光
度值增加０．０１为１个总抗氧化能力单位（Ｕ）。
（３）ＧＳＨ－Ｐｘ活力。肝组织 ＧＳＨ－Ｐｘ活力以催
化ＧＳＨ的反应速度表示，组织中每毫克蛋白质、每
分钟除非酶促反应外，反应体系中ＧＳＨ浓度降低１
μｍｏｌ／Ｌ为１个酶活力单位；全血 ＧＳＨ－Ｐｘ活力单
位为，每４μＬ全血在３７℃反应５ｍｉｎ后，除非酶促
反应外，反应体系中ＧＳＨ 浓度降低１μｍｏｌ／Ｌ为１
个酶活力单位。
（４）ＳＯＤ活性。以每毫升反应液中（或每毫克
组织蛋白在１ｍＬ反应液中）ＳＯＤ抑制率达５０％时
所对应的ＳＯＤ量为１个酶活力单位（Ｕ），即 Ｕ／ｍｇ
或Ｕ／ｍＬ。
１．２．４　硒和蛋白质含量的测定　硒含量的测定采
２０２ 西北农林科技大学学报（自然科学版） 第４３卷
用氢化物发生－原子荧光分光光度法（采用北京吉天
仪器有限公司 ＡＦＳ－９３０氢化物发生双道原子荧光
光度计，硒标准液（ＧＳＢ０７－１２５３－２０００）为国家环保总
局标准样品研究所提供），蛋白质含量采用考马斯亮
蓝Ｇ２５０（进口分装）法测定。
１．３　数据分析
采用ＤＰＳ６．２统计软件进行试验数据整理和分
析，Ｄｕｎｃａｎ新复极差法进行多重比较。试验数据均
用“平均值±标准差（珚ｘ±ｓ）”表示，ｎ＝４。
２　结果与分析
２．１　硒蛋白对小鼠体质量的影响
按不同处理饲喂小鼠４周后，各处理组小鼠生
长发育正常，外观、行为活动、精神状态、食欲、大小
便及皮毛、肤色等均未见异常。试验期间小鼠体质
量变化见表１。
表１　硒蛋白对小鼠体质量的影响
Ｔａｂｌｅ　１　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｓｅｌｅｎｏｐｒｏｔｅｉｎ　ｏｎ　ｗｅｉｇｈｔ　ｏｆ　ｍｉｃｅ　 ｇ／只
硒质量浓度／
（μｇ·ｍＬ－１）
Ｓｅｌｅｎｉｕｍ　ｍａｓｓ
ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
体质量 Ｗｅｉｇｈｔ
０　 １周１ｗｅｅｋ　 ２周２ｗｅｅｋ　 ３周３ｗｅｅｋ　 ４周４ｗｅｅｋ
ｃｋ１　 ２５．４±１．５　 ２６．３±１．８　 ２７．５±１．２　 ２８．３±１．２　 ２９．６±０．７
ｃｋ２　 ２５．５±１．３　 ２４．８±１．２　 ２５．３±１．２　 ２７．９±０．６　 ２９．２±０．４
２．２５　 ２５．８±２．４　 ２４．９±２．９　 ２６．３±０．６　 ２９．２±０．６　 ３１．４±０．５
４．４５　 ２６．３±０．６　 ２５．４±１．６　 ２６．５±１．７　 ２９．８±０．８　 ３２．４±１．３
８．９０　 ２４．７±２．９　 ２４．２±１．７　 ２６．７±３．１　 ２９．６±２．５　 ３２．２±２．７
１７．７９　 ２６．１±１．６　 ２３．７±０．５　 ２６．３±０．７　 ２９．１±０．４　 ３１．２±０．８
　　由表１可见，灌胃１周后，ｃｋ２及硒处理组小鼠
的体质量均出现了不同程度下降，这可能是因为灌
胃操作对小鼠产生了影响。饲喂２周后，各组小鼠
体质量开始增加，４周后灌胃硒蛋白液各组的小鼠
体质量增加率都高于对照，增加最多的是８．９０
μｇ／ｍＬ试验组，增加率为３０．３６％；１７．７９μｇ／ｍＬ组
的增加率低于另外２个低硒（２．２５和４．４５μｇ／ｍＬ）
处理组，说明硒质量浓度为１７．７９μｇ／ｍＬ的硒蛋白
液对小鼠生长的促进作用已明显减弱。
２．２　硒蛋白对小鼠血液中硒水平的影响
硒蛋白对小鼠血液中硒水平的影响见图１。
图１　硒蛋白对小鼠血液中硒水平的影响
不同小写字母表示组间差异显著（Ｐ＜０．０５）。下图同
Ｆｉｇ．１　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｓｅｌｅｎｏｐｒｏｔｅｉｎ　ｏｎ
Ｓｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｂｌｏｏｄ　ｐｌａｓｍａ　ｉｎ　ｍｉｃｅ
Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｌｏｗｅｒｃａｓｅ　ｌｅｔｔｅｒ　ｍｅａｎ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ
