全 文 ：收稿日期:2007-09-06;　修订日期:2008-09-24
作者简介:王春怡(1979-),女(汉族),安徽合肥人 ,现任广州中医药大学
中药学院在读博士研究生 , 硕士学位 , 主要从事中药新药研究与开发
工作.
＊通讯作者简介:李卫民(1954-), 男(汉族),河北磁县人 , 现任广州中医
药大学中药学院教授 ,博士学位 ,主要从事中药新药研究与开发工作.
不同来源的粉葛中总黄酮和葛根素的含量测定
王春怡 , 杨方明 , 李卫民＊ ,高　英
(广州中医药大学中药学院 ,广东 广州 　510006)
摘要:目的 考察不同来源粉葛中总黄酮 、葛根素的含量。方法 采用紫外分光光度法(UV)测定总黄酮含量;采用高效
液相色谱法(HPLC)测定葛根素含量 , kromasilC18色谱柱(4.6 mm×250 nm, 5μm), 流动相为甲醇 -水(33:67), 流速为
1.0ml· min-1 ,柱温 30℃, 检测波长为 250 nm。结果 总黄酮含量为 0.53% ～ 1.03%,回收率为 99.69%, RSD<2% (n
= 6);葛根素含量为 0.21% ～ 0.49%, 回收率为 96.11%, RSD<2% (n=6)。结论 不同来源的粉葛药材中总黄酮和葛
根素含量间变异较大 , 其中广东产粉葛 , 其总黄酮和葛根素含量均较高 ,平均质量优于广西产粉葛。
关键词:粉葛;　总黄酮;　葛根素;　高效液相色谱
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2008)11-2772-02
AssayingoftheContentofTotalFlavonoidsandPuserarininDiferentRegionsRadixPu-
erariaethomsoni
WANGChun-yi, YANGFang-ming, LIWei-min＊ , GAOYing
(GuangzhouUniversityofTCM, Guangzhou, 510006, China)
Abstract:ObjectiveTodeterminethecontentoftotalflavonoidsandpuerarininRadixPuerariaethomsoniofdifferentorigina-
tions.MethodsThecontentoftotalflavonoidswasdeterminedbyultravioletspectrophotometry(UV).Thecontentofpuerarin
wasdeterminedbyHPLC, theanalysiswasperformedonakromasilC18 column(4.6mm×250mm, 5μm)withmethanol-wa-
ter(33:67)asmobilephaseataflowrateof1.0ml· min-1 , andatacolumntemperatureof30℃.Thedetectionofwavelength
was250 nm.ResultsThecontentoftotalflavonoidswas0.53 ～ 1.03%, andrecoveryratewas99.69 %, RSD<2%(n=6).
Thecontentofpuerarinwas0.21% ～ 049%, andrecoveryratewas99.11%, RSD<2%(n=6).ConclusionThecontentof
totalflavonoidsandpuerarininRadixPuerariaethomsonihasgreatchangesbetweenthediferentoriginations, thecontentsofto-
talflavonoidsandpuerarininGuangdongRadixPuerariaethomsoniiarehigher, andtheaveragequalityisbetterthanGuangxiRa-
dixPuerariaethomsoni.
