全 文 ：收稿日期:2010-05-24
作者简介:杨亮(1972-), 男(汉族), 贵州贵阳人 , 硕士研究生 , 主要从事新药研发及药学技工教育工作 , Tel.0851-
8292192, E-mailhongxinzhixiao@163.com;郭晶(1974-), 女(汉族), 辽宁铁岭人 ,硕士 ,主要从事新药研发及药学技
工教育工作 , Tel.0851-8293192, E-mailxindao888@sohu.com。
文章编号:1006-2858(2010)11-0902-03
HPLC法测定苗族药材飞龙掌血中白屈菜红碱含量
杨　亮1 , 郭　晶 2 , 范宝成1 , 时邵静 3 , 张　朋3
(1.贵阳昊臻药物开发有限公司 , 贵州 贵阳 550025;2.贵阳市宏信药业职业学校 ,贵州 贵阳 550025;
3.贵阳中医学院 , 贵州 贵阳 550001)
摘要:目的 建立 HPLC法测定飞龙掌血药材中白屈菜红碱含量并应用于药材测定。 方法 采用
十八硅烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱(200 mm × 4.6 mm, 5 μm), 流动相:乙腈-体积分数为
0.1%的磷酸水溶液(体积比为 20∶80), 测定波长:274 nm, 柱温:30 ℃。 结果 线性为 1.2 ～
12 mg·L-1 , 平均回收率为 100.4%。结论 所建立的 HPLC方法可用于测定飞龙掌血药材中白屈
菜红碱含量。
关键词:飞龙掌血;白屈菜红碱;高效液相色谱法
中图分类号:R917　　　文献标志码:A
　　飞龙掌血[ 1]为贵州苗族用药 ,原植物为芸香
科植物飞龙掌血 [ Toddaliaasiatica(L.)Lam.]干
燥根皮 。味微苦 、辛 、温 ,具有祛风止痛 、散瘀止
血 、消肿解毒的功效 ,用于治疗风湿痹痛 、胃痛 、跌
打损伤 、吐血 、刀伤出血 、痛经 、闭经 、牙龈出血及
口舌生疮。文献 [ 2]报道根皮含生物碱:白屈菜
红碱 (chelerythrine)、二氢白屈菜红碱 (dihydro-
chelerythrine)、7 , 8-二甲氧基 -2, 3-次甲基二氧苯
基 [ c]菲啶 (7 , 8-dimethoxy-2, 3-methylenedioxy-
benzo[ c] phenanthridine)、茵芋碱 (skimmianine);
另含香豆素衍生物:飞龙掌血内酯 (toddalolac-
tone)、飞龙掌血异戊烯内酯(toddaculine)、茴芹
香豆素(pimpinelin)、异茴芹香豆素(isopimpinel-
lin),及橙皮苷等。白屈菜红碱硫酸盐具抗病毒
活性及对金黄色葡萄球菌有抑制作用[ 3] ,可作为
飞龙掌血药材的指示性成分。白屈菜红碱含量测
定的研究至今尚未见报道 。本文作者期望通过建
立飞龙掌血中白屈菜红碱的含量测定方法 ,为飞
龙掌血药材标准的修订提供实验依据 ,促使民族
药材飞龙掌血的管理规范化 、标准化和科学化 ,以
便进一步提高飞龙掌血的质量 。
1　仪器与试药
HPLC仪(UV-200I紫外可变波长检测器 , P-
200高压恒流泵 大连依利特科学仪器有限公
司),色谱柱为 C18柱(200 mm ×4.6 mm, 5 μm,
北京 DIKMA公司), Easy-3000色谱工作站(浙江
大学), TU-1800SPC紫外可见分光光度计(北京
普析通用仪器有限责任公司), AUW-120D电子天
平(0.000 01 g,日本 Shimadzu株式会社), 101-2A
型电热鼓风恒温干燥箱(上海市崇明实验仪器
厂), AS-3120超声清洗仪 (天津津腾实验仪器
厂)。
乙腈(色谱纯 ,天津科密欧化学试剂公司),
磷酸(分析纯 ,贵阳磷山化工集团)。
白屈菜红碱对照品 (供含量测定用 ,纯度质
量分数为 97.3%,中国药品生物制品检定所),飞
龙掌血对照药材(贵州省药品检验所),飞龙掌血
药材(分别采自贵阳高坡乡 、息烽县 、织金县 、兴
义市 、大方县 ,经贵州宏信药业技工学校周焕新中
药师鉴定)。
2　方法及结果
2.1　对照品溶液制备
精密称取白屈菜红碱对照品 10.43 mg, 置
100mL量瓶中 , 加甲醇溶解并稀释至刻度 , 得
104.3 mg·L-1(ρ)的对照品储备液 。精密量取储
备液 3.0 mL,置 50 mL量瓶中 ,加甲醇稀释至刻
