全 文 ：2010年　　7 月 郑 州 大 学 学 报 (工 学 版 ) Jul.　2010
第 31卷　第 4期 JournalofZhengzhouUniversity(EngineeringScience) Vol.31　No.4
　　收稿日期:2009-08-03;修订日期:2010-01-16
　　基金项目:河南省科技厅攻关基金资助项目(0624420031)
　　作者简介:龙跃(1960-), 男 ,郑州大学教授 , 硕士 , 主要从事有机合成和天然产物化学研究.E-mail:longyue@zzu.
edu.cn.com.
　　文章编号:1671-6833(2010)04-0113-03
三氯化铝比色法测定中草药雀儿舌头中总黄酮研究
龙　跃 , 寇　娴 , 程素霞 , 王武鹏 , 王　超 , 潘浩顺
(郑州大学 化学系 ,河南 郑州 450001)
摘　要:三氯化铝比色法的基本原理是利用芦丁与 AlCl3发生显色反应 ,生成黄色络合物 , 在 421 nm左
右有较强吸收能力.而大多数黄酮类中药材多含有黄酮苷 ,常见的黄酮苷在 421 nm波长处有较强吸收 ,
而非黄酮类物质在此处无吸收.该方法实验条件容易控制 , 操作简单 , 平均回收率为 102.52 %,表明回
收率的重现性好;而其相对标准偏差 RSD为 2.04 %,表明方法的精密度好.因此以芦丁作为对照 , 可作
为测定黄酮类化合物的常用方法.
关键词:总黄酮;三氯化铝比色法;芦丁
中图分类号:O637.32　　　文献标识码:A
0　引言
中药材中总黄酮的含量测定成为近年来研究
黄酮化合物的焦点 [ 1] .雀儿舌头中黄酮类化合物
含量的分析鲜见报道.目前 ,文献报道的有关测定
中草药中总黄酮含量的主要方法有 NaNO2 -Al
(N03)3 -NaOH体系分光光度法 ,高效液相色谱
法 ,反向色谱法和三氯化铝比色法 [ 2-4]等几种方
法 ,其中又以三氯化铝比色法较常用.该方法利用
芦丁与 AlCl3发生显色反应 ,在 421 nm左右有较
强吸收;许多中药材中都含有黄酮苷 ,黄酮苷在
421nm波长处也有较强吸收.因此以芦丁作为对
照 , AlCl3比色法可以成为测定中药总黄酮含量的
理想方法.
1　材料与方法
1.1　仪器与试剂
美国 PerkinElmer紫外分光光度计(型号:
lambda35);PHS-3C精密 pH计(上海雷磁仪器
厂);Rc-52-99型旋转蒸发器(上海亚荣生化
仪器厂);索氏提取器;SartoriusBS210S电子天平
(北京塞多利斯天平有限公司).
芦丁 ,三氯化铝 ,醋酸钠 ,冰醋酸 ,甲醇 ,亚硝
酸钠 ,氢氧化钠 ,硝酸铝 ,乙醇 , 石油醚等均为分
析纯 ,水为蒸馏水.
1.2　雀儿舌头中总黄酮的测定
1.2.1　标准品溶液配制:
精密称取芦丁标准品(120 ℃烘干至恒重)
10.0mg,用甲醇定容至 50mL,配成 0.2mg· mL-1
的芦丁标准溶液.
1.2.2　待测样品溶液制备
将粉碎后的雀儿舌头粗粉在鼓风干燥箱中于
60℃下干燥 24h,精密称取 10 g置于索式提取器
中 ,加 90mL无水乙醇回流提取至无色 ,提取液浓
缩回收乙醇后 ,转移至 50mL容量瓶中 ,用无水乙
醇定容.
1.2.3　显色条件的优化选择
通过对三氯化铝比色法的显色条件进行了优
化试验 ,试验结果表明采用 0.1mol·L-1的 AlCl3
溶液 , pH值为 5.2的 NaAc-HAc缓冲溶液 , 40
℃水浴显色 10 min,是 AlCl3比色法测定中草药
中总黄酮含量的最优条件.
1.2.4　显色试剂的配置
精密称取三氯化铝 1.34 g, 用甲醇定容至
100mL,配成 0.1mol· L-1的溶液.精密称取无水
醋酸钠 1.76g,用蒸馏水溶解至 100mL,配成 0.2
mol· L-1的溶液.精密量取 1.15 mL冰醋酸 ,用蒸
馏水稀释至 100mL,配成 0.2 mol· L-1的醋酸溶
液.将醋酸钠溶液和冰醋酸溶液配成 pH值为 5.2
的缓冲溶液.
114　 郑 州 大 学 学 报 (工 学 版 ) 2010年
1.2.5　波长选择
精密量取 1 mL芦丁标准溶液 ,置于 10mL容
量瓶中 ,加入 2 mL0.1mol·L-1的 AlCl3溶液 ,再
加入 1mLpH值为 5.2的 NaAc-HAc缓冲溶液 ,
用甲醇定容 , 40 ℃水浴显色 10 min,在 200 ～ 600
nm范围扫描 ,芦丁在 421 nm处有最大吸收 ,空白
无干扰.
精密量取 1 mL待测的雀儿舌头溶液 ,置于
10 mL容量瓶 ,加入 2 mL0.1 mol· L-1的 AlCl3
溶液 ,再加入 1mLpH值为 5.2的 NaAc-HAc缓
冲溶液 ,用甲醇定容 , 40 ℃水浴显色 10 min,在
200 ～ 600nm范围扫描 ,待测溶液在 421nm附近
也有最大吸收 ,因此 ,选择 421nm作为测定波长.
