全 文 ：101※基础研究 食品科学 2008, Vol. 29, No. 05
瓯柑多糖的提取及其对活性氧
自由基的清除作用
吴建章1，叶 辉2,*，向 铮1，杨小凤1
(1.温州医学院药学院，浙江 温州 325035；2.温州医学生物化学院教研室，浙江 温州 325035)
　　　　　
摘 要：目的：研究瓯柑多糖的提取及其对活性氧自由基的清除作用。方法：依次用热水回流提取、乙醇沉淀、
Sevag法除蛋白制得瓯柑粗多糖CSPS (Citrus Suavissima polysaccharide)。用苯酚-硫酸法测其糖含量，红外光谱等
进行多糖特征分析，用紫外-可见分光光度法测定了多糖对O2·和·OH的清除率。结论：瓯柑多糖得率为1.55%，
多糖中糖含量为52.07%。红外光谱分析发现具有多糖的特征吸收峰。粗多糖对O2·和·OH的IC50分别为880
μg/ml和1280μg/ml。结论：用水提、醇沉、Sevag法除蛋白得到较高含量的CSPS，CSPS对O2·和·OH均有
一定的清除作用，其活性大小在一定范围内与用量呈正相关。
关键词：瓯柑；多糖；·O H；O2·
Extraction of C trus suavissima Poly accharide and Its Effect of Scanvenging Oxygen Radical
WU Jian-zhang1，YE Hui2,*，XIANG Zheng1，YANG Xiao-feng1
(1.School of Pharmacy, Wenzhou Medical College, Wenzhou 325035, China；
2.Faculty of Biochemistry, Wenzhou Medical College, Wenzhou 325035, China)
Abstract ：Objective：To extract polysaccharide from Citrus suavissi a nd analyze its effect of cleaning oxygen radical.
Method: The polysaccharide was extracted with hot water at 100 ℃ and precipita ed by alcohol. The protein in the extractions
was removed by the sevage method. Test were also done with the extraction material, including the determination of sugar, the
analysis of polysaccharide behaviour, and the determination of the activities of cleaning oxygen racial. Result : the extraction ratio
was 1.55%, and its total sugar content was 52.07 %. IR showed the absorption peak of sugar. In the determination of the activities
of cleaning O2 ·and ·OH, its IC50 was 880μg/ml and 1280 μg/ml respectively. Conclusion: CSPS has the effect of cleaning
oxygen radical. Its activity is positively relative with dosage in certain range.
Key words：Citrus suavissima；poly accharide；hyd oxyl free radical；superoxide anion free radical
中图分类号：R284.2；R285.5 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2008)05-00101-03
收稿日期：2007-06-11
基金项目：温州医学院校科研基金项目(XNK07039)；温州市科技局项目(Y2004A020)；
贵州省优秀科技教育人才省长基金项目(黔科教办200304)
作者简介：吴建章(1976-)，男，讲师，硕士，主要从事天然药物化学的研究。E-mail：wujianzhang6@163.com
*通讯作者：叶辉(1965-)，男，讲师，硕士，主要从事天然药物化学及分子药理学研究。E-mail：yehuichina@163.com
芸香科柑桔属柑亚属瓯柑是温州地区的土特产，为
浙南名果之一。瓯柑清甜汁多，略带苦味，营养价值
较高，并具有祛热生津，化痰止咳，清凉解毒等特殊
之医药效能。在温州民间素有“端午瓯柑似羚羊”之
说，并广泛流传瓯柑可退烧、治咽喉炎、头痛等热性
疾病[1]。动物实验证明：瓯柑具有降压、降温、耐缺
氧和增加冠脉流量等作用[2]。据食疗初步临床观察，瓯
柑对原发性高血压病人的脑血流循环状况有明显的改善
[2]。文献检索显示，对瓯柑多糖的提取及抗氧化活性等
测定研究尚未见报道。本实验主要研究提取瓯柑粗多
糖，测定糖含量，用紫外-可见分光光度法测定多糖对
O2·和·O H的清除作用。
1 材料与分析
1.1材料与试剂
瓯柑购自温州市茶山镇。
葡萄糖、苯酚、浓硫酸、无水乙醇、正丁醇、
氯仿、邻苯三酚、水杨酸、过氧化氢、硫酸亚铁(分
－
－
－
－
－
－
－
2008, Vol. 29, No. 05 食品科学 ※基础研究102
析纯) 上海试剂总厂；实验用水为双蒸水。
1.2仪器与设备
UV-7502PC紫外分光光度计 中国上海欣茂有限公
司；R-200型旋转蒸发仪 德国Buchi公司；AL电子天