度 ,摇匀 ,制成约 6 mg·L-1的对照品溶液。
2.2　供试品溶液制备
取飞龙掌血药材粉末约 1 g,精密称定 , 置
第 27卷 第 11期
2 0 1 0年 1 1月
沈　阳　药　科　大　学　学　报
JournalofShenyangPharmaceuticalUniversity
Vol.27 　No.11
Nov.2010 p.902
DOI :10.14066/j.cnki.cn21-1349/r.2010.11.002
100 mL圆底烧瓶中 , 加甲醇 20 mL, 回流提取
30 min,滤过 ,滤液置 50 mL量瓶中 ,加甲醇稀释
至刻度 ,得供试品溶液 。
2.3　测定波长的选择
取对照品溶液 ,以甲醇液为空白 ,用紫外 -可
见分光光度计扫描 , 结果表明白屈菜红碱在
274nm的波长处有较大吸收峰 ,故选择 274nm作
为测定波长 。
2.4　色谱条件
参考文献 [ 4]方法 ,采用十八硅烷基键合硅
胶为填充剂的反相色谱柱 (200 mm×4.6 mm,
5 μm),以乙腈-体积分数为 0.1%的磷酸水溶液
(体 积 比 为 20 ∶80)为 流 动 相 , 流 速:
1.0mL·min-1 ,柱温:30℃,进样量:10μL,测定波
长:274 nm。
2.5　系统适用性考察
吸取对照品溶液和供试品溶液各 10 μL,分
别注入 HPLC仪 ,记录色谱图 ,按白屈菜红碱峰计
算 ,理论板数为 5 210。白屈菜红碱峰与相邻峰分
离度大于均 1.5,分离良好(图 1、2)。
Fig.1　HPLCchromatogramofchelerythrine
Fig.2　HPLCchromatogramofcortextoddalia
2.6　线性关系考察
分别精密吸取对照品储备液 0.6、1.5、3.0、
4.5及 6.0mL,分置 50mL量瓶中 ,加甲醇溶解并
稀释至刻度 ,分别取 10 μL注入高效液相色谱仪 ,
记录色谱图 , 以峰面积 (A)对质量浓度 (ρ/
mg·L-1)作图 ,制备标准曲线 ,得回归方程为:A=
3.3×105·ρ-1 435(r=0.999 9),白屈菜红碱在
1.252 ～ 12.520 mg·L-1内呈良好线性。
2.7　精密度考察
吸取对照品溶液 10 μL进样 ,按上述色谱条
件重复进样 6次 ,结果 RSD为 0.61%,表明仪器
的精密度良好。
2.8　溶液稳定性考察
取对照品溶液分别于 0、 1、 2、 3、 4 h进样
10μL,记录色谱图 ,考察溶液稳定性 ,结果表明 ,
对照品溶液在 4h内稳定 。
2.9　重复性考查
取同一批(息烽)的飞龙掌血药材样品 5份 ,
每份约 1 g,精密称定 ,测定含量 ,测定结果 RSD
为 1.16%,含量测定方法重复性良好。
2.10　药材含量测定
取 5个产地药材 ,测定含量 ,测定结果见表 1。
Table1　Contentofchelerythrineindifferentsamples(n=5)
1 Origin(Guiyang) w/%
2 Xingyi 35.6
3 Zhijin 31.1
4 Gaopo 29.7
5 Xifeng 33.4
6 Dafang 32.9
2.11　回收率测定
分别取同一样品 (息烽 )粉末约 0.3、 0.5、
0.7g, 精密称定 , 分别精密加入质量浓度为
0.104 3g·L-1白屈菜红碱对照品溶液 1.0、1.5、
2.2mL,测定含量 ,计算平均回收率为 100.4%,
RSD为 1.32%。
3　讨论
a.本实验中 ,作者考察了体积分数为 95%的
乙醇溶液和甲醇 2种溶剂的提取效果 ,结果甲醇
提取效果明显优于体积分数为 95%乙醇。提取
方法考察了甲醇超声提取和水浴回流提取 2种提
取方式 ,结果 2种提取方式提取效果无明显差别 ,
故选择超声提取。提取时间上考察了超声 15、
30、60 min,结果超声 15 min效果较差 , 30 min及
60min提取效果无明显差别 ,故选择超声提取
30min。
903第 11期 杨　亮等:HPLC法测定苗族药材飞龙掌血中白屈菜红碱含量
Table2　RecoveryrateofdeterminationofcontentofchelerythrineinToddaliaeCortex(n=9)
