全 文 ：书 ［收稿日期］ ２０１４－０９－２２；２０１５－０５－２６修回
［基金项目］ 贵州省科技厅联合基金重点项目“民间食药两用野生植物资源山莓的利用研究”［黔科合Ｊ字ＬＫＧ（２０１３）０４］；贵阳市科技局
科技特派员计划项目“悬钩子属可食资源的利用及配套种植技术研究”（２０１１２０７）
［作者简介］ 石登红（１９８０－），女，副教授，从事生物学教学和植物资源利用相关科研工作。Ｅ－ｍａｉｌ：ｓｈｄｈｉｅｏ＠１６３．ｃｏｍ
［文章编号］１００１－３６０１（２０１５）０６－０２９５－００３６－０４
山莓茎皮总黄酮的提取及其抗氧化活性
石登红１，蒋华梅２，刘 燕１，王向前３
（１．贵阳学院 生物与环境工程学院，贵州 贵阳５５０００５；２．贵阳学院 化学与材料工程学院，
贵州 贵阳５５０００５；３．贵阳学院图书馆，贵州 贵阳５５０００５）
［摘 要］为有效开发和利用山莓资源，采用正交试验法筛选山莓茎皮中总黄酮的最佳提取条件，分光
光度法测定总黄酮含量，并测定其黄酮提取液对ＡＢＴＳ和ＤＰＰＨ自由基的清除效果。结果表明：山莓茎皮
总黄酮的最佳提取工艺为乙醇浓度６０％、料液比１∶３０、回流温度８０℃、提取时间４ｈ。在此条件下，山莓茎
皮中总黄酮含量可达２８．８１１ｍｇ／ｇ。山莓茎皮黄酮提取液对ＡＢＴＳ和ＤＰＰＨ自由基清除率达５０％时，ＩＣ５０
值均低于合成抗氧化剂ＢＨＴ的ＩＣ５０值，说明山莓茎皮黄酮提取液具有较强的抗氧化活性，可成为一种天然
抗氧化剂。
［关键词］山莓；总黄酮；提取条件；抗氧化活性
［中图分类号］Ｓ３９；Ｑ９４９．９９ ［文献标识码］Ａ
Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｆｒｏｍ Ｒｕｂｕｓ ｃｏｒｃｈｏｒｉｆｏｌｉｕｓ Ｂａｒｋ
ａｎｄ Ｉｔｓ Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ Ａｃｔｉｖｉｔｙ
ＳＨＩ Ｄｅｎｇｈｏｎｇ１，ＪＩＡＮＧ Ｈｕａｍｅｉ ２，ＬＩＵ Ｙａｎ１，ＷＡＮＧ Ｘｉａｎｇｑｉａｎ３
（１．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｇｕｉｙａｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕｉｙａｎｇ，Ｇｕｉｚｈｏｕ５５０００５；
２．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍａｔｅｒｉａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｇｕｉｙａｎｇ，Ｇｕｉｚｈｏｕ ５５０００５；３．Ｌｉｂｒａｒｙ，Ｇｕｉｙａｎｇ
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕｉｙａｎｇ，Ｇｕｉｚｈｏｕ５５０００５，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｅｘｐｌｏｉｔ ａｎｄ ｕｔｉｌｉｚｅ Ｒ．ｃｏｒｃｈｏｒｉｆｏｌｉｕｓ ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔｌｙ，ｔｈｅ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ
ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｄｅｓｉｇｎ ｗａｓ ｄｏｎｅ ｔｏ ｓｃｒｅｅｎ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｆｒｏｍ ｉｔｓ ｓｔｅｍ
ｂａｒｋ．Ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ａｎｄ ｉｔｓ ｃａｐａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ＡＢＴＳ ａｎｄ ＤＰＰＨ ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ ｆｒｅｅ ｒａｄｉｃａｌ ｗａｓ