Keywords:RadixPuerariaethomsonii;　Totalflavonoids;　Puerarin;　HPLC;　Assaying
　　粉葛为豆科植物甘葛藤 PuerariathomsoniBenth的干燥根 ,
自古与野葛同作中药葛根用 , 具有解肌退热 , 生津 , 透疹 , 升阳止
泻之功效 [ 1] , 临床应用广泛。 2005年版《中国药典》首次将粉葛
作为分列中药材记载。粉葛中的主要生物活性成分有葛根素等
异黄酮类化合物 [ 2] , 具有降血压 、扩张冠状动脉等多种生物活
性 , 同时粉葛又富含淀粉 ,因此具有较高的医用和食用价值 ,现已
开发出粉葛淀粉系列多种保健食品。目前 ,粉葛的栽培面积不断
扩大 , 并出现了许多栽培品种 , 因此不同来源药材之间有效生物
活性成分的含量会有较显著的差异 ,从而影响药材质量。 广东 、
广西为粉葛药材的主要产地 , 药源丰富 , 本文采用比色法及高效
液相色谱法对广东 、广西所产的不同来源的粉葛中总黄酮及葛根
素的含量进行了比较 ,为粉葛药材质量控制提供实验依据。
1　仪器与材料
1.1 　仪器 P680高效液相色谱仪(戴安公司);satoriusBS110S
精密天平;unicuv-2100紫外分光光度计(尤尼柯上海仪器有限
公司)。
1.2　药材 粉葛 , 产地:广东 、广西 , 经广州中医药大学中药鉴定
教研室鉴定 , 均为豆科植物甘葛藤的干燥根。 (来源见表 1)
1.3 　试药 葛根素标准品(中国药品生物碱制品检定所 , 批号
110752-200511)。甲醇(色谱纯 , 德国 Merck公司), 乙醇(分析
纯 , 天津大茂化学试剂厂), 水为高纯水。
2　方法与结果
2.1 　UV法测定不同来源粉葛中总黄酮的含量
2.1.1　溶液的制备
对照品溶液的制备:精密称取 80℃干燥至恒重的葛根素对
照品 5.0 mg,置 25 ml容量瓶中 ,用 95%乙醇溶解并稀释至刻度。
供试品溶液的制备:取不同来源粉葛粉末(过三号筛)约 1.0
g,精密称定 , 置锥形瓶中 ,精密加入 30%乙醇 100 ml, 称定重量 ,
加热回流 30 min,放冷 , 再称定重量 , 用 30%乙醇补足减失的重
量 , 摇匀 ,滤过 , 取续滤液 1ml置 10 ml容量瓶中 , 用 30%乙醇定
容 , 即得。
检测波长的选择:取对照品溶液 1.0 ml置 10 ml的容量瓶
中 , 加蒸馏水至刻度 , 摇匀 ,在 200 ～ 800 nm波长范围内测定葛根
素的紫外吸收光谱 ,结果显示在 250 nm处有最大吸收。另取供
试品溶液在 200 ～ 800 nm波长范围内测定紫外吸收光谱 ,结果也
显示 250 nm处有最大吸收 , 所以选择 250 nm为检测波长。
2.1.2　线性关系考察 精密量取对照品溶液 0.2, 0.4, 0.6, 0.8,
1.0 ml, 分别置 10 ml容量瓶中 , 并各加 95%乙醇至 1 ml,再加蒸
馏水至 10ml, 摇匀 ,以 1.0ml95%的乙醇加蒸馏水至 10ml的溶
液为空白对照 ,于 250 nm测定吸光度。以葛根素含量为横坐标
(X),吸光度为纵坐标(Y),绘制标准曲线 , 得回归方程 Y=75.45
X-0.01, r=0.999 9。结果显示 , 葛根素对照品在 0.04 ～ 0.2 mg
内线性关系良好。
2.1.3　精密度试验 取同一浓度的葛根素对照品溶液 , 重复测
定 5次 , 吸光度平均值为 0.592, RSD为 0.09%,表明仪器精密度
良好。
2.1.4　稳定性试验 取同一样品溶液 , 在 0, 2, 4, 12, 24 h测定 ,
吸光度平均值为 0.690, RSD为 0.22%, 表明本品 24 h内具有良
好的稳定性。
2.1.5　重复性试验 取同一批次的粉葛药材 6份 , 按供试品溶液
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时珍国医国药 2008年第 19卷第 11期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008VOL.19NO.11　
制备方法制成样品测定 ,测得样品葛根素含量平均值为 0.93%,
RSD为 0.49%, 表明本法具有良好的重复性。
2.1.6　准确度试验 称取 6份已知葛根素含量的粉葛药材粉末
1.00 g,加入对照品约 1.0 mg, 按供试品溶液制备方法制成样品 ,
测得平均回收率为 99.69%, RSD为 1.8%, 表明总黄酮回收率
良好。
2.1.7　样品总黄酮含量测定 取各来源的粉葛药材 3份 , 精密称
定 1.0 g,按供试品溶液制备方法制成样品 , 依法测定。结果表
