全 文 ：一 16 30 一 药物分析杂志 C h i nJ p h ar A mn al2 0 0 8 , 2 8 ( 10 )
H P L C 法测定千里香叶中黄酮类成分的含量
闰江红 ` , 马彦冬 2 , 王晓中2 , 杨瑞杰 2 , 李绪文2 , 马双成 ’ , 金永 日 2 `
( 1
. 吉林省中医药科学院 , 长春 1 300 2 1 ; 2 . 吉林大学化学学院 , 长春 1 300 1 2 ; 3 . 中国药品生物制品检定所 , 北京 10 0050)
摘要 目的 :对千里香叶中的 2 种主要黄酮类成分 5 , 7 , 3 ’ , 4 ’ 一 四甲氧基黄酮 (化合物 I )和 5 , 7 , 3 ’ , 4 ’ , 5 ’ 一 五甲氧基黄酮 (化
合物 fl )进行含量测定 。 方法 :采用反相高效液相色谱法 , 使用 Z O R B A X E xt en d C . 8柱 ( 2 50 m m x 4 . 6 m m , 5 协m ) , 流动相为甲
醇 一水 ( 58 : 4 2 ) , 流速 1. 2 m L · m i n 一 ’ , 检测波长 337 n m ,柱温 25 ℃ 。 结果 :化合物 I 、 n 进样量在 0 . 5 一 5 此 范围内均有良好
的线性关系 , 相关系数 : 均为 0 . 999 ( , ; = 6 ) ;化合物 I 、 n 的平均回收率 ( n = 6) 分别为 102 . 8% 和 9 . 4% , RS D 分别为 1 . 0%
和 1 . 4 % 。 结论 :本方法能够准确地测定千里香叶中的 2 种主要黄酮类化合物的含量 ,测定方法简便 、快捷
关键词 :千里香 ;黄酮 ;高效液相色谱 ;含量测定
中图分类号 : gR l 7 文献标识码 : A 文章编号 : 02 5 4 一 17 93 ( 2 0 0 8 ) 1 0 一 16 3 0 一 0 3
H P L C d e t e r m in a t i o n o f fl a v o n o id s i n l e a v e s
o f M 血” 石沙a P a n ic u al at L . J a e k
Y A N J i a n g 一 h o n g ’ , M A Y a n 一 d o n g , , W A N G X i a o 一 z h o n g ,
,
Y A N G R u i 一 j i e Z
L l X
u 一 w e n Z , M A Sh u a n g 一 e h e n g 3 , J IN Y o n g 一 ir Z`
( 1
.
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M e o l j e a l S
( j e , 1` e s , Ch a n罗h u n 13 0 0 2 1 , C Fl i n a ; 2 . Ch e n l i s 一卿 C o l l e g e o f j i l i n U n i v e o i l y , Ch a n g o h u n 130 0 12 , C h i n a ;
3
.
N
a Li , 〕n a l I n s t i [ u t e fo r t h e C . , n t r o l ` ) f p ha r ; , l a ` ,e L, l i e al a n d B i o l o g i e a l p or d u e Ls
,
B e i j i n g 10 00 50
,
Ch i
, l a )
.
A b s t r 8 C t
3
` ,
4
’ ,
5
’
o bj e c it v e : T o ol e le mr i
n e tw o fl a v o n o i〔15— 5 , 7 , 3 ` , 4 ` 一 t e tar m e t h o x川 a v o n e ( e o m p o u n d l ) a n d s , 7 ,p e n t a m e th o x y fl a v o n e ( e o m p o u n d l ) i n l e a v e s o f M u r r叮 a 尸a n ic u la ta L . J a e k . M e t h o d s : U s i n g R P -
H P L C
.
T h e s e p a
r a t i o n w a s p e lfo mr
e d o n Z O R B AX E x re n d C
18 e o l u m n ( 2 5 0 m m x 4
.
6 m m
,
5 卜m ) , u s i n g a m i x t u r e
o r 5 5% m e t h a n o l a n d 4 2 % w a t e
r a s t h e m o b i le P h a s e w i th 一h e fl o w r a t e o f 1 . 2 m L · m i n 一 ’ a t 2 5 ℃ , t }l e w a v e l e n g t h
fo r m e a s u r e m e n t w a s 3 3 7 n m
.