ｔｅｓｔｅｄ ｂｙ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｔｏ ｅｘｔｒａｃｔ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ２８．８１１ｍｇ／ｇ
ｗｅｒｅ：６０％ａｌｃｏｈｏｌ（ｖ／ｖ）ｓｏｌｕｔｉｏｎ，ｔｈｅ ｒａｔｉｏ ｏｆ ｍａｔｅｒｉａｌ ｔｏ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｗａｓ １∶３０，ｒｅｆｌｕｘｉｎｇ ａｔ ８０℃ｆｏｒ ４ｈ．
Ａｎｄ ｉｔ ｗａｓ ａｌｓｏ ｃｏｎｃｌｕｄｅｄ ｔｈａｔ ＡＢＴＳ ａｎｄ ＤＰＰＨ ｗａｓ ｍｏｒｅ ｅａｓｉｌｙ ｒｅｍｏｖｅｄ ｂｙ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｔｈａｎ ＢＨＴ，ａｎｄ
ｆｕｒｔｈｅｒ ｍｏｒｅ ｔｈｅ ＩＣ５０ ｖａｌｕｅｓ ｏｆ ＡＢＴＳ ａｎｄ ＤＰＰＨ ｗａｓ ｌｏｗｅｒ ｔｈａｎ ＢＨＴ．Ａｌ ａｂｏｖｅ ｒｅｖｅａｌｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ
ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｉｎ ｉｔｓ ｓｔｅｍ ｂａｒｋ ｈａｖｅ ｔｈｅ ａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ ｏｘｉｄａｔｉｏｎ ａｎｄ ｍａｙ ｂｅ ａｎ
ｎａｔｕｒａｌ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｒｕｂｕｓ ｃｏｒｃｈｏｒｉｆｏｌｉｕｓ；ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ；ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ；ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ；ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ａｃ－
ｔｉｖｉｔｙ
山莓（Ｒｕｂｕｓ ｃｏｒｃｈｏｒｉｆｏｌｉｕｓ Ｌ．Ｆ．）又名悬钩
子、三月泡、山抛子、四月泡、刺葫芦、馒头菠、高脚
菠、泡儿刺，系蔷薇科（Ｒｏｓａｃｅａｅ）悬钩子属（Ｒｕｂｕｓ）
中的一种落叶灌木［１］，野生资源除我国东北、甘肃、
西藏、新疆、青海外，各省均有分布。山莓的根、茎、
叶和果实均可入药，有活血、解毒、止血等功效，是一
种民间常用的苗族药［２］。有关山莓果实的资源利
用［３－５］、营养成分分析等［６］研究已有文献资料报道。
山莓栽培利用已成为传统的重要水果［７－８］。但是，目
前研究山莓叶的化学成分和药用价值方面的文献资
料甚少［９－１６］，国内外对山莓的研究仍集中在资源利
用、叶的药用及果实食品加工等方面。
悬钩子属植物中黄酮类化合物的提取研究已有
相关研究报道［１７－１８］，但是对山莓茎皮黄酮类物质的
提取和抗氧化性方面的研究尚未见报道。山莓资源
在各地分布广泛，为深入研究山莓茎皮的药理活性
物质，提高山莓的药用价值，笔者以贵州野生山莓为
试验材料，利用有机溶剂回流提取法，正交试验设
计，对山莓茎皮中的总黄酮进行提取，并用分光光度
法测定总黄酮含量，首次对山莓茎皮黄酮清除
ＡＢＴＳ和ＤＰＰＨ 自由基能力进行研究，以期为贵
州野生山莓茎皮提取物进一步分离纯化、抗氧化活
性试验、单体分析等奠定基础，为挖掘山莓茎皮的药
理作用、充分开发利用山莓资源提供科学依据。
１ 材料与方法
１．１ 材料、试剂与仪器
野生山莓茎皮采自贵州贵阳，采摘时间为３月，
以当年生嫩枝为主，分别采集山莓植株的上、中、下
