全 文 ：20() 5 年 4 月
第 20 卷 第 2 期
咸阳师范学院学报
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正交试验法研究藏药鬼箭锦鸡儿总黄酮含量
魏永生
(咸阳师范学院化学系 , 陕西 咸阳 71 2 0 0 )
摘 要 : 采 用正交试验设 计 , 以 总黄酮含量为考察指标 , 研究鬼箭锦鸡儿总黄酮最佳提取
方法 。 采 用分光光度法 , 以 芦丁 为对照物 , 测定总黄酮含量 。 结 果显示 , 藏药鬼箭锦鸡儿总黄酮平
均含童 5 . 3 2% (R SD = 1 . 5 2% , n = 5 ) 。
关键词 : 鬼箭饰鸡儿 ;总黄 酮 ;正交试验设计
中图分类号 : R 2 86 . 0 2 文献标识码 : A 文章编号 : 1 6 7 2一 2 9 14 ( 2 0 0 5 ) 0 2一 0 0 2 7一 0 3
鬼箭锦鸡 儿 `少贝笋讯 “ j ub at a (lP 汉1.) oP ir . 为豆
科 、 锦鸡儿属灌木 , 藏语译音 “ 作毛兴 ” 。 主要生长在
海拔 3《X刃一4 70 m 的阴坡 、 半阴坡 ,在青藏高原地 区
有广泛分布 ,是一种藏族民间用药 , 藏医用其干燥红
色木质茎部分作为药材 。 其味涩 、性寒 、 无毒 ;具有降
血脂 、 防治心血管疾病 、平血压 、 清热散肿 、 生肌止痛
等功效 川 。 在鬼箭锦鸡儿中含有黄酮类 、 生物碱 、 鞭
质 、皂贰 、 挥发油和糖类等化合物 , 其黄酮类化合物
主要为多种懈皮素糖贰 、 异鼠李素糖贰 、杨梅黄素糖
贰等〔’ , 2 ]。 鬼箭锦鸡儿中总黄酮 的含量及提取方法少
有文献报道 , 我们曾运用 H PCL 法测定了其 中所含
懈皮素 、 山奈酚 、异 鼠李素等三种黄酮贰元的含量 lso
为了更好地开发利用这一 自然资源 , 本文通过正交
试验 , 进一步研究了鬼箭锦鸡儿总黄酮的最佳提取
条件 , 同时给出了采用分光光度法测定的鬼箭锦鸡
J L总黄酮含量 , 可为这种藏药的开发利用提供尽可
能多的科学信息 。
1 仪器与药品
eP kr in 一 lE m e r 公 司 入一 17 型紫外 一可见分 光光
度计 。 对照品芦丁 ( 10 8 1一9 90 5) 购 自中国药品生物制
品检定所 ,其它试剂均为分析纯 。 鬼箭锦鸡儿采自海
拔 4 0( 刃m 以上的青藏高原地 区 , 由青海藏医药研究
所提供 , 青海师范大学生物系植物学教授李健民鉴
定 。 收集其干燥后的去皮茎部分作为供试药材 。
2 实验方法和结果
2
.
1 总黄酮含 t 的测定
2
.
1
.
1 沮明定 方法 : 采用 N a N O : 一 A I(N o 9 3一 N a o H 显色
体系吸光光度法测定总黄酮 的含量问 。
2
.
1
.
2 测 定波长的选择 : 取芦丁对照品溶液和鬼箭锦
鸡儿总黄酮提取液按前述测定方法显色后 , 在 4 0 -
60
n m 范围内扫描 , 发现两者均在 5 1o n m 处有吸收
峰 ,所以选择 s lo n m 作为检测波长 。 吸收光谱见图 1。
0 7
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图 1 吸收光讲圈
2
.
1
.
