全 文 ：叶,华肝脏病杂 乙{ 2 0 0 3年 2 月第 1 1卷第 2期 C I: i ,: J H e p a t o l , 卜了c l〕 : u a r y 20 0 3 , V o l 1 1 , N o . 2
简引受
刀豆素 A 诱导小鼠肝损伤增加肝脏 N F K B 活性
李跃华 朱丽 哈团柱 李等 李晓宇 吴翠 贞 李传富
【关键词】 肝 ; 刀豆球蛋白 A ; 核因子 K B
A c t i v a t io n o f N u c le a r F a c to r
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K B i n c o n c a n a v a l i n A
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后 , 1 、 2 、 4 、 8 、 12 h 分别提取核蛋白 , 进行 N F K B 活性的检
测 。 各个时间段核内 N F K B 的含量均高于正常 , 以 l h 最明显 , 4 h
次之 。 (3) C o n A 诱导的肝损伤发展进程中 T N F a 和 N O 含量的变
化 : C ol A 损伤 1 、 4 、 s h 后血清 T N F a 、 肝组织 N O都分别有显
著的增加 , 尤以 4 h 最明显 , 可升高到正常的好几倍 , 见表 1 。
表 1 刀豆素 A 注射后肿瘤坏死因子 a 和一氧化氮含量及
肝细胞凋亡率的变化 (r 士 的
肝内病理性免疫反应参与多种肝病的发病机制 , 在发生病
毒性肝炎时常同时有肝细胞凋亡和坏死 , 而且细胞凋亡的强弱与
病情轻重呈明显相关性 {` {。 为 了解肝组织中核因子 、 B (n uc l ea r
fa c ot r ka p阳 B , M 矛K )B 结合活性改变在急性免疫肝损伤发生 、
发展中的作用 , 本研究利用刀豆素 A (c 。 nc a n a va li n A , C o n A )
诱导的小鼠急性肝损伤模型 , 动态观察肝细胞凋亡 、 坏死与肝
内 N F K 3 结合活性的改变和一氧化氮 (N O ) 、 肿瘤坏死因子 a
(T N F a ) 产生释放之间的相关性 , 探讨 N F K B 在免疫性肝损
伤发病机制中的作用 。
1
. 材料 与方法 : ( l) 实验动物 : 雄性 B A L B / c 小鼠 , 体重
( 17 士 2) 9
, 江苏省实验动物中心提供 。 (2) 免疫胜肝损伤模型的制
备 : 用 C 0 l l A 20 月〕g / kg 尾静脉注射制备肝损伤模型 。 (3) 细胞形态
学观察 : 取肝右叶 , 按常规方法固定 , 玉化染色 , 光镜下观察肝损
份清况 ; 透射电镜观测细胞超微结构变化 ; 用 1、 t u 庄纽技术检测肝
细胞凋亡 。 (4 )N F K B活性的检测 : 用凝胶迁移率分析法 , 按文献 21
进行 。 (5) 数据处理 : 两组间比较用 t 检验 : 凋亡肝细胞在总计数
细胞中的相对数 , 用百分率表示 , 采用尸 检验进行比较 。
2
. 结果 : ( 1 ) C o n A 注射导致肝损伤的情况 : 光镜检查显
示 , 损伤 4 h 后 , 肝细胞胞浆疏松 , 染色明显变浅 , 肝窦不见 ,
肝索消失 , 有的还可见点状坏死 、 炎细胞浸润等表现 ; 损伤 s h
后 , 上述病理损伤减轻 , 但出现较多嗜酸性变的肝细胞 , 其周
围没有炎细胞浸润 , 并有嗜酸性小体出现 , 提示有凋亡存在 。 电
镜检查显示 , 损伤 4 h 后 , 肝细胞肿胀 , 部分核出现浅的切迹 , 核
缘呈锯 一齿状 , 异染色质增多 , 胞质疏松 , 狄氏间隙微绒 毛髓样变
性 ; 损伤 s h 后 , 肝细胞同样肿胀 , 胞核出现深浅不一的切迹 , 胞
质中常见髓样小体及空泡变性区 , 毛细胆管扩张 , 部分微绒毛髓
样变性 , 线粒体肿胀 , 晴模糊 , 内质网轻度扩一张 。 T u n el 检测
发现 , 正常对照组的肝组织几乎没有见到凋亡细胞 , 损伤 l h 凋
亡细胞也很少出现 , 损伤 4 h 、 s h 后与正常组相比凋亡细胞增
加 , 其中以损伤 s h 后最明显 , 平均凋亡率见表 1 。 (2) C ol l A 诱
导的小鼠肝损伤肝组织中 N F K日活性的动态变化 : C o n A 注射
基金项目 : 江苏省教育委员会自然科学基金 ( 9 9 K J B 3 1 0 0 04)
作者单位 : 2 1 0 0 2 9 南京 , 南京医科大学病理生理教研室 (李
跃华 、 朱丽 、 李蔷 、 李晓 ` :j 、 吴翠 贞 ) ; 美国东 田 纳西洲立大学
(哈团柱 、 李伟 `富 )
组 别 例数
对 照 组 8
刀豆素 A S
l h
4 h
8 h
肿瘤坏死因子 a
(
n g / m l )
1 氧化 氮
( 尸n l o l / g )
0
.
