全 文 ：［收稿日期］2012 － 11 － 21
［基金项目］安徽科技学院青年基金项目(ZRC2011282) ;安徽高校省级自然科学研究项目(KJ2013Z052)．
［作者简介］周丽丽(1980 －) ，女，山东烟台人，讲师，主要从事中药栽培与产地加工方面的研究．
2013 年 5 月 重庆文理学院学报 May，2013
第 32 卷 第 3 期 Journal of Chongqing University of Arts and Sciences Vol. 32 No. 3
白鲜根皮与木心活性成分比较研究
周丽丽，左 玲，马冬磊，毛斌斌
(安徽科技学院，安徽 凤阳 233100)
［摘 要］目的:比较白鲜根皮和木心的活性成分，为白鲜产地加工是否需要去心提供理论依
据．方法:采用 HPLC法测定白鲜根皮与木心中梣酮和黄柏酮含量，并比较 HPLC 指纹图谱相
似度．结果: 根皮中的梣酮和黄柏酮含量分别为 0． 7731﹪、0． 3029﹪，木心中的梣酮和黄柏酮含
量分别为 0． 4712﹪、0． 1785﹪; 根皮与木心指纹图谱的相似度达 0． 923，有 12 个共有峰．结论:
以梣酮和黄柏酮为指标，白鲜根皮中两者含量均大于木心中的两者含量; 根皮与木心中两者含
量均达到了中国药典要求，二者 HPLC指纹图谱的吻合程度较高，活性成分相似．白鲜根皮可
不去木心入药．
［关键词］白鲜根皮;木心;梣酮;黄柏酮
［中图分类号］O69 ［文献标志码］A ［文章编号］1673 － 8004( 2013) 03 － 0063 － 03
白鲜皮为芸香科白鲜属植物白鲜(Dictam-
nus Dasycarpus Turcz)的干燥根皮，是一种常用中
药，为历代本草及中国药典收载． 主产于辽宁、
河北、江苏、浙江、安徽等地，在吉林省也有较大
面积的分布．春、秋二季采挖根部，除去泥沙及粗
皮，以抽净木心，条大、肉厚、色灰白者为佳［1］．具
有清热燥湿、祛风解毒、抗菌、抗癌的作用，对黄
疸、急慢性肝炎、心血管及血液病有一定疗效，
临床多用于治湿热疮毒、风疹疥癣、皮肤瘙痒［2］
等症，是临床常用药物．滁州白鲜资源丰富，在产
地去心过程中发现其木心曲折且有较多须根直
接与木心相连，导致去心困难．因此，本实验采用
HPLC法对白鲜根皮与其木心中梣酮和黄柏酮的
含量进行测定，并比较 HPLC 指纹图谱相似
度［3］，从而推论产地加工可否不去木心．
1 材料和方法
1． 1 药材和试剂
白鲜采挖于滁州凤阳狼巷迷谷地区，经安徽
科技学院刘汉珍副教授鉴定为芸香科植物白鲜
Dictamnus Dasycarpus Turcz 的根;甲醇(色谱纯，
天津市永大化学试剂有限公司) ;乙酸乙酯(分
析纯，天津市北方天医化学试剂厂) ;黄柏酮对照
品(A0265，上海源叶生物有限公司) ;梣酮对照
品(111700 － 200602，中国药品生物制品检定
所)．
1． 2 仪器
JFSD －100 －Ⅱ粉碎机(上海嘉定粮油仪器
有限公司) ;CP2250 准微量天平 (塞多利斯仪器
有限公司) ;FA2104B 电子天平(上海精密科学
仪器有限公司) ;KQ － 250DE 型数控超声波清洗
机(昆山市超声仪器有限公司) ;DHG － 9070 型
电热恒温鼓风干燥箱(上海市三发科学仪器有限
公司) ;HH －4 数显恒温水浴锅(常州国华电器
有限公司) ;岛津分析半制备高效液相色谱仪
(SIL － 20A 二极管阵列检测器，LC － 20AT 泵，
CTO －10Asvp 恒温箱，SPD － M20A 收集器)．
1． 3 方法
1． 3． 1 色谱条件
色谱柱:ZORBAX SB － C18(4． 6 mm × 150
mm，5 μm) ;流动相:甲醇(A)∶ 水(B)= 60∶ 40;
检测波长:黄柏酮 215 nm，梣酮 219 nm;柱温:
30 ℃;流速:1 mL /min;进样量:10 μL;记录时
间:20 min．
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1． 3． 2 标准品溶液制备
1． 3． 2． 1 梣酮标准品溶液制备
精密称取梣酮标准品 1． 24 mg，置 5mL 容量
瓶中，加甲醇适量溶解并稀释至刻度，摇匀，配制
成浓度为 0． 248 mg mL的标准品溶液．
1． 3． 2． 2 黄柏酮标准品溶液制备
精密称取黄柏酮标准品 1． 01 mg，置 5 mL容
量瓶中，加甲醇适量溶解并稀释至刻度，摇匀，配
制成浓度为 0． 202 mg mL的标准品溶液．
1． 3． 3 供试品溶液制备
精密称定白鲜粉末 1． 0 g，加甲醇 20 mL，加
热回流提取 1 小时，放冷，滤于 25 mL容量瓶中，
加甲醇定容至刻度，摇匀即得．
1． 3． 4 含量测定
按“1． 3． 1”项下色谱条件测定含量，并记录
指纹图谱．
2 结果与分析
2． 1 HPLC法含量测定方法学考察
2． 1． 1 专属性考察
由图 1 知，在“1． 3． 1”项的色谱条件下，梣酮
和黄柏酮的峰能和其他杂质峰达到基线分离，保
留时间分别为 9． 150 min和 10． 881 min．
图 1 A:黄柏酮色谱图 B:梣酮色谱图 C:样品色谱图
2． 1． 2 线性关系考察
取黄柏酮和梣酮标准品溶液，分别装入样品
瓶，连续进样，进样量为 6 μL，10 μL，14 μL，18
μL，20 μL，测定峰面积．以峰面积对含量进行线
性回归，得黄柏酮回归方程:Y = 1． 8 × 106X +
4895． 2，R2 = 0． 9999;梣酮回归方程:Y = 2． 5 ×
106X + 16527，R2 = 1． 0000． 结果表明:黄柏酮在
1． 212 ～ 4． 040 μg，梣酮在 1． 488 ～ 4． 960 μg范围
内线性关系良好．
2． 1． 3 精密度试验
吸取标准品溶液，装入样品瓶，重复进样 6
次，进样体积 10 μL［4］．结果显示:标准品中梣酮
峰面积的 RSD =0． 14﹪，表明其精密度良好．
2． 1． 4 稳定性试验
取白鲜样品，按供试品溶液制备项下方
法制备供试品溶液，分别于 0、2、4、8、12、24 h