（Ｐ＜０．０５）．Ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｆｏｒ　ｆｏｌｏｗｉｎｇ　ｆｉｇｕｒｅｓ
　　由图１可见，２个对照组小鼠血液中硒质量浓
度为０．１２～０．１４μｇ／ｍＬ，二者没有显著差异；饲喂
不同硒质量浓度的硒蛋白液可以明显提高小鼠血液
中的硒水平，且血液中硒水平随着饲喂硒质量浓度
的增加而升高，均显著高于２个对照组，各硒处理组
间也都有显著性差异，小鼠血液中硒质量浓度最高
达０．３５μｇ／ｍＬ。
２．３　硒蛋白对小鼠抗氧化指标的影响
２．３．１　对 ＭＤＡ含量的影响　不同硒质量浓度的
硒蛋白液对小鼠肝组织匀浆和血清中 ＭＤＡ含量的
影响见图２。由图２可见，小鼠肝组织匀浆和血清
中 ＭＤＡ的含量在硒蛋白处理组与２个对照组间有
显著性差异，硒蛋白处理可以降低 ＭＤＡ含量，并在
硒质量浓度为８．９０μｇ／ｍＬ时抑制作用达到最大；
而在硒质量浓度１７．７９μｇ／ｍＬ时抑制作用减小，
ＭＤＡ含量又开始增加。
２．３．２　对Ｔ－ＡＯＣ的影响　不同硒质量浓度的硒
蛋白液对小鼠肝组织匀浆和血清Ｔ－ＡＯＣ的影响见
图３。由图３可以看出，硒蛋白处理组小鼠的肝组
织匀浆和血清的 Ｔ－ＡＯＣ持续增加，与２个对照组
有显著性差异，但硒质量浓度８．９０与１７．７９μｇ／ｍＬ
２个处理组间没有显著差异，且随着硒质量浓度的
增大，小鼠肝组织匀浆和血清 Ｔ－ＡＯＣ的增加趋势
都在减缓。血清和肝组织匀浆Ｔ－ＡＯＣ（ｙ）与血液中
硒质量浓度（ｘ）的回归方程分别为：ｙ＝８３．６０ｘ－
８．０４，Ｒ２＝０．９８，Ｐ＝０．００６　７＜０．０１；ｙ＝１０．３７ｘ＋
１．６８，Ｒ２＝０．９８，Ｐ＝０．０００　１＜０．０１，可见，Ｔ－ＡＯＣ
３０２第１期 雷红灵，等：堇叶碎米荠硒蛋白的体内抗氧化作用研究
与血液中的硒水平具有极显著相关性。
图２　硒蛋白对肝组织匀浆和血清中 ＭＤＡ含量的影响
Ｆｉｇ．２　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｓｅｌｅｎｏｐｒｏｔｅｉｎ　ｏｎ　ＭＤＡ　ｏｆ　ｌｉｖｅｒ
ｈｏｍｏｇｅｎａｔｅ　ａｎｄ　ｓｅｒｕｍ　ｉｎ　ｍｉｃｅ
图３　硒蛋白对肝组织匀浆和血清中Ｔ－ＡＯＣ的影响
Ｆｉｇ．３　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｓｅｌｅｎｏｐｒｏｔｅｉｎ　ｏｎ　Ｔ－ＡＯＣ　ｏｆ　ｌｉｖｅｒ
ｈｏｍｏｇｅｎａｔｅ　ａｎｄ　ｓｅｒｕｍ　ｉｎ　ｍｉｃｅ
２．３．３　对ＧＳＨ－Ｐｘ活力的影响　由图４可以看出，
硒蛋白处理组小鼠ＧＳＨ－Ｐｘ与２个对照组小鼠有显
著性差异，且随着硒质量浓度的增加，肝组织匀浆和
血液中的 ＧＳＨ－Ｐｘ活力增强。血液和肝组织匀浆
中ＧＳＨ－Ｐｘ活力（ｙ）与血液中硒质量浓度（ｘ）的回
归方程分别为：ｙ＝３４９．７７ｘ＋１８２．８８，Ｒ２＝０．９８，
Ｐ＝０．０００　１＜０．０１；ｙ＝１５９．４２ｘ＋１０６．２２，Ｒ２＝
０．９４，Ｐ＝０．０００　１＜０．０１，可见 ＧＳＨ－Ｐｘ活力与血
液中的硒水平具有极显著相关性。
２．３．４　对ＳＯＤ活性的影响　由图５可以看出，与
２个对照组相比，硒蛋白处理组小鼠的肝组织匀浆
和血清中ＳＯＤ活性均有显著增加，但在硒质量浓度
为１７．７９μｇ／ｍＬ时，增幅下降。这与 ＭＤＡ含量的
变化趋势一致，说明硒质量浓度１７．７９μｇ／ｍＬ时已
超过了小鼠的最适硒摄入量，所以ＳＯＤ活性增幅下
降，而 ＭＤＡ抑制作用减小，含量开始增加，但此硒
摄入量仍可以提高小鼠的抗氧化能力。
图４　硒蛋白对肝组织匀浆和全血中ＧＳＨ－Ｐｘ活力的影响
Ｆｉｇ．４　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｓｅｌｅｎｏｐｒｏｔｅｉｎ　ｏｎ　ＧＳＨ－Ｐｘ　ｏｆ　ｌｉｖｅｒ
ｈｏｍｏｇｅｎａｔｅ　ａｎｄ　ｗｈｏｌｅ　ｂｌｏｏｄ　ｉｎ　ｍｉｃｅ
图５　硒蛋白对肝组织匀浆和血清中ＳＯＤ活性的影响
