全 文 ：1．5 NS蛋白表达与脑胶质瘤临床病理分期的关系
Ⅰ、Ⅱ期脑胶质瘤组织中 NS 蛋白阳性表达率为
25． 0%(3 /12) ，Ⅲ、Ⅳ期为 73． 9%(17 /23) ，Ⅲ、Ⅳ期
脑胶质瘤组织中 NS 蛋白阳性表达率高于Ⅰ、Ⅱ期
(χ2 = 7． 704，P = 0． 006)。
2 讨论
NS是一个细胞核内的鸟嘌呤核苷酸结合蛋白，
以三磷酸鸟苷(guanosine triphosphate，GTP) 依赖的
形式穿梭于核仁和核质之间，这一动力学的穿梭过
程调控细胞增殖［1-3］。研究［6］表明干细胞和肿瘤细
胞之间存在着许多相似的生物学特性。维持干细胞
内环境稳定的关键是协调控制自我更新和保证分
化，如果这种平衡被打破就易导致肿瘤的发生。目
前已有研究［7］显示 NS蛋白可能充当调控正常干细
胞和癌细胞增殖的双面角色，肿瘤细胞和肿瘤组织
中 NS 基因的高表达普遍存在。该研究证实: 脑胶
质瘤组织中 NS 蛋白的表达明显高于正常脑组织，
且临床病理分期Ⅰ、Ⅱ期脑胶质瘤组织中 NS 蛋白
的表达明显低于Ⅲ、Ⅳ期，提示 NS 不仅与脑胶质瘤
的发生有关，还与其恶性程度( 临床分期) 密切相
关。
总之，NS蛋白的表达与脑胶质瘤临床分期之间
的相关性使其有可能成为脑胶质瘤的又一个靶向治
疗基因，这为脑胶质瘤的临床治疗提供了一个新的
研究方向。
参考文献
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(2013-01-14 收稿 责任编辑王 曼)
doi:10． 3969 / j． issn． 1671-6825． 2013． 04． 038
* 河南省自然科学基金资助项目 0511032600
含羞草总黄酮不同提取方法的比较*
吴崇珍1)，李玉贤2)#，袁 珂3)，王 勇3)，张泽志1)，王艳坤1)
1) 河南教育学院化学系 郑州450046 2) 河南中医学院药学院 郑州450008 3) 浙江农林大学林生院 临安311300
#通讯作者，女，1963 年 11 月生，副教授，研究方向:中草药活性成分的提取及结构改造，E-mail:Lilindian@ 163． com
关键词 含羞草;总黄酮;提取
含羞草具有安神止痛、化痰止咳、清热利尿等功
效，主要分布在我国热带、亚热带地区，资源丰富，便
于采集［1］。从含羞草中已相继分离出黄酮苷类、酚
类、皂苷等化合物［2-5］。作者分别用回流提取、微波
萃取、超声提取［6］、渗漉提取、冷浸提取、索氏提取 6
种方法对含羞草总黄酮进行提取，同时以芦丁作对
照品进行总黄酮含量测定，比较提取效率，探讨含羞
草总黄酮的最佳提取方法。
1 材料、方法与结果
1． 1 材料与仪器 含羞草样品采自海南三亚，由
海南大学药用植物学教授黄世满鉴定为豆科含羞
·065· 郑州大学学报( 医学版)2013 年 7 月 第 48 卷 第 4 期
草;芦丁对照品从中国药品生物制品鉴定所购买。
实验所需仪器如下:UV-2102PCS紫外可见分光光度
计( 上海龙尼柯仪器有限公司) ，KQ-250B 超声波提
取器( 昆山市超声仪器有限公司) ，NJL07-3 型实验
专用微波炉( 南京杰全微波设备有限公司，额定功
率 800 W) ，Millipore Sim-plicity 型超纯水器( 美国
Millipore公司) ，ＲE-52A 旋转蒸发仪( 上海亚荣生
化仪器厂) ，真空薄膜浓缩装置( 自装［7］) ，101-1 型
电热恒温干燥箱，微量分析天平(EETTLEＲ AE 240，
瑞士) ，微孔滤膜( 上海医药工业研究院)。
1． 2 含羞草样品中总黄酮的提取
1． 2． 1 回流提取 准确称取粉碎并过 60 目筛的
含羞草 3 份，每份 20 g，分别置于圆底烧瓶中，在 80
℃恒温水浴锅中，加 200 mL体积分数 60%乙醇，回
流 3 h，提取 3 次。提取后抽滤，合并提取液，将滤
液旋转蒸发浓缩，定量转移到 100 mL 容量瓶中，用