明 , 广州市清平药材市场所售广东产粉葛总黄酮含量均较高 ,可
达 1.03%, 平均质量优于广西产粉葛。见表 1。
2.2 　 HPLC法测定不同来源粉葛中葛根素的含量
2.2.1　色谱条件 色谱柱为 kromasilC18色谱柱(4.6 mm×250mm, 5 μm);柱温:30℃;流动相:甲醇 -水 (33:67);检测波长
250nm;流速:1.0 ml· min-1;理论板数按葛根素计算不低于
4 000。见图 1, 2。
图 1　葛根素对照品溶液 HPLC色谱图
图 2　粉葛药材溶液 HPLC色谱图
2.2.2　溶液的制备 对照品溶液的制备:精密称取葛根素对照品
5.0 mg,置 25ml容量瓶中 , 加 30%乙醇至刻度 , 摇匀 ,即得 0.2
mg/ml对照品储备液。
供试品溶液的制备:取不同来源粉葛粉末(过 3号筛)约 0.8
g, 精密称定 ,置锥形瓶中 , 精密加入 30%乙醇 50 ml, 称定重量 ,
加热回流 30min,放冷 , 再称定重量 , 用 30%乙醇补足减失的重
量 , 摇匀 ,滤过 , 取续滤液 ,过 0.45μm微孔滤膜 ,即得。
2.2.3　线性关系考察 精密量取对照品溶液 0.5, 1.0, 1.5, 2.0,
2.5, 3.0, 4.0 ml,置 10ml容量瓶中 , 加 30%乙醇定容 , 摇匀 ,分别
吸取上述各浓度对照品溶液 20μl, 依次注入液相色谱仪 , 按上述
色谱条件测定 , 以葛根素含量为横坐标(X), 峰面积为纵坐标
(Y), 绘制标准曲线 , 得回归方程:Y=1464.5X-0.678 6, r=
0.999 9。结果表明葛根素在 0.2 ～ 1.6μg内呈良好的线性关系。
2.2.4　精密度试验 精密吸取同一对照品溶液 20μl,重复进样 5
次 , 测定峰面积平均值为 57.69, RSD为 0.61%, 表明仪器精密度
良好。
2.2.5　稳定性试验 精密吸取同一样品溶液 20 μl, 分别于 0, 2,
4, 24, 36 h测定 , 结果显示各时段峰面积平均值为 57.07, RSD为
1.40%,表明本品 36h内稳定性良好。
2.2.6　重复性试验 取同一来源的粉葛 6份 ,分别独立按供试品
溶液制备方法制成样品溶液 , 在上述色谱条件下测定 , 测得的平
均含量为 0.23%, RSD为 1.40%,表明本法重复性良好。
2.2.7　准确度试验 精密称取 6份已知葛根素含量的同一样品
粉末约 0.8g,并加入一定量的对照品 , 按供试品溶液制备方法制
成样品溶液 ,精密吸取 20μl, 在上述色谱条件下测定 , 计算回收
率。结果显示平均回收率为 96.11%, RSD为 1.09%,表明葛根
素回收率良好。
2.2.8　样品含量测定 取不同来源的粉葛 , 精密称定 0.8g,按供
试品溶液制备的方法处理 , 在上述色谱条件下测定。结果显示 ,
广州市清平药材市场所售广东产粉葛 , 除个别不符合药典要求 ,
其余药材葛根素的含量均较高 ,可达 0.49%, 平均质量优于广西
产粉葛 。见表 1。
表 1　不同来源粉葛中总黄酮和葛根素含量测定结果
编
号 来源 产地
总黄酮平均
含量(%)
葛根素平均
含量(%)
1 广州市清平药材市场 A号 广东 0.84 0.36
2 广州市清平药材市场 B号 广东 0.66 0.26
3 广州市清平药材市场 C号 广东 0.99 0.41
4 广州市清平药材市场 D号 广东 1.03 0.49
5 广州市药店 广西 0.53 0.23
6 广州市大药房 广西 0.74 0.32
7 广西南宁市大药房 广西 0.66 0.21
　　n=3
3　讨论
文献报道了多种提取葛根总黄酮的方法 , 如索氏提取 、超声
提取和加热回流等 [ 3 ～ 5] , 本研究对不同提取方法及不同醇浓度提
取总黄酮进行比较 , 结果以 30%乙醇加热回流提取所得总黄酮
含量最高 ,故选用该法作为总黄酮的提取方法。
曾选用 2005版 《中国药典》规定的甲醇 -水(25:75)为流动
相 , 结果保留时间较长 , 可达 20min, 通过优化选择 , 以流动相甲
醇 -水(33:67)的分离效果较好 , 样品主峰达到良好的基线分
离 , 峰形良好 ,且保留时间大大缩短。经方法学考察 ,表明该方法
具有较好的精密度 、稳定性 、重现性和准确性 ,可用于粉葛药材的
质量控制。
上述 7种不同来源的粉葛药材中总黄酮和葛根素含量参差
不齐 , 但两者变化是同向的 , 其中广州市清平药材市场所售广东
产粉葛 , 其总黄酮和葛根素含量均较高 , 平均质量优于广西产
粉葛。
参考文献:
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