R e s u l t s : T h e l i n e a r i t y w a s i n t h e r a n g e o f 0
.
5 一 5 卜g ( n = 6 ) fo r e o m p o u n d s 1 a n d
1
, a n d a l l t h e e o r e l a t i o n e o e if e i e n rs w e r e 0
.
9 9 9 9 ; Th e a v e r a g e
r e e o v e r i e s (
n = 6 ) fo
r e o m p o u n d s 1 a n d 1 w e r e
10 2
.
5% ( n s n = 1
.
0% ) a n d 9 9
.
4 % ( R SD = 1
.
4% )
r e s p e e t i v e l y
.
C o n e l u s i o n : hT i
s m e th o d 15 a e e u r a t e
, r e l ia b l e
a n d r e p r o d u e i b l e to d e t e r m i n e tw o fl a v o n o id s in l e a v e s o f M u ar 少a 尸a n i c u l a ta L
.
Ja e k
.
K e y w o r d s :肥 “ 厅。 , a 户a n i e u l a t a l」 . Ja e k : fl a v o n o id s : H P LC ; d e te r m i n a ti o n
千里香「M u r a抖 尸a n i e u l a t a l」 . Ja e k ]为芸香科九
里香属植物 ,分布于我 国云南 、 贵州 、湖南 、 广东 、 广
西 、福建 、 台湾以及亚洲其他一些热带及亚热带地
区 L’ 〕 。 千里香叶具有增强免疫力 、抗炎 、 解热 、 镇痛
及抗生育等功效 〔’ 」 ,其叶中含有黄酮 、 香豆素 、 挥发
油等化学成分 L’ 一 ’ 〕 ,其中甲氧基黄酮类化合物属于
药用植物体内的功效成分 [ 6 一, 且在该植物的叶中含
量较高 。 我们从千里香叶中分离得到 5 个甲氧基黄
酮类化合物 , 利用 I D 、 Z D N M R 确定 了它们的化学
结构 。 经 H PL C 测定 ,在这些黄酮类化合物中 , 5 , 7 ,
3
` ,
4
’ 一 四甲氧基黄酮 (化合物 I )和 5 , 7 , 3 ’ , 4 ’ , 5 ’ -
五甲氧基黄酮 (化合物 n )的含量最高 ,约占总黄酮
含量的 7 0 % 以上 。 至今为止 , 未见用 H P LC 法测定
千里香叶中黄酮类成分含量的文献报道 ,本文采用
H PL c 法测定 了千里香叶中这 2 种黄酮类化合物的
含量 , 为千里香叶药材质量标准的建立提供依据 。
1 仪器与材料
A isl en t 1 10 高效液相色谱仪 , VW D 检测 器 ,
A isl en t 1 10 0 色谱工作站 。 甲醇为色谱纯 ,水为重蒸
馏水 。
* 通讯作者 T e口 Fax : ( 04 3 1 ) 8 5 6 2 80 12 ; E 一 l , l a i l : j i n y r@ Jl u . e d u . e n
DOI : 10. 16155 /j . 0254 -1793. 2008. 10. 011
药物分析杂志 C hin J pha mr An a l 2 8 0 0, 2 8 ( 10 ) 一 1 6 3 1
电子天平为 M e t tl e rt o l e d。 AG一3 5 型
千里香叶采自云南昆明 , 经长春市中医学院邓
明鲁教授鉴定 为 千 里 香 「uM arT ya p an icu la at L
J a e k」。
化合物 I 、 1 的对照品均为自制 ,系从千里香叶
提取物中分离得到 ,并经 ` H 一 N M R 、 ” e 一 N M R 、 M s 、
IR 和 U V 等光谱鉴定其结构 ;按本方法色谱条件 ,
归一化法测得纯度分别为 98 . 2% 和 9 . 8% 。
2 色谱条件
ZO R B AX E x te n t C
I: 柱 ( 2 5 0 m m x 4 . 6 m m , 5
卜m ) ,流动相为甲醇 一 水 ( 5 8 : 4 2 ) , 流速 1 . 2 m L ·
m i n
一 ’ ,检测波长 3 3 7 n m ,柱温 2 5 ℃ ,进样量 2 0 协I J 。
3 溶液制备
3
.