Ｆｉｇ．５　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｓｅｌｅｎｏｐｒｏｔｅｉｎ　ｏｎ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ＳＯＤ　ｏｆ　ｌｉｖｅｒ
ｈｏｍｏｇｅｎａｔｅ　ａｎｄ　ｓｅｒｕｍ　ｉｎ　ｍｉｃｅ
３　结论与讨论
ＧＳＨ－Ｐｘ是谷胱甘肽氧化还原调节系统中重要
的含硒酶，硒参与组成其活性中心；ＭＤＡ是脂质过
氧化的产物之一，ＳＯＤ则是体内重要的抗氧化酶，
它们在清除活性氧自由基、抵抗氧化损伤、调节机体
氧化还原状态等方面起着重要作用，因此可以利用
生物体内这些指标的变化评价硒的抗氧化性。
关于硒蛋白的抗氧化作用，唐玫等［１１］研究表
明，富硒藻蓝蛋白对有机体的ＳＯＤ 和 ＧＳＨ－Ｐｘ活
性都有显著提高，特别是对肝脏ＧＳＨ－Ｐｘ活性有极
显著的提高作用；对堇叶碎米荠含硒蛋白的体外抗
氧化研究结果显示，硒蛋白有较好的抗氧化活
性［１２］。本研究的结果也显示，在试验设置的硒质量
浓度范围内，小鼠 ＧＳＨ－Ｐｘ活力和 Ｔ－ＡＯＣ随硒质
量浓度的增加而增大，且与血液中的硒水平呈极显
４０２ 西北农林科技大学学报（自然科学版） 第４３卷
著正相关；ＳＯＤ活性也不同程度升高，ＭＤＡ生成则
被抑制。这些结果提示，硒蛋白提高了小鼠血液中
的硒水平，促进了含硒酶的合成及活性，抑制了过氧
化物的生成，提高了小鼠的抗氧化能力。
本试验中，硒质量浓度为１７．７９μｇ／ｍＬ的硒处
理组，灌胃硒量为３．５６μｇ／（ｄ·只），超出了小鼠的
最大耐受硒量，该硒剂量对小鼠的生长发育及抗氧
化的促进效应减小，但仍高于对照，未表现明显的毒
害，这可能是因为蛋白硒以硒代半胱氨酸被吸收，在
体内由密码子 ＵＧＡ翻译编码进蛋白质中［１３－１４］，其
毒性效应会降低；此外，小鼠本身具有的防御机制和
适应能力也可能消除该剂量硒的毒性影响。有研究
表明，超营养剂量的硒摄入量可以降低动物和人类
癌症的发病率［１５］。本研究中小鼠体质量变化结果
显示，第１周给药后，最高硒处理组小鼠体质量减少
最多，除了灌胃操作影响其生长外，高质量浓度的硒
溶液应该也是其影响因素，之后的体质量增加，可能
与小鼠的适应机制有关。
综合来看，小鼠体质量的变化趋势与机体内抗
氧化活性的变化规律存在正相关性。说明适量的堇
叶碎米荠硒蛋白可以提高小鼠血液中的硒水平，促
进血液及肝脏的Ｔ－ＡＯＣ、ＧＳＨ－Ｐｘ和ＳＯＤ活力；减
少肝脏和血清中 ＭＤＡ的生成，抑制脂质过氧化，促
进小鼠的生长发育。
志　谢：本研究工作得到了湖北民族学院的湖北省重点
（特色）学科林学一级学科的支持，在此表示感谢！
［参考文献］
［１］　Ｉｗｏｎａ　Ｚ，Ｈａｌｉｎａ　Ｚ．Ｓｅｌｅｎｉｕｍ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ　ａｎｄ　ｔｏｘｉｃｉｔｙ［Ｊ］．Ｃｅｌ
Ｂｉｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，２０１２，２８：３１－４６．
［２］　Ｆｌｕｅｃｋ　Ｗ　Ｔ，Ｓｍｉｔｈ－Ｆｌｕｅｃｋ　Ｊ　Ｍ，Ｍｉｏｎｃｚｙｎｓｋｉ　Ｊ，ｅｔ　ａｌ．Ｔｈｅ　ｉｍ－
ｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｓｅｌｅｎｉｕｍ　ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ　ｆｏｒ　ｗｉｌｄ　ｈｅｒｂｉｖｏｒｅ　ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ
［Ｊ］．Ｅｕｒｏｐｅａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｗｉｌｄｌｉｆｅ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２０１２，５８：７６１－７８０．
［３］　甘　璐，刘　琼，徐辉碧．硒对大鼠肝脏抗氧化酶活性及基因表
达的影响 ［Ｊ］．中国公共卫生，２００３，１９（２）：１５９－１６０．