Group w/% mmass/mg mequivalency/mg madded/μg mresult/mg Recovery/%
1 33.4 291.44 0.097 104.3 0.203 101.40
299.42 0.100 0.204 99.69
300.03 0.100 0.207 102.48
2 33.4 491.03 0.164 156.45 0.320 99.72
494.92 0.165 0.320 98.94
504.71 0.169 0.324 99.39
3 33.4 694.30 0.232 229.46 0.460 99.42
706.63 0.236 0.467 100.65
704.07 0.235 0.470 102.29
x/% 100.4%
RSD/% 1.32%
　　b.本文作者首次对民族药材飞龙掌血进行
了含量测定研究 ,为飞龙掌血药材标准的修订提
供一定的实验依据。
参考文献:
[ 1] 贵州省药品监督管理局.贵州省中药材﹑民族药材
质量标准 [ M] .贵阳:贵州科技出版社 , 2003:63 -
64.
[ 2] 国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草苗
药卷 [ M] .贵阳:贵州科技出版 , 2006:60-62.
[ 3] 江苏新医学院.中药大辞典:上册 [ M] .上海:上海科
学技术出版社 , 1977:279-282.
[ 4] 安彩贤 ,杨广德 , 叶建涛 ,等.RP-HPLC法同时测定小
果博落回中血根碱和白屈菜红碱的含量 [ J] .中成
药 , 2001, 11(23):824-825.
DeterminationofcontentofchelerythrineinToddali-
aeCortexbyHPLC
YANGLiang1 , GUOJing2 , FANBao-cheng1 , SHIShao-jing3 , ZHANGPeng3
(1.GuiyangHaoZhenPharmaceuticalDevelopmentCo., Ltd., Guiyang550025, China;2.GuiyangHong
XinPharmaceuticalVocationalSchools, Guiyang550025, China;3.GuiyangColegeofTraditionalChinese
Medicine, Guiyang550001, China)
Abstract:ObjectiveTodevelopanHPLCmethodfordeterminationofchelerythrineinToddaliaeCortex
(Toddaliaasiatica(L.)Lam.).MethodsTheseparationwasperformedonaDiamonsilC18 column
(200mm×4.6 mm, 5μm)withacetonitrile-0.1%(φ)phosphoricacid(V∶V=20∶80)asthemobilephase
ataflowrateof1.0 mL·min-1.Thedetectivewavelengthwassetat274 nmandthecolumntemperature
was30℃.ResultsThereweregoodlinearrelationshipsbetweentheconcentrationsandthepeakareasof
chelerythrineintherangeof1.2-12.0 mg·L-1(r=0.999 9).Therecoverieswerefoundtobe100.4%
withRSDof1.32%(n=9);ConclusionsTheresultsoftheexperimentshavedemonstratedthatthedevel-
opedmethodisrapidandsimplewithgoodaccuracyandreproducibilityforthedeterminationofcheleryth-
rineinToddaliaeCortex.ThismethodissuitableforthequalitycontrolofToddaliaeCortex.
Keywords:ToddaliaeCortex;chelerythrine;HPLC
904 沈　阳　药　科　大　学　学　报 第 27卷