全 文 ：9 6 2第 4 军 医大学学报1 9 98 年1 8 卷第 4 期
灵芝多糖与刀豆素 A 相互作用对小鼠脾细胞体外增殖反应的影响
雷林生 孙莉莎 杨淑琴 (第一 军 医 大学药理学教研 室 , 广州 , 5 1 0 5 1 5 )
摘要 灵 芝多糖 ( G l一 B )与刀豆 素 A ( C o n A ) 对小 鼠脾细胞增殖反 应有三种不 同的相互作用 。 当 C o n A 为亚适浓度 ( 。 . 5 m g八 )时 , G L B 有轻度
的协同刺激作用 ; 当 C o n A 为最适浓 度 (2 m g l/ ) 时 , 高浓度 G L B ( > 1 0 m g / L ) 可轻度对抗 C o n A 的刺激作用 ; 当 C o n A 为超适浓度 ( 16 m g /
L )时 , G L B 可逆转 C o n A 的抑制作 用 , 并恢复 C o n A 的刺激作用至最适水平 , 可能是多糖与 C o n A 发生沉淀反应所致 。
关健词 灵芝 ; 多搪 ; 刀 豆素 A
E f f e e t o f i n t e r a e t i o n o f G a n o d e r m a P o l y s a e e h a r i d e s w i t h c o n e a n a v a l i n A o n P r o l i f e r a t i o n o f m o u s e s P l e n o
-
e y t e s i n v i t r o
L e i L i n s h e n g
,
S u n L i s h a
,
Y a n g S h u q i n
D e P a r t m e n t of P h
a r m a c o l o舒 , F i r s z 九f i l i t a 划 材￡d i o a l U n i二 e r s i t夕 , G u a n g z h o u , 5 1 0 5 1 5
A b s t r a c t T h
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s o f I n t e r a e t i o n s o f G a n o d e r m a p o l y s a e e h a r id e s ( G L B ) s t r im u la n t e ff e e t w i t h e o n e a n a v a li n A ( C o n A ) i n
r h e p r o li f
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G L B e x h ib i t
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C o n A s t im
u l a t io n w h e n C o n A w a s o t o p t皿 u m e o n e e n t r a t l o n ( 2 m g / I ) . G l一 B r e v e r s e d t h e , n h l b i t o r y e f f e e t o f C o n A a n d r e -
s t o r e d i t
s s t l m u la n t e f f e e t t o o p t i m a l le v e l w h e n C o n A w a s a t o v e r
一 o p t im
u m e o n e e n t r a t io n ( 1 6 m g / l )
.
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u t e t o p r e e l p l a t i o n r r e a e t io n b e tw e e n C o n A a n d G I B
.
K e y w o r d s G a n o d e r m a l u e i d u m ; p〔 ) l y s a e e h a r id e ; e o n e a n a v a l in A ;
在免疫 药理学研 究 中 , 往往 以 体外 刀 豆素 A
( C o n A ) 刺激小 鼠脾细胞增殖反应为实验模 型 , 观
察待测药物对这一反应是抑制还是协同促进作用 ,
从而判断待测药物是 T 细胞 的抑制剂还是促进剂 ,
因为 C o n A 主 要促进 T 细胞增殖 。 然而 , 当待测药
物 为多糖 的时候 , 情况并不 如此 简单 , 因 为 C o n A
能与某些糖基反生结合而引起沉淀反应 , 待测药物
的作用也许是削弱 了 C o n A 的作用 , 而不是在细胞
水平上发挥效应 。 作者报道灵芝多糖与 C o n A 相互
作用对小 鼠脾细胞增殖反应的不同影响 , 其结果值
得重视 。
1 材料和方法
1
.
1 动物 雄性 , B A L B c/ 纯系小鼠 ,质量 18 一 2
g
, 由本校实验动物 中心提供 。
1
.