2 8 士 0 . 0 6 14 . 2 8 十 2 . 9 3
凋亡百分率
( 90/ )
2
.
14 土 0 . 0 1
0
.
6 七 0
.
0 7
幸 }
0
.
8 6 土 0 . 0 7幸
0
.
60 士 0
.
02
` {`
3 1
.
3 7 十 4 . 4 7白 “ ,
3 9
.
17 士 4 . 2 9 *
3 3
.
24 士 4 . 7 7` 八
4
.
2 9 士 0 . 3 7
4 9
.
3 2 士 7 . 6 2 *
8 1
.
3 0 士 13 9 1内 “
与正常对照组比较 , ’ 才值在 5 . 6 71 一 1 3 . 0 4 1 , x “ 值分别为 58 . 1 39
和 12 8 . 5 3 0 , P 值均 < 0 . 0 0 1 ; 与损伤 4 h 组比较 , 护 z值在 2 . 9 8 4 一
8
.
3 6 1
, 、 2 二 2 2 . 5 0 5 , 尸值均 < 0 . 0 1 , 八 z 一 2 . 7 9 9 , P < 0 . 0 5
3
. 讨论 : 本实验给小鼠静脉注射 C o n A 引发 N F K B 活化 ,
注射 C o n A 后 , 不同时间段核内 N F K B 的量都比正常显著增高 ,
以 C on A 注射后 l h 增加最明显 , Z h 有所降低 , 但 4 h 又重新增
加 , 至 s h 以后又开始回降 。 在 C o -nA 触发的肝损伤发生 、 发展过
程中 N F K B 为什么会出现波动性的增加 ? 同时检测血清 T N F, a 水
平和组织 N O 含量的变化发现 , 在 C o nA 注射后 4 h T N F a 和 N O
含量最高 , 随后开始回降 , 到注射后 s h 其下降程度与 4 h 相比差
异有显著性 。 这提示 C o l l八可能首先刺激 N F K B 的活化 , 当血中
C o nA 浓度因代谢而降低时其刺激作用减弱 , 故 2 h N F K B较 l h
有所降低 。 而 4 h N F K B 活性 又增高可能是 N F K B 的活化诱导了
T N F a 和 N O 的表达 , T入 F a 和 N O 可作为 N F 、 B 的激活剂 , 反
过来激活 N F 、 B1 3 }。 本研究还发现血清 T N F a 水平和组织 N O含量
的变化与肝细胞的凋亡和坏死有明显的相关性 , 提示N F K B活化
引起 T N i刃a 和 N O 产生的增加在 C O l l了、弓!发肝损伤的动态发展过程
中可能起着重要作用 。
参 考 文 献
l 张斌 , 张定风 , 马英 , 等 . 乙型肝炎患者肝组织中 Bcj 一 2 、 B a x 、
B a k 的表达及意义 . 中华肝脏病杂志 , 19 9 9 , 7 : 7 4 一 76 .
2 W Il l i
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N F
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K B : t e n y e a r s a ft e r
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C e l l
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19 9 6
,
8 7 :
13
一
2 0
.
(收稿 日期 : 2 0 0 1 一 1 1 一 2 8 )
(本文编辑 : 袁平戈 )