部位和四周，共采集２０ｇ，１００℃恒温干燥后研碎备
贵州农业科学 ２０１５，４３（６）：３６～３９
Ｇｕｉｚｈｏｕ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ
用。
试剂为硝酸铝Ａｌ（ＮＯ３）３、亚硝酸钠（ＮａＮＯ２）、
无水乙醇（ＣＨ３ＣＨ２ＯＨ）、氢氧化钠（ＮａＯＨ），均为
分析纯，芦丁为标准品≥９７％（１２０℃干燥至恒重），
ＡＢＴＳ和ＤＰＰＨ均采自由Ｓｉｇａｍａ公司提供。
仪器：ＵＶ－２５５０型紫外可见分光光度计（日本
岛津）、电子天平（美国奥豪斯）。
１．２ 芦丁标准溶液的配备
精密称取芦丁标准品２．５ｍｇ于１０ｍＬ容量瓶
中，用蒸馏水稀释至刻度，浓度为０．２５ｍｇ／ｍＬ。
１．３ 测定波长的选择
采用Ａｌ（ＮＯ３）３法，参考文献资料［１６，１９］精密
移取上述芦丁标准品溶液１ｍＬ于１０ｍＬ比色管
中，稀释至２．４０ｍＬ，加５％亚硝酸钠０．４０ｍＬ，摇
匀，６ｍｉｎ后加入１０％ Ａｌ（ＮＯ３）３水溶液０．４０ｍＬ，
摇匀放置６ｍｉｎ，再加４％ ＮａＯＨ ４．００ｍＬ，用蒸馏
水稀释至刻度，摇匀，静置１５ｍｉｎ。以不加 ＮａＮＯ２
的溶液为空白，采用紫外－可见分光光度法，在波长
４００～８００ｎｍ扫描［１６－１７］，以最大吸光度的波长为测
定波长。
１．４ 芦丁标准曲线的绘制
精密移取芦丁标准品溶液０．００ｍＬ、０．０１ｍＬ、
０．０２ｍＬ、０．０３ｍＬ、０．０４ｍＬ、０．０５ｍＬ和０．０６ｍＬ
分别置于１０ｍＬ的比色管中，按照１．３的步骤稀
释，摇匀，最后静置１５ｍｉｎ，用紫外－可见分光光度计
在５０６ｎｍ波长下测定上述溶液的吸光度，以吸光度
Ａ为纵坐标，稀释后各芦丁标准溶液浓度Ｃ为横坐
标，绘制标准曲线，计算芦丁标准溶液的回归方程及
相关系数：Ｃ＝０．０９１１×Ａ－０．００２５，Ｒ２＝０．９９７ ３。
１．５ 山莓茎皮总黄酮的测定
准确移取山莓茎皮提取液各０．５ｍＬ，按１．３的
方法显色，并测定吸光度，将吸光度值代入芦丁标准
曲线方程求出待测样品的浓度，根据公式：样品总黄
酮质量（ｍｇ）＝浓度×１０×１００／０．５，总黄酮含
量（ｍｇ／ｇ）＝样品总黄酮质量／样品质量，计算各样
品总黄酮质量和含量。
１．６ 不同因素的考察
１．６．１ 乙醇浓度 称取１ｇ的山莓茎皮粉末４份
分装入２５０ｍＬ烧瓶中，分别加入６０％、７０％、８０％、
９０％的乙醇溶液各３０ｍＬ，７０℃回流提取２ｈ，抽滤，
收集滤液，同样条件下重复提取１次，合并滤液，用
相应浓度的乙醇定容到１００ｍＬ的容量瓶中，按１．５
的方法进行总黄酮的测定（下同）。
１．６．２ 料液比 称取１ｇ山莓茎皮粉末４份分装
于２５０ｍＬ烧瓶中，分别加入料液比（ｇ／ｍＬ）为１∶
２０、１∶３０、１∶４０、１∶５０的７０％乙醇溶液，８０℃回流
提取２ｈ，抽滤，收集滤液，同样条件下重复提取１次，
合并滤液，定容到１００ｍＬ的容量瓶中。
１．６．３ 回流温度 称取１ｇ山莓茎皮粉末４份分
装于２５０ｍＬ烧瓶中，加入７０％乙醇溶液各３０ｍＬ，
分别在５０℃、６０℃、７０℃、８０℃回流提取２ｈ，抽滤，
收集滤液，同样条件下重复提取１次，合并滤液，定
容到１００ｍＬ的容量瓶中。
１．６．４ 提取时间 称取１ｇ山莓茎皮粉末４份分
装于２５０ｍＬ烧瓶中，加入７０％乙醇溶液各３０ｍＬ，
于８０℃分别回流提取２ｈ、３ｈ、４ｈ、５ｈ，抽滤，收集
滤液，同样条件下重复提取１次，合并滤液，定容到
１００ｍＬ的容量瓶中。
１．７ 山莓茎皮总黄酮提取条件的优化
根据单因素试验结果，以乙醇浓度（Ａ）、料液比
（Ｂ）、回流温度（Ｃ）和提取时间（Ｄ）为考察因素，以山
莓茎皮总黄酮含量为指标，采用Ｌ９（３４）进行正交试
验，其因素水平见表１。
表１ 山莓茎皮总黄酮提取的Ｌ９（３４）正交试验因素及水平
Ｔａｂｌｅ １ Ｆａｃｔｏｒｓ ａｎｄ ｌｅｖｅｌｓ ｆｏｒ Ｌ９（３４）ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｔｅｓｔ ｆｒｏｍＲ．ｃｏｒｃｈｏｒｉｆｏｌｉｕｓ ｓｔｅｍ ｂａｒｋｓ
水平
Ｌｅｖｅｌｓ
Ａ乙醇浓度／％
Ｅｔｈａｎｏｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
Ｂ料液比／（ｇ／ｍＬ）
Ｓｏｌｉｄ－ｌｉｑｕｉｄ ｒａｔｉｏ
Ｃ提取温度／℃
Ｒｅｆｌｕｘｉｎｇ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ
Ｄ提取时间／ｈ
Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ
１ ６０ １∶３０ ６０ ２
２ ７０ １∶４０ ７０ ３
３ ８０ １∶５０ ８０ ４
１．８ 抗氧化活性试验
１．８．１ 清除 ＡＢＴＳ自由基 精密称取０．０９６ ０ｇ
ＡＢＴＳ，蒸馏水溶解、定容至２５ｍＬ容量瓶，浓度
７ｍｍｏｌ／Ｌ，记为试剂１。称取０．３７８ ４ｇ Ｋ２Ｓ２Ｏ８（过
硫酸钾），蒸馏水溶解、定容至１０ｍＬ容量瓶，浓度
１４０ｍｍｏｌ／Ｌ，记为试剂２。精密吸取５ｍＬ试剂１
于１０ｍＬ容量瓶，加入８８μＬ试剂２，摇匀，避光放
置１２～１６ｈ，即为ＡＢＴＳ储备液。移取一定体积的
ＡＢＴＳ储备液，用 ７５％ 乙醇溶液稀释 １００ 倍，
７３２ｎｍ测吸光值在０．７±０．０。按上述１∶１００的比
例配制ＡＢＴＳ溶液用于清除ＡＢＴＳ自由基试验。
样品溶液：吸取正交试验中总黄酮含量较高的
溶液０．５ｍＬ，用７５％乙醇稀释至３ｍＬ，即为样品
溶液。
分别取样品溶液５μＬ、１０μＬ、１５μＬ、２０μＬ、
２５μＬ、３０μＬ、３５μＬ、４０μＬ、４５μＬ、５０μＬ、５５μＬ、
６０μＬ和６５μＬ，用７５％乙醇将样液稀释至０．５ｍＬ，
每管中加入０．３ｍｍｏｌ／Ｌ的ＡＢＴＳ溶液２．５ｍＬ，振
摇１０ｓ以上，避光静置１０ｍｉｎ，用７５％乙醇作空白
对照，于７４２ｎｍ下测吸光度值，计算清除率。ＢＨＴ
样品溶液浓度１．５ ｍｍｏｌ／Ｌ，分别取 ＢＨＴ 溶液
５μＬ、１０μＬ、１５μＬ、２０μＬ、２５μＬ、３０μＬ、３５μＬ、
４０μＬ、４５μＬ和５０μＬ按上述步骤进行清除ＡＢＴＳ
试验，计算清除率。
·７３·
石登红 等 山莓茎皮总黄酮的提取及其抗氧化活性
ＳＨＩ Ｄｅｎｇｈｏｎｇ ｅｔ ａｌ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｆｒｏｍＲｕｂｕｓ ｃｏｒｃｈｏｒｉｆｏｌｉｕｓ Ｂａｒｋ ａｎｄ Ｉｔｓ Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ Ａｃｔｉｖｉｔｙ
清除率＝Ａ０－Ａ样Ａ０
×１００％
式中，Ａ０为空白对照吸光度，Ａ样 为样品吸光
度。根据浓度与清除率求出一元线性方程、相关系
数，计算半数清除率ＩＣ５０值。
１．８．２ 清除ＤＰＰＨ自由基 分别吸取正交试验总
黄酮含量较高的样品溶液０．０２ｍＬ、０．０４ｍＬ、
０．０６ｍＬ、０．０８ｍＬ、０．１０ｍＬ、０．１２ｍＬ、０．１４ｍＬ、
０．１６ｍＬ和０．１８ｍＬ于１０ｍＬ比色管中，用７５％乙
醇 溶 液 定 容 至 ４ ｍＬ，振 荡 摇 匀，分 别 加 入
０．３ｍｍｏｌ／Ｌ的ＤＰＰＨ 溶液４ｍＬ，振荡摇匀，空白
对照为 ７５％ 乙醇，常温避光反应 ６０ ｍｉｎ 后于
５２３ｎｍ测吸光度值，采用以下公式计算清除率［１１］。
ＢＨＴ样品溶液浓度７．５ｍｍｏｌ／Ｌ，分别取ＢＨＴ溶
液０．０２ ｍＬ、０．０４ ｍＬ、０．０６ ｍＬ、０．０８ ｍＬ、
０．１０ｍＬ、０．１２ｍＬ、０．１４ｍＬ、０．１６ｍＬ、０．１８ｍＬ和
０．２０ｍＬ按上述步骤进行清除ＤＰＰＨ试验，计算清
除率。
２ 结果与分析
２．１ 不同因素对山莓茎皮总黄酮含量的影响
由表２可知，不同乙醇浓度、料液比、回流温度、
提取时间对山莓茎皮中总黄酮提取率均有影响。
１）乙醇浓度。随乙醇浓度升高总黄酮提取率
逐渐降低，当乙醇浓度超过９０％以后提取率下降最
明显。因此，选择６０％、７０％、８０％的乙醇浓度作为
正交试验的３个水平。
２）料液比。在同等条件下，料液比与总黄酮提
取率成正比，当料液比在１∶２０～１∶４０时，提取率
增加显著，超过１∶５０后提取率增加缓慢。考虑到