2 主要试剂 与药物 C on A 为 S i g m a 产品 ; 氖
标胸腺 嗜吮 核昔 ( [ 3H 〕T d R , 8 5 1 G B q /m m o l ) 为北
京原子能研究所产品 ; R P M I一 1 64 0培养粉为 G IB C O
公 司产品 ; 小牛血清购 自杭州四季青生物工程材料
研 究所 。灵芝多糖 ( G L B ) , 参照文献川方法提取 。 鹿
角 状 赤 芝 [ G a n o d e r m a l u e id u m ( I J e y s s e x F r )
K ar st ]
,粉碎 , 热水提取 , 浓缩提取液 , 7倍量醇沉 。 复
溶沉淀物 , 以 5 0% 、 80 % 、 95 % 的乙醇浓度分部沉淀 ,
得沉淀物 A 、 B 、 C 。 B 部分收率最高 , 取 B 置透析袋
内逆向流水透析 4 8 h , 以 S e va g e 方法除去蛋白质 ,
乙醇沉淀 , 得浅棕色粉末 G L B 。
1
.
3 实验方 法
1
.
3
.
1 小 鼠脾细胞 悬液制备 参照文献 2[] 方法操
作 。
1
.
3
.
2 细胞培养 小 鼠脾细胞用 R P M I一 1 6 4 0培养
液配成 4 X 1 06 个 / m l , 于 9 6孔平底培养板中每孔加人
1 0 0 拜 l , 另加不同浓度的 C o n A , G L B 或 R P M I一 1 6 4 0
培养液各 5 0 川 , 使总体积 为 2 0。 川 。在 37 ℃ 含有 5%
C O
: 的培养箱中培养 3 d 。
1
.
3
.
3 细胞增 殖程度浏 定 细胞终止培养前 6 h
每孔加人 [ 3 H〕T d R 2 0 拼 l ( 1 . 4 8 x l o ` 鞠 ) 。然后用 自
动细胞收集器将细胞收集到 49 型玻璃纤维滤纸上 ,
蒸馏水洗 10 遍 80 ℃烤干后放入盛有 5 m l 闪烁液小
瓶 中进行 p计数 ,放射强度用 m in 一 `表示 。
收稿 日期 : 19 9 8一 0 3一 2 5
2 结果
2
.
1 G L B 对不 同浓度 C o n A 刺激小 鼠脾细胞增殖
反应 的影响 从图 1可以看出 , C o n A 促小鼠脾细胞
增殖的最适浓度为 Z m g / I J 。 小于 Z m g / I J , 随浓度增
大刺激作用不断加强 ; 相反 ,大于 Z m g / I才 , 随浓度增
大刺激作用逐渐减弱并转为抑制作用 。在 G l 一B ( 1 0
m g / L )存 在的情况 下 , 当 C o n A 为最适浓 度以 下
时 , G L B 对 C o n A 的刺激作用影响不大 。 虽然 G L B
本身有一定的促增殖作用 ,而 且与。 . s m g / L 的 C o n
A 有协同作用 ,但促增殖作用的强度很弱 。 当 C o n A
第一军医 大学学报 1 8 9 9年 18 卷第 4 期 2 97
大于 Z m g/ L 时 , G L B 可 以 明显逆转 C o n A 的抑制
作用 以及逆转 C o n A 刺激强度的下降 ,使其恢复到
最适状态 。 当固定 C o n A 的浓度为最适浓度 (2 m g /
L )
,
G L B 在 1 2 0 m g / L 以下时对 C o n A 的作用无明
显影响 ,但大于 1 20 m g / L 以上可 以轻度对抗 C o n A
的作用 ( 图 2 ) 。 当固定 C o n A 的浓度为抑制浓度 ( 16
m g / L ) 时 , 随着 G L B 浓度的增加 , C o n A 的促增 殖
作用不断恢复直至最大效应 ( 图 2 ) 。
殖能力很弱 , 。 p m 值在 1 0 0 0一 3 0 0 0之间 , 而 C o n A
的最适促增殖作用达 50 0 0 左右 。
O 月O 别 ) 1 2 0 嗯6 0 2 0 0 2月 0 2 8 0
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-一卜- - - -一 G L B (m g/ L )
员芝多箱对体外小 暇脾细胞增殖程度 的影响 (n 一 3 ,厉
士 s )
E f f e e t o f G an o d e
r m a op l y s a e e h a
r id e s ( G L B ) o n t h e