Ｇａｎ　Ｌ，Ｌｉｕ　Ｑ，Ｘｕ　Ｈ　Ｂ．Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｓｅｌｅｎｉｕｍ　ｏｎ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ａｎ－
ｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ｅｎｚｙｍｅｓ　ａｎｄ　ｇｅｎｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　ｒａｔ’ｓ　ｌｉｖｅｒｓ［Ｊ］．Ｃｈｉ－
ｎａ　Ｐｕｂｌｉｃ　Ｈｅａｌｔｈ，２００３，１９（２）：１５９－１６０．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［４］　Ｔｈｉｒｙ　Ｃ，Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ　Ｙ　Ｊ，Ｐｕｓｓｅｍｉｅｒ　Ｌ，ｅｔ　ａｌ．Ｓｅｌｅｎｉｕｍ　ｂｉｏａｃｃｅｓｓｉ－
ｂｉｌｉｔｙ　ａｎｄ　ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ　ｉｎ　Ｓｅ－ｅｎｒｉｃｈｅｄ　ｆｏｏｄ　ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｓ［Ｊ］．
Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｔｒａｃｅ　Ｅｌｅｍｅｎｔ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２０１３，１５２：１５２－１６０．
［５］　田俊梅，张　丁，付瑞娟，等．大豆硒蛋白与亚硒酸钠生物利用
的比较研究 ［Ｊ］．大豆科学，２０１０，２９（３）：５３４－５３６．
Ｔｉａｎ　Ｊ　Ｍ，Ｚｈａｎｇ　Ｄ，Ｆｕ　Ｒ　Ｊ，ｅｔ　ａｌ．Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｂｉｏａｖａｉｌ－
ａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｓｏｙｂｅａｎ　ｓｅｌｅｎｏｐｒｏｔｅｉｎ　ａｎｄ　ｓｏｄｉｕｍ　ｓｅｌｅｎｉｔｅ［Ｊ］．Ｓｏｙ－
ｂｅａｎ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０１０，２９（３）：５３４－５３６．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［６］　罗培林，郑　萍，何　军，等．不同硒源及硒水平对大鼠生长性
能、血清抗氧化能力和组织硒沉积的影响 ［Ｊ］．动物营养学报，
２０１２，２４（７）：１３１１－１３１９．
Ｌｕｏ　Ｐ　Ｌ，Ｚｈｅｎｇ　Ｐ，Ｈｅ　Ｊ，ｅｔ　ａｌ．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｓｅｌｅｎｉｕｍ　ｓｏｕｒｃｅｓ　ａｎｄ
ｌｅｖｅｌｓ　ａｆｆｅｃｔ　ｇｒｏｗｔｈ　ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ，ｓｅｒｕｍ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｂｉｌｉｔｙ　ａｎｄ
ｔｉｓｓｕｅ　ｓｅｌｅｎｉｕｍ　ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ　ｉｎ　Ｗｉｓｔａｒ　ｒａｔｓ［Ｊ］．Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ
Ａｎｉｍａｌ　Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ，２０１２，２４（７）：１３１１－１３１９．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［７］　李改平，刘子川，王梦亮．有机硒和无机硒对小鼠抗氧作用比较