平 梅特勒-托利多仪器有限公司；TDL-40B型离心机
上海安亭科学仪器厂；FD-1C冷冻干燥机 北京得天佑
科技发展有限公司；670FT-IR型智能付里叶红外光谱仪
美国Nicolet公司；KQ-500DE型数控超声仪 昆山超声
仪器厂。
1.3方法
1.3.1提取分离CSPS
取瓯柑果肉粉碎，用石油醚浸提出脂溶性成分弃
去。去脂部分果肉用超声波提取20min，过滤收集滤
液。滤渣中加入约为其质量20倍的水，煮沸回流提取
3h，过滤收集滤液。再在滤渣中重复加水、回流提取、
过滤、收集滤液的步骤，直到滤液用α-奈酚-浓硫酸
试剂检测无明显阳性反应时为止。合并以上几次滤液浓
缩到小体积，加入9 5 %的酒精溶液使乙醇浓度达到
80%，静置半天，4000r/min离心15min收集沉淀。沉
淀用适量水溶解，用体积比为5:1的氯仿:正丁醇溶液反
复除蛋白，直到糖溶液在260nm和280nm下紫外扫描无
明显吸收峰，浓缩糖溶液，冷冻干燥24h，得白色的
粗多糖。
1.3.2CSPS含量测定
总糖含量测定采用苯酚-硫酸法[3]。
1.3.3CSPS特征分析
在400～4000cm-1波数范围内进行多糖的红外光谱扫描。
1.3.4CSPS清除超氧阴离子自由基O2·活性
O2·自由基产生体系模型参考文献[4]，采用邻苯
三酚系统产生O2·。实验中以0.1mmol/L邻苯三酚在
pH8.2的50mmol/L的Tris-HCl缓冲溶液作为测定体系。
邻苯三酚在弱碱性环境中自身氧化分解产生O2·，导
致反应液在325nm的吸光度在反应开始后5min之内随时
间变化而线性增大。在该时间内，测定含被测物反应
液的吸光度随时间的变化率,并与空白液比较便可得出被
测物抑制O2·积累的作用能力。抑制率计算式为：
FＯ－FＸ
抑制率(%)= —————×100
FＯ
式中，FＯ和FＸ分别表示空白溶液和被测液的吸光
度随时间的变化率。
结果以抑制率达50%时，每毫升反应液中所需的瓯
柑多糖量(IC50)表示。
1.3.5CSPS清除·OH自由基活性
·OH产生体系模型的建立参考文献[5]。H2O2与
Fe2+混合后产生·OH，反应体系中加入水杨酸，能有
效地捕捉OH·，并产生有色产物在510nm处有强吸收。
在体系中加入具有清除·OH功能的被测物，从而使有色
产物的生成量减少导致吸光度减小。其清除率计算式为：
AＯ－Ax
清除率(%)=——————×100
AＯ
式中，AＯ和Ax分别表示空白溶液和被测液的吸光度。
结果以抑制率达50%时，每毫升反应液中所需的瓯
柑多糖量(IC50)表示。
2 结果与分析
2.1特征分析
α-奈酚-浓硫酸试剂检测，有明显的紫红色环，
为糖的阳性反应。其水溶液在紫外光谱中已无明显的
280nm的蛋白质特征吸收。其红外光谱中在3304、
2930、1623、1428、1022cm-1等处有多糖的特征吸收。
图1 瓯柑多糖的红外光谱图
Fig.1 IR spectrum of CSPS
波数(cm-1)
4000350030002500200015001000500
透
过
率
(
%
)
101.5
100.5
99.5
98.5
97.5
96.5
95.5
94.5
93.5 3
3
0
4
.
2
0
1
6
3
6
.
0
1
1
6
2
3
.
0
5
1
0
7
4
.
1
9
1
0
2
2
.
3
3
7
4
5
.
7
4
6
8
0
.
9
11
4
2
8
.
5
7
2.2含量测定
三批瓯柑果肉提取分离得到粗多糖其平均得率为
1.50%。苯酚-硫酸法测定粗多糖中糖含量为51.03%，
按生药计多糖得率为0.76%。
2.3对O2·和·O H的清除率
CSPS水溶液对O2·和·OH的清除率分别见图1
和图2。由图1和2可知，CSPS对O2·和·OH都有
－
－
－
－
－
－
－
－
多糖浓度(μg/ml)
0 500 1000 1500
O2
·
的
清
除
率
(
%
) 70
60
50
40
30
20
10
0
图2 瓯柑多糖清除 O2·能力
Fig.2 Capacity of CSPS for scavenging O2·
－
－
－
103※基础研究 食品科学 2008, Vol. 29, No. 05
一定的清除作用，其活性大小与用量呈正相关，一定
范围内几乎呈线性关系。瓯柑多糖对O2·的IC50为880
μg/ml，对O2·的IC50为1280μg/ml，其中对O2·的
清除作用比·O H的强。
3 讨 论
本研究得到的是较高糖含量的瓯柑粗多糖，为了进
一步研究多糖的活性，还有待于用色谱等方法对CSPS
进一步的纯化。CSPS对超氧阴离子自由基和羟自由基
均有一定的清除作用，这与瓯柑有很好的保健作用是相
关的，但还有待于进一步的进行体内活性的测定。本
研究将为瓯柑的进一步合理开发提供理论依据。
参考文献：
[1] 缪士毅. 端午瓯柑胜羚羊[J]. 中国土特产, 1995(6): 29.
[2] 张新生, 董素心, 王笑蓉, 等. 瓯柑食疗对原发性高血压病的临床疗
效观察[J]. 中国中西医结合杂志, 1993, 13(4): 22.
[3] 季宇彬, 王帅帅, 汲晨锋. 龙葵多糖含量测定及组分分析[J]. 分析化
学, 2006, 34(11): 1665.
[4] 邹国林, 桂兴芬, 钟晓凌, 等. 一种SOD的测活方法-邻苯三酚自氧
化法的改进[J]. 生物化学与生物物理进展, 1986 (4): 71.
[5] 贾之慎. 比色法测定Fenton反应的羟自由基[J]. 生物化学与生物物
理进展, 1996, 23(2): 184-186.
－
－－
图3 瓯柑多糖清除·OH能力
Fig.3 Capacity of CSPS for scavenging·OH
多糖浓度(μg/ml)
·
O
H的
清
除
率
(
%
) 70
60
50
40
30
20
10
0
0 500 1000 1500