P r o l if e r a t i o n o f m o u s e s P l e e n e e ll s i n v i t or (
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= 3
,
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G L B (叫外 )
员芝多粉与刀 豆 t A 相互作用对体外小暇脾细胞增
殖程度的影晌
I o t e r ac ti o us o f G a n o d e
r m a op lys a e e h a
r i d e s ( G L B )
袱 th co n c a o a v a li n A ( C o n A ) o n t h e P r o li f e r a t i o n o f
. 0眠 s p l e e n c e ll s i月 vi tor一 . 一 : in th e p r e s e n e e o f e o n A a n d G L B ( 1 0 0 m g /
L ) ;一 O 一 : o n l y i n t h e p r e s e n e e o f C o n A . ( n = s ,
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犷。工x尸·三Eàu。毛:召二Zd1U
Con A (叫八 )
员芝多抽与最适或超适浓度刀 豆紊 A 相互作 用对体
外小暇脾细胞增殖程度的影晌 (n 一 3 ,牙士 : )
I n t e r ac t i
o n s o f G a n o d e r m a p o l y s ac
e h a r id e s ( G L B )
w i t h o P t im u m o r o v e r
一 o P t i m u m c o n e e n t r a t io n o f
c o n ca n a
v a l in A ( C o n A ) o n th e P r o l if e r a ti o n o f
nI o u s e s P l e e n c e l l s in vi t or
一 . 一 : in t h e p r e s e n e e o f G L B a n d o p t im u m c o n -
e e n t r a t io n o f C
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A ( 2 m g / L ) ; 一 △ 一 : in t h e
P r e s e n e e o f G L B
a n
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o v e r 一o P t im u m e o n e e n t r a t io n o f
C o n A ( 1 6 m g / L )
;
(
n
= 3
,
M
e a n 士 S D )
即i.gr
2
.
2 G L B 对 小鼠脾细胞 的促增殖作用 从图 3 可
以看出 , G L B 本身对小鼠脾细胞有轻度的促增殖作
用 , 而且有一定 的浓度依赖关系 。但总的看 , 其促增
3 讨论
从我们的实验结果可 以看 出 G L B 与 C o n A 对
小 鼠脾细胞增殖反应有三种 不同的相 互作 用 。 当
C on A 为亚适浓度 (0 . 5 m g / L )时 , G L B 有轻度的协
同刺激作用 ; 当 C o n A 为最适浓度 (2 m g / L ) 时 , 高
浓度 G L B ( > 1 0 m g / L )可轻度对抗 C o n A 的刺激
作用 ; 当 C o n A 为超适浓度 ( 16 m g / I J ) 时 , G L B 可
逆转 C o n A 的抑制作用 ,并恢复 C o n A 的刺激作用
至最适水平 。 C o n A 是 T 细胞的促有丝分裂剂 , 因
此 , 一般认为能够加强 C o n A 促小 鼠脾细胞增殖的
药物可能是 T 细胞功能的促进剂 , 相反为抑制剂 。
然而作者的结果难以用这一简单的推理方式进行理
解 , 因为不 同浓度的 C o n A 与 G L B 的相互作用结
