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九里香叶总黄酮提取工艺的研究



全 文 :广西轻工业
GUANGXI JOURNAL OF LIGHT INDUSTRY
2009年 1月
第 1期(总第 122期) 食品与生物
【作者简介】吴龙火(1980-),男,福建漳州人,在读博士,研究方向:生物活性物质筛选及临床应用。
九里香(M.Exotica(L.))又称千里香、满山香、过山香、千只
眼等,为芸香科九里香属植物,以根和叶入药,性辛、苦、微寒,
具有麻醉、活络等功效。早期曾有报道,九里香在临床上可用于
局部麻醉[1]、抗生育作用[2]、治疗流行性乙型脑炎[3]、破伤风[4]、急
慢性肾炎[5]等。近年来,以九里香为主药的三九胃肽在临床上广
泛应用于治疗慢性胃炎和胃十二指肠溃疡等。
随着生物技术的迅猛发展,国内外对九里香的研究也不断
的深入。现在药理学研究证明,九里香具有抗生育[2]、抗菌消炎
杀虫作用[6]、抗甲状腺[7]、降血糖[8]、麻醉镇静[9]以及增强免疫功能
等作用。黄酮类化合物是一大类天然产物,广泛存在于植物界,
是九里香中重要的有效成分,但目前关于九里香中总黄酮提取
工艺学研究方面仍然未见有报道。本文就对这一方面做一简要
汇报。
1 材料
供试九里香叶采自福建漳州民间,经华侨大学分子药物研
究所张景红教授鉴定为九里香,自然阴干,粉碎过 40目筛。芦丁
对照品购自成都曼思特生物科技有限公司。其他各种试剂均为
分析纯。752PC紫外分光光度计购自上海光谱仪器有限公司。
2 方法与结果
2.1 标准曲线的制备[9]
精密称取芦丁对照品 20mg,置于 100mL量瓶中,加 50 %
甲醇溶解至刻度,摇匀即得对照品溶液。然后,分别精密吸取
1. 0、2. 0、3. 0、4. 0 和 5. 0 mL对照品溶液置于 10 mL比色管
中,各加 50 %甲醇定容至 5 mL,加 5 %NaNO2溶液 0.3 mL,摇
匀放置 6min,再加 10% Al (NO3) 3溶液 0.3mL,摇匀,再放置
6min,加 4%NaOH溶液 4mL,摇匀放置 15min,在 510nm波长
处,测定吸光度值,以同法配制空白对照,得回归方程:
C= 0.1047A-0.0029 (R2=0.996)
2.2 样品含量测定
九里香粉末(过 40 目筛)1g进行提取,粗提液定容为
10mL。精密量取提取液 1mL,置于 10mL容量瓶中按标准曲线
的制备方法测定其吸光度,通过标准曲线回归方程,计算可得
其含量。
2.3 单因素提取工艺研究
2.3.1 乙醇浓度对提取效率的影响
试验条件:九里香粉末(过 40目筛)1g,温度为 80℃,料液
比为 1:10,每次回流提取时间为 2h,三次。乙醇浓度分别为
50%、60%、70%、80%、90%。均为三个重复。结果表明,70%
的乙醇提取效率最高。见表 1。
表 1 乙醇浓度对提取效率的影响
*为三次重复的平均值
2.3.2 温度对提取效率的影响
试验条件:九里香粉末(过 40目筛)1g,乙醇浓度为 70%,
料液比为 1:10,每次回流提取时间为 2h,三次。温度分别为
50℃、60℃、70℃、80℃、90℃。均为三个重复。结果表明,温度
在 80℃时,黄酮的提取效率最高。见表 2。
表 2 温度对提取效率的影响
*为三次重复的平均值
2.3.3 料液比对提取效率的影响
试验条件:九里香粉末(过 40目筛)1g,乙醇浓度为 70%,
温度为 80℃,每次回流提取时间为 2h,三次。料液比分别为 1:
6、1:8、1:10、1:12、1:14。均为三个重复。结果表明,料液比为
1:14时,黄酮的提取效率最高。见表 3。
表 3 料液比对提取效率的影响
*为三次重复的平均值
2.3.4 提取时间对提取效率的影响
试验条件:九里香粉末(过 40目筛)1g,乙醇浓度为 70%,
温度为 80℃,料液比为 1:10,回流提取三次。提取时间分别为
1h、1.5h、2h、2.5h、3h。均为三个重复。结果表明,时间为 2h的
提取效率最高。见表 4。
九里香叶总黄酮提取工艺的研究
吴龙火,王 晓,许瑞安
(华侨大学分子药物学研究所,福建 泉州 362021)
【摘 要】 研究了影响总黄酮提取的单因素条件及利用 L9(34)正交试验设计确定的最佳提取条件。结果表明,以 1:10的料
液比的 70%乙醇在 80℃时提取 2h为最佳提取条件。