进样10 μL，结果黄柏酮的峰面积 RSD = 1． 53﹪，
梣酮的峰面积 RSD =2． 67﹪，表明其在 24 h 内
稳定．
2． 1． 5 重复性试验
同一供试样品溶液，分别进样 6 次，每次 l0
μL，结果黄柏酮峰面积 RSD = 2． 14﹪，梣酮峰面
积的 RSD =1． 95﹪，表明其重复性良好．
2． 1． 6 加样回收率试验
取低、中、高浓度的供试品溶液，都连续进样
3 次，记录峰面积，然后加入 1 /3 体积标准品溶
液，再连续进样 3 次，每次进量 10 μL．结果黄柏
酮平均回收率为 99． 14﹪，RSD为 1． 16﹪．
2． 2 活性成分比较结果
2． 2． 1 含量测定结果
将去心白鲜皮、木心按供试品溶液制备项下
方法制备供试品溶液，每次进样 10 μL，记录指
纹图谱．含量结果见表 1．
表 1 含量测定表
序号 梣酮含量(﹪) 黄柏酮含量(﹪)
带心白鲜 0． 6351 0． 2296
木心 0． 4712 0． 1755
去心白鲜 0． 7731 0． 2982
2． 2． 2 标准指纹图谱的建立和共有峰的标定
将“2． 2． 1”项下测定的指纹图谱采用“中药
色谱指纹图谱相似度评价系统 2004 A 版”生成
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标准指纹图谱(见图 2) ，并对共有峰进行标定，
得到白鲜根皮与木心标准对照图谱共 12 个
共有峰，见图 3 ． 各峰保留时间以及峰面积
值，见表 2．
图 2 白鲜根皮(S1)与木心(S2)指纹图谱
图 3 白鲜根皮与木心的对照指纹图谱和共有峰标识
表 2 对照图谱共有峰保留时间及峰面积
编号 保留时间 峰面积 编号 保留时间 峰面积
1 1． 648 5 353 256 7 6． 928 350 321
2 1． 909 3 665 948 8 7． 451 2 659 763
3 3． 061 266 315 9 9． 147 1 710 491
4 3． 205 464 081 10 10． 885 5 277 717
5 3． 659 973 695 11 12． 347 1 375 078
6 5． 963 349 501 12 16． 784 22 190
2． 2． 3 相似度考察
以“2． 2． 2”项下生成的标准指纹图谱为对
照，采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统
2004A 版”计算相似度，结果见表 3．
表 3 根皮与木心 HPLC指纹图谱相似度
名称 根皮 木心
根皮 1 0． 923
木心 0． 923 1
3 讨论
本试验采用 HPLC 法测定白鲜皮中黄柏酮
和梣酮的含量，由方法学考察结果可见，本法精
密度高，稳定性和重复性好，黄柏酮和梣酮进样
量在 1． 212 ～ 4． 04 μg和 1． 488 ～ 4． 96 μg范围内
线性关系良好，回收率也较理想．故此认为，本法
灵敏准确，简便可行．
以黄柏酮和梣酮为指标，采用 HPLC 法，比
较白鲜根皮与木心活性成分，白鲜根皮中黄柏酮
和梣酮含量分别为 0． 3029﹪，0． 7731﹪;木心中
黄柏酮和梣酮含量分别为 0． 1785﹪，0． 4712﹪;
而带木心的黄柏酮和梣酮含量分别为0． 2342﹪，
0． 6351﹪．由含量测定结果可知，去心和未去心
对黄柏酮和梣酮含量影响较小，但二者黄柏酮和
梣酮含量均达到中国药典标准．
白鲜根皮和木心有 12 个共有峰构成其特征
指纹图谱，根皮和木心 HPLC 指纹图谱的相似度
为 0． 923，大于 0． 900，表明其所含活性成分具有
一定的相似性． 白鲜根的木心能否药用研究甚
少，本文数据结果为白鲜可不去木心入药提供了
一定依据．
4 结论
本次试验通过 HPLC 法比较白鲜根皮与木
心中黄柏酮和梣酮含量，并对指纹图谱进行相似
度分析，显示白鲜根皮与木心 HPLC 指纹图谱的
吻合程度较高，活性成分相似，且有效成分含量
均达中国药典标准．白鲜可不去木心入药．
［参考文献］
［1］国家药典委员会． 中华人民共和国药典 2010 年版
［S］．北京:中国医药科技出版社，2010: 102 － 130．
［2］郭静．白鲜皮提取物止血作用及其药理研究［D］．成
都:成都中医药大学，2006: 4 － 5．
［3］徐海星，许沛虎，林世和，等． 中药材白英 XRD 指纹
图谱及相似度分析［J］． 2012，35( 1) : 42 － 44．
［4］李倩，贾凌云，孙启时． HPLC 法同时测定白鲜皮中 γ
－崖椒碱和白鲜碱的含量［J］． 沈阳药科大学学报，
2010，27( 7) : 570 － 573． (下转第 69 页)
56
Cloning of streptomycetes chalcone synthase gene and construction
of prokaryotic expression carrier
XIAO Jing1，L Yuhong2，CHEN Xuemei2，LI Yuanyuan2，PENG Tingwen2，ZHOU Chunling2，
ZENG Lingrong2，BAO Yuxin2，LING Xin2，YUE Changwu2
(1． Morphological Lab of Zunyi Medical College，Zunyi Guizhou 563000，China;
2． Microbial Resources and Drug Development Lab of Guizhou Province，Zunyi Medical College，Zunyi Guizhou 563000，China)
Abstract:Based on the known conserved cDNA region of streptomycetes chalcone synthase gene in the Gen-
bank database，chs specific primer was designed． Taking soil total DNA as the template，PCR technique was