果不一样 。早在 6 0年代或更早人们就发现 C o n A 能
与一些多糖发生沉淀反应 , 而 且沉淀反应的程度与
C o n A 及多糖的浓度有关 , 这些多糖包括支链的葡
聚糖和甘露聚糖比们 。 G L B 主要 由 7个多糖均一体组
成 , 它们为葡聚糖 、 甘露葡聚糖 、 半乳葡聚糖或杂多
糖 l[] 。 由此可见 , G L B 可 以与 c o n A 发生沉淀反应
是完可能的 。因此 , 作者的结果可 以用 “ 沉淀 ”原理解
释 。 当 C o n A 为最适浓度 以 下时 , 由于 浓度低 , 与
G L B 沉淀的能力弱 , 因此 G L B 对 C o n A 的促增殖
作用影响不大 , 加之 G L B 本身的直接促增殖作用 ,
其综合结果便比单独 C o n A 的效应好 。 C o n A 在大
于或等于最适浓度时 , 可以 与 G L B 形成明显结合沉
淀从而降低了 C o n A 的游离浓度 。此时 , G L B 便可抑
制 C o n A 的最大效应 ; 相反 , 当 C o n A 处于超适浓度
2 98 第 一 军 医大学学报 9 9 18 年 8 1卷第 4期
时 , G L B 与 C o n A 亦可发生沉淀反应 , 使超适浓度的
C o n A 恢复或接近最适游离浓度 ,从而使高浓度 ( 16
m g / I
J
) C o n A 的抑制效应或非最适效应逆转为最适
效应 。 G L B 为免疫促进剂已得到充分证实 ,然而 G L B
在最适浓度 (2 m g / L ) C o n A 存在时 , 其促小鼠脾细
胞的增殖作用却难以显示 出来 。 但是 , G L B 能明显促
进混合淋 巴细胞培养反应阁及原代脾细胞培养反应
( 图 3 ) , 尽管绝对促增殖作用很弱 。 由此可见 , C o n A
体外促小 鼠脾细胞增殖反应模型不适合多糖类药物
的筛选或作用机制研究 , 一是因为可能引起沉淀而出
现假阴性 (无作用 ) 或假阳性 (抑制作用 )结果 ;二是 由
于多糖的作用很弱 , C o n A 的作用很强 ,相差数十倍 ,
后者完全有可能掩盖前者的作用 。
参考文献
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n v ; r
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.
J B 尸心; n g M e d U n i二 , 1 9 9 1 , 2 3 ( 4 ) : 3 2 9
脉冲铰忆铝石榴石激光在 口腔科的临床应用及护理体会
刘 桂平 李若兰 黄 冰 ( 第一 军医大学南方 医 院 口 腔科 , 广州 , 5 1 0 5 1 5)
关锐词 脉冲铰忆铝石榴石激光 ; 口 腔 ; 护理
脉冲钦亿铝石榴 石 ( N d : Y A G )激光 牙科治 疗机 , 光 导纤
维柔软纤细 , 方便进入 口 内窄 、 深部位 , 能童 随意可调 ,有现行
涡给机的切割作用 ,适 用 于 口腔 医 学特点 。 目前已应用 于 口 腔
软组 织切除 。 对 牙本质过歌 、 口 腔 清疡等疾病疗效显著 , 已广
泛应用 于 临床 。 现将我们的应用 方法及护理体会介绍知下 。
临床资料
病例选择 门诊患者 6 5 8例 , 年龄 l ~ 7 2岁 , 男 3 9 1例 , 女
26 7例 , 其 中牙本质歌感 症 39 5例 , 舌 系带修整 10 例 , 牙周脓肿
切 开 13 例 , 拈液腺 囊肿 、 牙佩瘤切除 29 例 , 牙周炎照封 32 例 ,
口 腔贵疡 145 例 , 扁 平苔醉 7例 , 唇 炎 12 例 ,根管治 疗 15 例 。
1
.
2 仪器 N d : Y A G 牙科专用激光机 , 波长 1 . 06 拌m , 光导
纤 维直径 0 . 3 m m , 最大输 出功率6 . o w , 频率 1 0~ 1 0 0 H : , 能
量 3 0一 2 0 0 m J , 以 H e 一 N e 激光为靶瞄准光 。 根据病 变种 类和
治疗 目的 , 选择适 当 的能童参数及照射 时间 , 对于手术切 除 ,
常用 能童 为 8 0一 1 6 0 m J , 2 0~ 3 0 H : ;对于急 、 慢性 炎症 , 一般
常用 能量为 6 0 ~ 1 0 0 m J , 1 5~ 3 0 H z 。
1
.