体积分数 60%乙醇稀释定容至刻度，摇匀。
1． 2． 2 微波萃取 准确称取粉碎并过 60 目筛的
含羞草 3 份，每份 20 g，分别置于微波炉中，用体积
分数 60%乙醇微波萃取，将提取液蒸发浓缩，定量
转移到 100 mL 容量瓶中，用体积分数 60%乙醇定
容至刻度，摇匀。
1． 2． 3 超声提取 准确称取粉碎并过 60 目筛的
含羞草 3 份，每份 20 g，用回流提取所用溶剂超声提
取，将提取液蒸发浓缩，余同 1． 2． 2。
1． 2． 4 渗漉提取 同回流提取准确称取过筛的含
羞草，用回流提取所用溶剂渗漉提取，将渗漉液浓
缩，余同 1． 2． 2。
1． 2． 5 冷浸提取 同回流提取准确称取过筛的含
羞草，用回流提取所用溶剂冷浸提取，将提取液浓
缩，余同 1． 2． 2。
1． 2． 6 索氏提取 同回流提取准确称取过筛的含
羞草，用回流提取所用溶剂进行索氏提取，将提取液
浓缩，余同 1． 2． 2。
1． 3 含羞草样品中总黄酮含量的测定
1． 3． 1 标准曲线 芦丁对照品标准溶液的配制:
准确称取烘干至恒重的芦丁对照品，配成质量浓度
为 0． 128 g /L的芦丁对照品标准溶液。用吸量管准
确取上述标准溶液 0． 0、1． 0、2． 0、3． 0、4． 0、5． 0 mL
于 6 只 10 mL 容量瓶中，参考文献［2］的对应步骤
依次测定其吸光度(A) ，以芦丁质量浓度C 为横坐
标，相应的 A 为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程:A
= 9． 050 6C + 0． 006 8(Ｒ2 = 0． 999 6)。
1． 3． 2 样品测定 分别准确吸取上述 6 种提取方
法所得的提取液 2 mL，置于 25 mL 容量瓶中，加入
体积分数 60%乙醇定容至刻度，摇匀，此为稀释分
析液。取稀释分析液 1． 0 mL置于 10 mL容量瓶中，
按照 1． 3． 1 项所述的方法进行测定，按回归方程计
算出样品溶液中的总黄酮质量浓度，根据稀释倍数
及样品质量计算出样品中总黄酮的质量分数。
1． 4 结果 见表 1。
表 1 6 种提取方法提取的总黄酮质量分数的比较
组别 n 总黄酮质量分数 /%
回流提取 3 0． 387 ± 0． 094
微波萃取 3 0． 394 ± 0． 063
超声提取 3 0． 401 ± 0． 016
渗漉提取 3 0． 347 ± 0． 011
冷浸提取 3 0． 291 ± 0． 015
索氏提取 3 0． 311 ± 0． 009
F 287． 220
P ＜ 0． 001
两两比较，P均 ＜ 0． 05。
2 讨论
采用 6 种不同的提取方法对含羞草总黄酮进行
提取，提取效率依次为:超声提取＞微波萃取 ＞回流
提取 ＞渗漉提取 ＞索氏提取 ＞冷浸提取。其中，超
声提取法、微波萃取法和回流提取法的提取效率
较高。
分析比较可知，超声提取含羞草中的总黄酮成
分完全，提取效率较高，节省溶剂和能源，被提取的
黄酮成分不易被破坏。微波萃取提取出的有效成分
量稍低于超声法，是由微波辐射所引起的短时高温
对其中的热敏性黄酮成分的影响所致，但微波萃取
的时间更短，有快速高效的特点。回流提取时间较
长，溶剂用量较大，因溶液长时间受热，存在黄酮成
分在持续较高温度下可能发生变化并流失的问题。
综上所述，含羞草总黄酮的提取工艺有多种，从
提取效率和总黄酮成分的热稳定性考虑，应优选超
声提取和微波萃取。
参考文献
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(2013-03-27 收稿 责任编辑王 曼)
doi:10． 3969 / j． issn． 1671-6825． 2013． 04． 039
氟他胺联合二甲双胍治疗难治性多囊卵巢综合征疗效观察
杨 菲1)，邓琳琳2)