【关键词】 九里香;总黄酮;正交试验;提取工艺;含量测定
【中图分类号】 TS202 【文献标识码】 A 【文章编号】 1003- 2673(2009)01-03-02
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(上接第 2页)
品质和风味影响显著,混合胶对果冻产品的影响较小。最佳配
方为 A2B2C3D1,即混合果汁含量 30%,甜味剂 5.3%,柠檬酸浓
度 0.03%,混合胶含量 0.6%。
3 结论
通过对芦荟番石榴蜂蜜果冻的工艺研究,得出如下结论:
(1)芦荟在 95℃条件下热烫 3min,冷却后打浆 2min,在
打浆时加入 0.2%的异抗坏血酸护色效果较好。
(2)番石榴汁按 1:1的比例加水进行打浆 2min,打浆时
添加 0.2%的异抗坏血酸护色,制得的番石榴汁风味较好。
(3)果冻粉、琼脂粉、海藻酸钠的比例为 1:2:1,添加量为
0.6%,产品的胶凝性效果较好。
(4)最佳配比为混合果汁 30%、甜味剂 5.3%、柠檬酸
0.03%、混和胶 0.6%。
参考文献
[1]倪同汉.神奇的芦荟(上)[J].中国野生植物,1989,(1):20.
[2]李洋,陆燕.芦荟药用的最新研究进展[J].中国药物应用与监测,2005,
(5):27- 29.
[3]张连富,吉宏武.药食兼用资源与生物活性成分[M].北京:化学工业版
社,2005,(7):146- 147.
[4]董林.神奇的植物—芦荟[M].北京:蓝天出版社,1999(6):11- 25.
[5]薛文通,宋瑞霞,陈湘宁.蜂蜜粉喷雾干燥工艺参数的研究[J].食品技
术,2004,(5):22- 23.
表 4 提取时间对提取效率的影响
2.4 正交试验
为了确定在提取过程中各因素的影响大小,本文对各单因
素的浓度(A)、料液比(B)、温度(C)、提取时间(D)四因素进行正交
试验和方差分析。分析结果表明,乙醇浓度对九里香黄酮的提
取效率影响最大,料液比次之,两者均达到显著水平(表 5和表
6)(误差 E在无空白对照时可以最小为对照)。其最佳的提取条
件为:料液比为 1:10、70%乙醇在 90℃提取 2.5h的提取率最
高。一般来讲,增加料液比有利于植物有效成分的溶出,但料液
比过大不仅增加试剂的消耗且回收难度大,从而增加了费用。
温度过高、时间过长都会导致提取出来的黄酮被氧化成醌类物
质,且温度和提取时间均未达到显著水平。由此笔者认为可拟
用的提取条件为料液比为 1:10、70%乙醇在 80℃提取 2h。
表 5 正交试验因素水平表
表 6 正交试验结果
表 7 方差分析表
F0.05(2,2)= 19.000 F0.01(2,2)= 99.000
2.5 验证正交结果试验
采用的试验条件有两种:第一种比为 1:10、70%乙醇在
90℃提取 2.5h;第二种为料液比为 1:10、70%乙醇在 80℃提
取 2h。两种均重复三次。结果表明,第一种的提取方法比正交
试验中的任何一种的提取率都要高。第二种的提取条件与第一
种的提取条件差别不是很大(见表 8),分别为 1.161%和
1.123%。为节省成本,笔者认为可采用第二种提取条件作为下
一步的试验的方案。
表 8 两种条件的提取效率的比较
*为三次重复的平均值
3 讨论
九里香作为一种传统的中药材,具有广泛的药理学作用,
目前已被 2005版的《中国药典》所收载。本试验主要在考查提
取黄酮类化合物的最佳提取工艺,即 1:10、70%乙醇在 90℃提
取 2.5h,但为节省成本可拟用 1:10、70%乙醇在 80℃提取 2h
为试验方案,为下一步试验分离有效成分单体及药理学试验奠
定了基础。
参考文献
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[6]Srivastava,Santosh K. et al. J. Indian Chem[J]. Soc.1993,70(7):665- 9.
[7]Khosla, R atan L.Indian J. Pharm.1970,32(3):65- 66.
[8]Khan,Beena A. et al. Indian J. Biochem[J]. Biophys.1995,32(2):6- 8.
[9]中华人民共和国药典.2005 版(一部)[M].北京:化学工业出版社,
2005.
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