3 使用方法 协助 医 生常规术前 消毒 , 充分幕东术歼 , 预
里激光 能量 , 检查光 纤末端 H e 一N e 指 示斑 , 以接触或 非接触
式照射病 变 区 , 术毕常规 以 2 %碘甘 油涂抹术 区 。
2 护理体会
2
.
1 心理护理 热情接待患者 , 态度 和蔼可 亲 , 语言诚 恳 。
向患者详细解释激光治 疗疾病 的适应 症 、 优缺点 、 注意事项 、
治 疗所 需时 间 、 过程及术后 护理知识 等 , 做好 病人的 心 理 护
理 , 消除其紧张情绪 , 对 于治 疗过程的顺利进行 非常重要 。
2
.
2 术前准备 术前 了解病 情及 其诊断 , 确 定治 疗方 式 , 准
备常规消毒物品 ,麻醉药品等 。
2
.
3 治 疗配合
2
.
3
.
1 协助患者取舒适 坐位或卧位 , 如 患者是小 儿 , 则需要
收稿 日期 : 19 9 8一 0 3一 2 7
家长 配合并指导 家长配合 的 方 法 。 对 于 不合作 的 幼 儿 , 在征
得 家长 同意后 , 固定好 头部 , 用 开 口 器 ( 开 口 器前端 用 纱布或
株皮保 护 , 以 免损伤 口 腔枯膜及健齿 )开 口 , 用 快 而轻 巧 , 准
确的动作将 开 口 器里于患者付侧 上下 牙齿之间 , 固定好 开 口
器 ,给患者裁防护 眼镜 。
2
.
3
.
2 根据治 疗范围常规消毒 , 必要时给 予局部麻醉 , 术者
配裁防护 眼镜 ,接通电 源后 , 在控制板上调整激光能童拾 出 ,
仔细检查光纤末端的 H e 一N e 指示 光斑是否呈 圈形 ,边缘是否
完整 , 否则应切除 末端 1~ Z m m ,使光斑 达到固形 。 牵拉 口
角 , 充 分幕东术好 , 协助 医生止血 , 保持术好清晰 , 便 于手 术
操作 。 术毕光 纤末端 以 75 % 酒精消毒备 用 。
2
.
4 术后护理 术后 应向患者交代 术后情况及 注意事项 ,
遇有特殊情况即来复诊 。 激光照射后 , 嘱患者保持局 部清洁 ,
用抗菌素漱 口 液漱 口 , 预防感染 。 告知患者可 能出现 的正常
反应 ,数 小 时至次 日可出现轻度红肿 , 少数人有渗出 , 嘱进温
凉的流食或半流食 。
2
.
5 护理中要注意的问题
2
.
5
.
1 激光 防护 由 于激光的光束很细 , 方 向性好 , 能童集
中 , 对人体最直接的危 害是皮肤 和眼睛 , 所以 在 室内操作 时
应进免光照射到器械或其他金属反光物上 , 放置 光导 纤维时
末端 向下 ,脚路开关采用 安全防护 型 , 以免误路 。 对 于 眼睛的
防护 , 主要采用戴 防护眼镜的 方 法 。
2
.
5
.
2 预 防交叉感染 有的 医务人 员误认 为激光手 术主要
是 利 用 光束 治 疗 , 不存 在感 染问 题 , 思想上对 院 内感 染概念
淡澳 , 操作 中忽视消毒 隔 离倾 向时有发 生 。 为此 , 必 须完善消
毒 隔 离制度 , 制定 落实预 防措施 , 强 化 消毒质量检测 ,提 高控
制 院 内感染意识 。