used to get a chs gene coding area． Through TA clone，order － checking，Homology comparison and evolu-
tion analysis，it shows that the gene is genus actinomyces． At the terminal of gene 5 and gene 3 the restric-
tion endonuclease sites of NcoI and EcoR were led in respectively． The two restriction endonuclease digestion
were led in the psimple － T /chs carrier and pET32a prokaryotic expression individually． After the Gel ex-
traction of objective fragment，the two were connected and converted into competent Escherichia coli cells．
The bacteria liquid was screening by PCR and identified by Double enzyme digestion，and the 3730 order －
checking shows that the length of coding region is 1089 bp． It was inferred that the length of the coding re-
gion includes 362 amino － acid residue，and the 5． 41PI，and 3965 dalton molecular weight has chs con-
served functional area acidic protein． The analysis shows that the similarity of nucleotide between the gene
and the Chalcone synthase RppA gene of Streptomyces lividans is 93﹪，and the similarty of amino acid order
is 87． 70﹪． The order － checking shows that the gene has been successfully inserted into the pET32a carriers．
Key words:Chalcone synthase;soil total DNA;gene clone;prokaryotic expression
(责任编辑 穆 刚)
(上接第 65 页)
Comparative study of the active ingredient of densefruit
pittany root － bark and duramen
ZHOU Lili，ZUO Ling，MA Donglei，MAO Binbin
(Anhui Science and Technology University，Fengyang Anhui 233100，China)
Abstract:Objective:To compare the active ingredient of densefruit pittany root － bank and duramen ，to pro-
vide a theoretical basis for whether densefruit pittany root － bark should be removed the duramen． Methods:
Using the HPLC method for the determination of densefruit pittany root － bark and duramen content of frax-
inellone and obacunone，and comparison of HPLC fingerprint similarity． Results:The root bark fraxinellone
and obacunone for 0． 7731﹪，0． 3029﹪，duramen fraxinellone and obacunone for 0． 4712﹪，0． 1785﹪，root
bark and duramen of the similarity of 0． 923． Conclusion:Taking fraxinellone and obacunone as the index，
densefruit pittany root － bark of both content were greater than the content of duramen of both;the content of
root bark and duramen reached the Chinese pharmacopoeia requirements，two HPLC fingerprint matching de-
gree is high，similar chemical composition． The densefruit pittany root － bark can not be removed the dura-
men as medicinal materials．
Key words:densefruit pittany root － bark;Duramen;Fraxinellone;Obacunone
(责任编辑 穆 刚)
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