1 对照品溶液 精密称取化合物 1 7 . 0 m g , 化
合物 n 6 . o m g ,置同一 50 m L 量瓶中 , 加甲醇溶解
并稀释至刻度 ,摇匀即得 。
3
.
2 供试品溶液 取干燥的千里 香叶样 品粉末
(过 60 目筛 ) ,混合均匀 ,精密称取 1 . 0 9 ,每次加甲
醇 巧 m L 回流提取 l h ,共 3 次 ,合并提取液 ,蒸干溶
剂后加甲醇溶解并定容至 10 0 . 0 m L ,过 0 . 45 林m 滤
膜 ,取续滤液即得 。
4 方法学考察
4
.
1 线性关系考察 精密称取化合物 I 、 n 的对照
品适量 , 分别用 甲醇配制成浓度为 0 . 0 25 , 0 . 05 ,
0
.
1
,
0
.
12 5
,
0
.
2 0
,
0
.
2 5 m g
·
m L
一 ’ 的单一对照品溶
液 。 分别取上述对照品溶液 20 林L , 注人液相色谱
仪 。 结果表明化合物 I 、 1 的进样量 ( X , 林g ) 均在
0
.
5 一 .5 0 林g 范围内 ,与峰面积 ( )Y 呈现良好的线性
关系 。 回归方程分别为 :
Y = 2
.
9 0 5 x 10 3X 一 6 2
.
34 r = 0
.
9 9 9 9
Y = 2
.
18 4 x 1O
3
X 一 15
.
2 9
r = 0
.
9 9 9 9
4
.
2 精密度试验 取化合物 I 、 1 的对照品适量 ,
分别制成浓度为 0 . 05 m g · m L 一 ’ 的单一对照品 甲醇
溶液 ,连续进样 6 次 ,测定峰面积 ,化合物 I 、 1 峰面
积的 R SD ( n = 6 )值分别为 0 . 7 0% 和 0 . 5 2% 。
4
.
3 重复性试验 取干燥的千里香叶的混合均匀
粉末 6 份 ,按 “ 3 . 2 ” 项下方法操作 ,制得 6 份溶液 ,
注人色谱仪测定含量 。 结果样品中化合物 I 、 1 含
量平均值 ( n 二 6) 分别为 1 , 61 % 和 1 . 30 % ; R s D 分
别为 1 . 3% 和 0 . 95 % 。
4
.
4 稳定性试验 供试品溶液在 0 一 12 h 内每隔 2
h 进样 1 次 , 测定峰面积 ,计算化合物 I 、 n 峰面积
的 R S D 分别为 0 . 51 % 和 0 . 54 % 。
4
.
5 加样回收率试验 取已知含量 (化合物 I 、 1
含量分别为 1 . 61 % 和 1 . 30 % ) 的千 里香 叶粉末 6
份 , 每份约 0 . 5 9 , 分别加人化合物 I 对 照 品 8 . 0
m g北合物 n 对照 品 6 . 5 m g , 按 “ 3 . 2 ” 项下方法操
作 , 制得 6 份供试溶液 , 分别注人色谱仪测定含量 ,
计算回收率 。 结果化合物 I 、 n 平均 回收率 ( n = 6)
分别为 10 2 . 8% ( R SD 为 ] . 0 % )和 9 9 4% ( R S D 为
1
.
4% )
。
5 含量测定
分别精密吸取按 “ 3 ” 项下方法制备的对照品溶
液和供试品溶液各 20 林L , 注人高效液相色谱仪 , 记
录色谱图 ,按外标法以峰面积计算样品中化合物 I 、
n 的含量 。 结果 3 批千里香叶样品中化合物 I 的含
量分别为 1 . 58 % , 1 . 57 % , 1 . 59 % ;化合物 1 的含量
分别为 1 . 2 9% , 1 . 2 8% , 1 . 3 0% 。
图 1 化合物 ]
F ig 1 H P L C e
、
n 对照品 ( A )及样品 ( )B 色谱图
h or m a l o g r a m s
o
f 此 fe er n c e s u b s t a n e e s o f e o n i p o u n d
( A )
a n d
s a n l p l
e
( B )
6 讨论
6
.