研究 ［Ｊ］．山西中医学院学报，２００１，２（３）：１９－２１．
Ｌｉ　Ｇ　Ｐ，Ｌｉｕ　Ｚ　Ｃ，Ｗａｎｇ　Ｍ　Ｌ．Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｏｒｇａｎｉｃ　ｓｅｌｅｎｉｕｍ　ａｎｄ　ｉｎ－
ｏｒｇａｎｉｃ　ｓｅｌｅｎｉｕｍ　ｏｎ　ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ｃｒｉｔｅｒｉｏｎｓ　ｉｎ　ｍｉｃｅ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ
ｏｆ　Ｓｈａｎｘｉ　Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２００１，２（３）：
１９－２１．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［８］　张劲松，高学云，邵玉芬，等．烟草硒蛋白质工业化提取及其对
免疫调节和抗氧化作用的影响 ［Ｊ］．中国烟草学报，１９９８，４
（２）：２９－３２．
Ｚｈａｎｇ　Ｊ　Ｓ，Ｇａｏ　Ｘ　Ｙ，Ｓｈａｏ　Ｙ　Ｆ，ｅｔ　ａｌ．Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ
ｓｅｌｅｎｏｐｒｏｔｅｉｎ　ｆｒｏｍ　ｆｒｅｓｈ　ｔｏｂａｃｃｏ　ｌｅａｖｅｓ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｎ　ｉｍ－
ｍｕｎｅ　ａｄｊｕｓｔｍｅｎｔ　ａｎｄ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ａｃｔａ　Ｔａｂａｃａｒｉａ　Ｓｉｎｉｃａ，
１９９８，４（２）：２９－３２．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［９］　陈春英，张劲松，黄开勋，等．烟叶硒蛋白对人红细胞的辐射溶
血及自由基的作用 ［Ｊ］．中国药理学通报，１９９６，１２（４）：３５７－
３５９．
Ｃｈｅｎ　Ｃ　Ｙ，Ｚｈａｎｇ　Ｊ　Ｓ，Ｈｕａｎｇ　Ｋ　Ｘ，ｅｔ　ａｌ．Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｓｅｌｅｎｏ－ｐｒｏｔｅｉｎ
ｆｒｏｍ　ｔｏｂａｃｃｏ　ｌｅａｖｅｓ　ｏｎ　ｈａｅｍｏｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｒｅｄ　ｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅ
ａｎｄ　ｆｒｅｅ　ｒａｄｉｃａｌ［Ｊ］．Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｂｕｌｅｔｉｎ，１９９６，１２
（４）：３５７－３５９．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［１０］　中国营养学会．中国居民膳食营养素参考摄入量 ［Ｍ］．北京：
中国轻工业出版社，２０００．
Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ　Ｓｏｃｉｅｔｙ．ＤＲＩｓ（Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｄｉｅｔａｒｙ　ｇｕｉｄｅ）［Ｍ］．
Ｂｅｉｊｉｎｇ：Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｌｉｇｈｔ　Ｉｎｄｕｓｔｒｙ　Ｐｒｅｓｓ，２０００．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［１１］　唐　玫，王　曼，郭宝江．富硒藻蓝蛋白对小鼠免疫功能及抗
氧化活性的影响 ［Ｊ］．营养学报，２００１，２３（３）：２７５－２７８．