1.2.6　标准曲线的绘制
精密吸取芦丁标准品溶液(0.2 mg/mL)0.0,
0.2, 0.4 , 0.6, 0.8, 1.0, 1.2 mL,置于 10 mL容量
瓶 ,加入 2mL0.1 mol· L-1的 AlCl3溶液 , pH值
为 5.2的 NaAc-HAc缓冲溶液 1 mL,用甲醇定
容 , 40 ℃水浴显色 10 min,在 421 nm处测定吸光
度值.
以芦丁的浓度为横坐标 ,吸光度值为纵坐标 ,
作图得到标准曲线(见图 1),其回归方程为:y=
0.463 3x+0.013 1相关系数 R2 =0.998 6,表明
芦丁在 40 ～ 240μg范围内 ,体积(浓度)与吸光度
呈良好线性关系.
图 1　标准曲线的绘制
Fig.1　Drawingofstandardcurve
1.2.7　样品含量测定
精密吸取雀儿舌头待测溶液 6份 , 每份 1
mL,置于 10 mL容量瓶 ,在 421 nm处测定吸光度
值 ,结果见表 1.
表 1　平行待测溶液的吸光度测定结果
Tab.1　Resultsofabsorbance
编号 1 2 3 4 5 6
吸光度 0.399 0.412 0.410 0.398 0.390 0.391
　　由试验所得平均吸光度值为 0.400,吸光度
的 RSD为 2.32 %,将所得值代入回归方程可计
算出雀儿舌头中的总黄酮的平均含量为 0.84 %.
1.2.8　稳定性试验
精密吸取雀儿舌头待测溶液 1.0mL,置于 10
mL容量瓶 ,在 421 nm处每隔十分钟测定一次吸
光度值.结果见表 2.
表 2　稳定性实验结果
Tab.2　Resultsofstability
测定时间 /min 吸光度 /A
0
10
20
30
40
50
60
0.401
0.400
0.399
0.399
0.398
0.397
0.395
实验所得 RSD为 1.21%.试验结果表明:在
室温的环境中 ,显色时间在 10 ～ 60 min范围内 ,
吸光度稳定 ,基本没有变化.
1.2.9　精密度试验
精密吸取雀儿舌头待测样品溶液 6份 ,每份
1 mL,置于 10 mL容量瓶 ,在 421 nm处测定吸光
度值.结果见表 3.
表 3　精密度实验结果
Tab.3　Resultofprecision
测定次数 吸光度(A)
1
2
3
4
5
6
0.399
0.412
0.410
0.398
0.390
0.391
　　试验结果表明 ,采用本法测定雀儿舌头中总
黄酮含量 ,精密度良好 ,其相对标准偏差 RSD为
2.04%.
1.2.10　方法回收率
精确吸取雀儿舌头待测样品溶液 6份 ,每份
1 mL,置于 10 mL容量瓶中 ,依次分别加入精密
吸取的芦丁对照品溶液 0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5,
3.0mL,再各依次加入 0.1 mol/L的 AlCl3溶液 2
mL, pH值为 5.2的 NaAc-HAc缓冲溶液 1 mL,
摇匀 ,用甲醇定容 , 40 ℃水浴显色 10 min,在 421
　第 4期 龙跃 ,等:三氯化铝比色法测定中草药雀儿舌头中总黄酮研究 115　
nm处测定吸光度值.结果见表 4.
表 4　回收率实验结果
Tab.4　Resultofrecoveryrate
序号 含量/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
1
2
3
4
5
6
1.72
1.72
1.72
1.72
1.72
1.72
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
1.875
1.983
2.044
2.193
2.253
2.332
103.2
103.7
101.4
104.2
101.9
100.7
平均回收率 102.52
2　结论
实验结果表明:雀儿舌头中的总黄酮的平均
含量为 0.84%,利用三氯化铝比色法对雀儿舌头
中总黄酮含量进行测定 ,实验条件容易控制 ,操作
简单 ,重现性好 ,可作为测定黄酮类化合物的常用
方法.因此以芦丁作为对照 , AlCl3比色法可以成
为测定中草药雀儿舌头中总黄酮含量的理想
方法.
参考文献:
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药总黄酮方法的探讨 [ J] .时珍国医国药 , 2008, 19
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AlCl3 ColorimetryforDeterminationofTotalFlavonoidsLeptopus
ChinensisChineseHerbalMedicine
LONGYue, KOUXian, CHENGSu-xia, WANGWu-peng, WANGChaoPANHao-shun
(DepartmentofChemistry, ZhengzhouUniversityZhengzhouUniversity, Zhengzhou450001, China)
Abstract:ThebasicprinciplesofaluminumchloridecolorimetricmethodistheuseofrutinandAlCl3 color
reactionoccurstoproduceayelowcomplex, whichhasstrongabsorptionaround421 nm.MostofChinese
herbalmedicinescontainflavonoidsglycosidesandcommonflavonoidglycosidesinthe421nmwavelengthhas
strongabsorption, ratherthantheflavonoidsherewithoutabsorption.Thismethodiseasytocontrolexperi-
mentalconditions, simpleoperation, theaveragerecoverywas102.52%, indicatinggoodreproducibilityand
recoveryrates;whiletherelativestandarddeviationRSD =2.04%, indicatinggoodprecisionapproach.
Thereforerutincanbeareferenceandusedasacommonmeasurementmethodofflavonoids.
Keywords:AlCl3 colorimetry;totalflavonoids;rutin