1) 南阳市卧龙区妇幼保健院妇产科 南阳473000 2) 南阳医学高等专科学校妇产科教研室 南阳473000
关键词 氟他胺;二甲双胍;多囊卵巢综合征;糖脂代谢
多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome，P-
COS) 是一种发病多因性、临床表现多态性的疾病，
主要表现为卵巢多囊化、稀发排卵、高雄激素血症，
同时合并程度不等的月经异常、肥胖、胰岛素抵抗以
及高脂血症［1-2］;涉及神经内分泌、糖脂代谢、蛋白质
代谢等多个生理过程，远期罹患心血管疾病的危险
很高［3］。育龄期妇女罹患 PCOS 的几率为 5% ～
10%［4］，占无排卵性不孕的 50% ～ 70%［5］。目前，
国内临床上治疗该病一线用药是达英-35 配合二甲
双胍调整内分泌、氯米芬和尿促性腺激素促排卵，但
是有 60% ～ 70%的患者由于个体差异等原因对这
些药物反应不佳，表现为糖脂代谢紊乱、持续性无排
卵，称为难治性 PCOS［6］。国外有报道用氟他胺可
以有效抑制高雄激素血症［7］，改善难治性 PCOS 患
者的排卵情况［8］，而将其用于难治性 PCOS 的治疗
国内报道［9］较少。作者采用氟他胺联合二甲双胍
治疗难治性 PCOS，现将治疗效果分析报道如下。
1 对象与方法
1． 1 研究对象 选择 2010 年 3 月至 2012 年 8 月
在南阳市卧龙区妇幼保健院就诊的 PCOS 患者 52
例。诊断依据参照美国生殖医学年会鹿特丹工作组
修正的诊断标准:①稀发排卵或无排卵。②高雄激
素血症或高雄激素临床表现( 如多毛、痤疮等)。③
超声检查在月经周期或黄体酮撤退后出血的第 3 ～
5 天进行，显示双侧卵巢均有大于 12 个且直径 2 ～ 9
mm的小卵泡，即卵巢多囊样改变，和( 或) 卵巢体积
增大。以上 3 项中存在 2 项即可确诊为 PCOS。52
例患者年龄 21 ～ 34(26． 0 ± 1． 8) 岁，均无妊娠史。
这些患者除了符合 PCOS的诊断标准外还具备以下
条件:①血雄激素升高( 总睾酮＞ 2． 5 nmol /L) 和
( 或) 具有胰岛素抵抗［空腹胰岛素(FINS)＞ 15
mIU /L，OGTT 2 h血糖值 ＞ 7． 8 nmol /L］。②排除先
天性肾上腺皮质增生、肝脏疾病，至少 0． 5 a 以上没
有用避孕药或促排卵药等对下丘脑-垂体-卵巢轴有
影响的药物。
1． 2 治疗方法 受试者从月经周期或撤退性出血
第 5 天开始口服二甲双胍 750 mg /d( 盐酸二甲双胍
片，250 mg /片，3 次 /d; 郑州瑞康制药有限公司) 和
氟他胺 500 mg /d( 氟他胺片，250 mg /片，2 次 /d; 上
海复旦复华药业有限公司) ，连续服用12 周。服药
期间避孕，饮食等其他生活习惯保持不变。
1． 3 检测指标及方法
1． 3． 1 一般指标 测量患者的身高、体质量，计算
体质指数(BMI) (≥25 kg /m2 为肥胖) ; 用软尺测量
其腰围、臀围，计算腰臀围比值(WHＲ) (≥0． 8 为中
心性肥胖)。
1． 3． 2 血清学指标 于月经周期或撤退性出血第
3 ～ 5 天的早晨空腹抽血，测定空腹血糖(FBG)、
FINS，根据公式计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IＲ) ，
HOMA-IＲ = FBG(mmol /L)× FINS(mIU /L)/22． 5;
测定血清 TG、TC、LDL-C、HDL-C水平。服药前后的
血样均经过 3 000 r /min 离心后取上清，－ 20 ℃冰
箱保存，统一测定。采用葡萄糖氧化法测定 FBG，
采用放免法测定 FINS，采用酶法测定 TC、TG、HDL-
C、LDL-C。所用仪器为东芝 TBA120 全自动生化分
析仪，所需试剂盒均由上海超研生物科技有限公司
提供。
·265· 郑州大学学报( 医学版)2013 年 7 月 第 48 卷 第 4 期