1 测定波长的选择 紫外光谱图显示化合物 I 、
fl 皆在 3 37 n m 附近有最大吸收 , 故选定 3 37 n m 为
测定波长 。
6
.
2 流动相选择 本文考察了不 同比例的甲醇 -
水和乙睛 一 水为流动相时对分离效果的影响 。 结果
选用甲醇 一 水 ( 5 8 : 4 2 )作为流动相 ,化合物 I 、 n 有
很好的分离效果 ,对照 品和样品分离的色谱图参见
图 l 。
6
.
3 本文考察了以水 、 甲醇 、 乙醇和氯仿为提取溶
剂的提取效果 ,结果以甲醇的提取率最高 ,水的提取
率最低 ;通过对甲醇室温冷浸 24 h 、 回流提取 l h 、 超
声提取 l h 的提取率的比较 ,发现 回流提取率最高 ;
而 回流提取 3 次和 4 次的提取率基本一致 , 因此选
择回流提取 3 次 。 另外还参考文献 「4 ] , 最终确定
每次加人甲醇 巧 m L 回流提取 l h , 共 3 次 , 即可使
提取率达到最高 。
1 3 2 6药物分析杂志 h C inJ Pha r m A na l 2 00 8 , 2 8 ( 1 0 )
6
.
4 小结 本测定方法 可以准确 、便捷地测定千里 3
香叶中黄酮类成分 , 化合物 I 、 n 能达到基线分离 ,
重复性及回收率较好 ,结果可靠 。
5
参考文献
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2 0 0 2
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( 本文于 2 0 0 7 年 9 月 2 6 口收到 )
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药物性损害与安全用药学术会议
一神经精神疾病用药安全与药源性神经精神疾病防治
研讨会征文通知
药物的严重不 良反应 、误用 、 滥用 、过量中毒以及问题药品导致机体损害已成为公共卫生的严重 问题 ,
引起人们广泛关注 。 为此 , 《药物不 良反应杂志》社推 出系列的 “ 药物性损害与安全用 药学术会议 ” , 以利
于提高临床安全用 药水平和防治 药物性损 害事件 。 该 学术会议将每年召开一次 ,每次主题不 同 。 2 009 年
4 月在北京召开第一次会议 , 主题为 “ 神经精神疾病用药安全与药源性神经精神疾病防治 ” , 由中国医师协
会神经内科 医师分会 、 中国毒理 学会药物毒理与安全性评价专业委员会 、 中国 医院协会药事管理专业委员
会和药物不 良反应杂志社共同 召开 。 届时将邀请 医学、 药学 、 流行病学等专业的知 名专 家作专题报告 , 并
进行学术交流和研讨 。 现 面向全 国临床 医药卫生专业人员 , 医药研究工作者 、 药品监测管理及相关领域人
员征文 , 欢迎踊跃投稿 。
一 、征文要求
( l) 论文未在公开发行期刊上发表或全国性学术会议上交流 , 文责自负 ;
( 2) 综述文章不超过 50 0 字 ,研究论文不超过 30 0 字 , 并附 20 0 一 40 0 字中英文摘要 ;
( 3) 论文用 电子邮件传递并用 A 4 纸打印邮寄 ,请注明作者姓名 、 职称 、 单位 、 科室 、 联 系电话 、 E 一 。 ia
等 。 投稿 时请在稿件上注明 ” 会议征文 ” 字样 。 来稿 一律不 退 , 自留底稿 。 ( 4) 征文截止 日期 : 20 09 年 2
月 2 8 日
二 、 其他事宜
( l) 来稿 由医学 、 药学专家组成的评审组进行审评 ,优秀论文将在《药物不 良反应杂志》发表 。
( 2) 参加会议者 ,将发给继续 医学教育 I类学分及证书 。
( 3) 会议具体 日期和地点另行通知 。
三 、联系方式与联系人
地址 : 北京市宣武区长椿街 45 号 , 药物不 良反应杂志社 ;邮编 : 10 05 3
电话 : ( 0 10 ) 8 3 1 9 8 2 4 6 :传真 : ( 0 10 ) 8 3 15 6 0 4 9 : E 一 m a i l : e a d rj @ s i n a . e o m
联系人 : 吴瑞芳 、 周慧芳 、耿蕊