3 标准曲线的绘制 : 精密称取真空干燥至恒重的芦
丁对照品 10 D m g , 以 95 % 乙醇溶解 、定容 5m0 L 。 精密
吸取该溶液 1. 0 、 ZD 、 3 . 0 、 4 .0 、 SD 、 .o6 m L分别置于 2 5m L
容量瓶中 , 加 3%0 乙醇至 一2
.
s m L
, 加 5% N a N O : 溶液
.0 7m L
,摇匀后放置 s m i n ,加 10沁A I(N O 9 3溶液 o . 7m L ,
摇匀后放置 6 m i n ,加 10% N a 0 H 溶液 s m L ,再用 30%
乙醇定容 ,摇匀 , 放置 10 m in , 以相应试剂作空白 , 于
5 10 n m 处测定吸光度 。 应用最小二乘法 , 以浓度 C
(m岁m )L 与吸光度 A 进行线性拟合 , 得回归方程 A 二
14
.
34 C + 0
.
X() 7 7
, ; = 0
.
9 99 2
。 可见 , 在 0一 0 . 4 8 m以m L
浓度范围内线性关系 良好 。
收稿 日期 : 2 00 4 一 10一 1 8
作者简介 : 魏永 生 ( ,% 4一 ) , 男 , 咸阳 师范学院 化 学 系副 教授 , 主要 从事天 然 产物化学和计算 机 应 用化学的 研 究 、
咸阳师范学院学报 第 2 0卷
,且,`内J,ù
147298.23.5
2
.
1
.
4 加样 回收率试验 : 吸取 .0 3m L 锦鸡儿总黄酮提
取液 ,分别放 人 7 个 25 m L 容量瓶 中 , 加入一定量的
芦丁对照物溶液 ,按前述方法测其吸光度值 , 回收率
计算结果见表 1 。 通过对 回收率试验结果 的分析可
知 : 当标样添加量小于 60 % ,溶液浓度较稀 (吸光度
值在 .0 5 以内 )时 , 平均回收率 10 .2 5% , 实验结果较
为理想 。 随着标样添加量的增加 ,溶液较浓时 , 回收
率明显升高 ,这说明在试样浓度较大的情况下 , 干扰
严重 , 测定误差较太 。 总的来看 , 当标样增加量从
10%增加 10 %时 , 回收率逐渐增 加 , 平均 回收率为
10 .5 8%
。 这也说明 , 由于天然产物成分极为复杂 ,再
加上黄酮类化合物本身也具有数千种不同的分子结
构 , 采用碱性介质中加铝盐显色的分光光度法测定
鬼箭锦鸡儿总黄酮含量 , 结果会偏高 ,尤其在所配制
试样浓度较大的情况下 。
2
.
3 正交试验结果
实验结果见表 3 ,
方差分析见表 4 。 由
数据分析可知 ,影 响
鬼箭锦鸡儿 总 黄酮
提取 收率的因素 , 由
大到小的顺序为 : 乙
醇浓度 (A ) 、 物料 比
(0
、 回流 时 间 (B) , 其
中 乙 醇 浓 度 对 总 黄
酮 的得 率有显 著影
响 , 最佳提取条件 为
A ZB厂 2。
表 3 正交试脸安排及结果
试验
号 A B
总黄酮
含量 (% )
l 1
2 l
3 l
4 2
5 2
6 2
7 3
8 3
9 3
K一 13
.
10
.K 15
.
29
3K 10
.
76
R 4
.
53
1
2
3
l
2
3
l
2
3
12
.
5 9
13
.
3 3
13
.
2 3
0
.
74
3
.
69
4
.
77
.4 64
5
.
30
5
.
0 5
4
.
9 4
3
.
60
3
.
5 1
3
.
6 5
表 4 正交试验方差分析裹
方差
来源
离差
平方和 自由度 均方 F值
裹 1 样品回收率试脸结果
序 芦丁加 增加 t 吸光度 测得量 回收率
A
B
2
2
号 瑟 %() A (mg , %()
0
.
2 98
0
.
3 27
0
.
35 6
0
.
4 17
0
.
4 7 7
0
.
55 3
0
.
6 23
0
.
506 1
0
.
05 0 6
0
.
10 1 1
0
.
2 07 5
0
.
3 12 1
0
.中抖 6
0
.
56 6 6
10 1
.
2
10 1
.
1
10 3
.
7
104 .0
111
.
2
1 13
.
3
2 .4 药材中总黄酮含 t 的测定
按最佳提取条件 ,进行 5 次重复试验 ,测得鬼箭
锦鸡儿中的总黄酮含量分别为 .5 34 % 、 5 . 20吠, 、 .5 28 % 、
5 .4 1%
、
5
.