Ｔａｎｇ　Ｍ，Ｗａｎｇ　Ｍ，Ｇｕｏ　Ｂ　Ｊ．Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｓｅｌｅｎｉｕｍ－ｅｎｒｉｃｈｅｄ　ｐｈｙ－
ｃｏｃｙａｎｉｎ　ｏｎ　ｉｍｍｕｎｅ　ｃａｐａｃｉｔｙ　ｉｎ　ｍｉｃｅ［Ｊ］．Ａｃｔａ　Ｎｕｔｒｉｍｅｎｔａ
Ｓｉｎｉｃａ，２００１，２３（３）：２７５－２７８．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［１２］　Ｌｅｉ　Ｈ　Ｌ，Ｚｈｏｕ　Ｄ　Ｚ．Ｔｈｅ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｏｆ　ｓｅｌｅｎｏ－
ｐｒｏｔｅｉｎ　ｉｎ　Ｓｅ－ｅｎｒｉｃｈｅｄ　ｐｌａｎｔ［Ｃ］．Ｓｅｌｅｎｉｕｍ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ
ａｎｄ　ｈｕｍａｎ　ｈｅａｌｔｈ．Ｌｏｎｄｏｎ：ＣＲＣ　Ｐｒｅｓｓ，２０１３．
［１３］　Ｓｏｃｈｏｒ　Ｊ，Ｐｏｈａｎｋａ　Ｍ，Ｎｅｄｅｃｋｙ　Ｂ　Ｒ，ｅｔ　ａｌ．Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｓｅｌｅｎｉｕｍ
ｉｎ　ｏｒｇａｎｉｃ　ａｎｄ　ｉｎｏｒｇａｎｉｃ　ｆｏｒｍ　ｏｎ　ｌｉｖｅｒ，ｋｉｄｎｅｙ，ｂｒａｉｎ　ａｎｄ　ｍｕｓ－
ｃｌｅ　ｏｆ　Ｗｉｓｔａｒ　ｒａｔｓ［Ｊ］．Ｃｅｎｔｒａｌ　Ｅｕｒｏｐｅａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉｓ－
ｔｒｙ，２０１２，１０（５）：１４４２－１４５１．
［１４］　Ｉｓａｂｅｌ　Ｌ　Ｈ，Ｍａｒｉａ　Ｐ，Ｙｏｌａｎｄａ　Ｍ．Ｓｅｌｅｎｏｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｔｈｅ　ｋｅｙ　ｆａｃ－
ｔｏｒ　ｉｎ　ｓｅｌｅｎｉｕｍ　ｅｓｓｅｎｔｉａｌｉｔｙ，ｓｔａｔｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ａｒｔ　ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　ｔｅｃｈ－
ｎｉｑｕｅｓ　ｆｏｒ　ｓｅｌｅｎｏｐｒｏｔｅｉｎ　ｓｔｕｄｉｅｓ［Ｊ］．Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　ａｎｄ　Ｂｉｏａｎａｌｙｔ－
ｉｃａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１１，４００：１７１７－１７２７．
［１５］　Ｃｌａｒｋ　Ｊ，Ｃｏｍｂｓ　Ｇ，Ｔｕｒｎｂｕｌ　Ｂ，ｅｔ　ａｌ．Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｓｅｌｅｎｉｕｍ　ｓｕｐ－
ｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ　ｆｏｒ　ｃａｎｃｅｒ　ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ　ｉｎ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ
ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｋｉｎ：Ａ　ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ　ｃｏｎｔｒｏｌｅｄ　ｔｒｉａｌ［Ｊ］．Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ　Ｐｒｅ－
ｖｅｎｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｓｔｕｄｙ　Ｇｒｏｕｐ　ＪＡＭＡ，１９９６，２７６：１９５７－１９６３．
５０２第１期 雷红灵，等：堇叶碎米荠硒蛋白的体内抗氧化作用研究