36%
,平均值 .5 32 % , SR D 为 1 . 5 2% 。
3 结论
( l) 正交试验结果显示 , 鬼箭锦鸡儿总 黄酮 的最佳
提取条件为 : 选用 75 % 的乙醇作为溶剂 , 以 1: 10 的
物料比 , 回流 4 0m in ,重复 3 次 ,合并滤液 。
( 2) 采用分光光度法测得鬼箭锦鸡儿药材中的总黄
酮平均含量为 .5 32% , 而采用 H PCL 法测得其中所
含懈皮素 、 山奈酚 、 异 鼠李素等三种黄酮贰元的总含
量为 1 . 8 2 3% 13 。 前者明显高于后者的原因可能有 : 其
一 , 分光光度法测定 的是药材 中所有黄酮贰和贰元
的总含量 , 而 HPL C 法测定的是黄酮贰水解后的贰
元总含量 , 当用黄酮贰来表示总黄酮含量时必定高
于用贰元表示的总黄酮含量问。 其二 ,鬼箭锦鸡儿药
材中可能含有除这三种黄酮贰元以外的其它类型的
黄酮类化合物 , 由于没有相应的标准样品 ,很难通过
HPL C 进行定性和定量 。 其三 ,对于单一组成的纯黄
酮样品 , 采用碱性介质中加铝盐显色的分光光度法
测定总黄酮含量 ,结果非常准确 ;但对于天然产物 ,
其成分极为复杂 , 再加上黄酮类化合物本身也具有
数千种不同的分子结构 .再采用这种显色方法 , 不可
避免地会有较大的干扰 ,从而产生较大的误差 ; 从鬼
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1
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2-内
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2 .2 曳箭铆鸡儿总黄酮的提取
.2 2
.
1 提取方法 : 称取粉碎后的原药材 10 .仪旧g ,放人
25 Qm L烧瓶中 , 首先加人 100 n l L 石油醚回流 30 m in
脱脂 ;过滤后弃去滤液 , 滤渣再用一定量的乙醇溶液
热回流三次 (以尽可能少的实验手段 ,最大限度地提
取 出黄酮类化合物 ) , 过滤 ,合并 滤液 , 补足损失重
童 ,得总黄酮提取物 ,用于含量的测定 。
.2 .2 2 正交试验设计 : 根据初步试验结果 , 选用 场(3’)
正交试验表 , 以直接影响总黄酮收率的乙 醇浓度
(A )
、 回流时 间 (B) 、 药材重量 与乙 醇体积之 比 (物料
比 ) (0 为试验因素 , 第 4 个 因素为空 白 , 每个因素取
三个水平 (见表 2 ) ,对 鬼箭锦鸡儿 总黄酮 的最佳提
取条件进行研究 。
表 2 总黄翻提取条件因康水平表
水平 A ( n l g ) B (% )
55 20 1
75 4 0 1
9 5 6() l
:
15
: 1 0
.且`,`,j
第 2 期 魏永生 : 正交试验法研究藏药鬼箭锦鸡儿总黄酮含量
箭锦鸡儿测定过程 中的回收率试验结果来看 , 分光
光度法会产生正偏差 。
( 3) 对于天然产物中总黄酮含量 的测定 , 文献报道
主要采用 H PL C 法和铝盐显色的分光光度法 , 从测
定结果的准确度来看 , 这两种方法应该是各有所长
和不足 , 由于一般情况下 , 很难得到药材中所含的所
有黄酮成分的标准样品 , 因此要想准确地通过 HPL C
测定药材中的总黄酮含量也是很困难的 ; 而铝盐显
色分光光度法 的干扰较大 , 从目前的文献报道看也
没有一个很好的方法加以消除 。 所以 ,对于天然产物
中的总黄酮含量 , 应该结合多种测定方法进行综合
评价 。
(4 )鬼箭锦鸡儿中的总黄酮含量较高 , 其在我国的许
多地 区都有广泛分布 , 若能进一步开展鬼箭锦鸡儿
总黄酮对人体生理生化作用机理的研究 , 将能促进
这种传统民间藏药的开发利用 。
参考 文献 :
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