实际生产的效益，选择料液比１∶３０、１∶４０、１∶５０
作为正交试验的３个水平。
３）提取温度。提取温度在５０～７０℃，总黄酮提
取率随温度的升高而显著增大，但温度为８０℃时提
取率降低。因此，选择提取温度６０℃、７０℃、８０℃作
为正交试验的３个水平。
４）提取时间。总黄酮提取率随提取时间的增
加而增大，可见提取时间越长，总黄酮提取越充分，
但当时间超过３ｈ时，提取率明显下降。同样，考虑
实际生产的效益，选择提取时间２ｈ、３ｈ、４ｈ作为正
交试验的３个水平。
２．２ 山莓茎皮正交试验各处理的总黄酮含量
对山莓茎皮总黄酮提取的正交试验结果（表３）
进行极差分析（表４）可知，极差ＲＡ＞ＲＣ＞ＲＢ＞ＲＤ，
４个因素对山莓茎皮中总黄酮提取率的影响大小依
次为乙醇浓度（Ａ）＞回流温度（Ｃ）＞料液比（Ｂ）＞
提取时间（Ｄ）。４个因素中，乙醇浓度和回流温度的
表２ 不同乙醇浓度、料液比、提取温度和提取时间的山莓茎皮总黄酮含量
Ｔａｂｌｅ ２ Ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｆｒｏｍＲ．ｃｏｒｃｈｏｒｉｆｏｌｉｕｓ ｓｔｅｍ ｂａｒｋｓ ｗｉｔｈ ｖａｒｉｏｕｓ ｅｔｈａｎｏｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，
ｓｏｌｉｄ－ｌｉｑｕｉｄ ｒａｔｉｏ，ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ａｎｄ ｔｉｍｅ
乙醇浓度／％
Ｅｔｈａｎｏｌ
ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
总黄酮含量／
（ｍｇ／ｇ）
Ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
ｃｏｎｔｅｎｔ
料液比／
（ｇ／ｍＬ）
Ｓｏｌｉｄ－
ｌｉｑｕｉｄ ｒａｔｉｏ
总黄酮含量／
（ｍｇ／ｇ）
Ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
ｃｏｎｔｅｎｔ
回流温度／℃
Ｒｅｆｌｕｘｉｎｇ
ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ
总黄酮含量／
（ｍｇ／ｇ）
Ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
ｃｏｎｔｅｎｔ
提取时间／ｈ
Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ
ｔｉｍｅ
总黄酮含量／
（ｍｇ／ｇ）
Ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
ｃｏｎｔｅｎｔ
６０ １２．０８１ １∶２０ ０．１９ ５０ ４．６５４ ２ １４．９０７
７０ １１．２８８ １∶３０ ０．２１ ６０ １０．５４７ ３ ２０．６８７
８０ ９．５６６ １∶４０ ０．２５２ ７０ １５．４３６ ４ １５．６６６
９０ ７．１４８ １∶５０ ０．２５５ ８０ １１．０４４ ５ １１．６７７
表３ 山莓茎皮Ｌ９（３４）正交试验各处理的总黄酮含量
Ｔａｂｌｅ ３ Ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ Ｌ９（３４）ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｔｅｓｔ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ ｏｆ Ｒ．ｃｏｒｃｈｏｒｉｆｏｌｉｕｓ ｓｔｅｍ ｂａｒｋｓ
处理
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
乙醇浓度／％
Ｅｔｈａｎｏｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
料液比／（ｇ／ｍＬ）
Ｓｏｌｉｄ－ｌｉｑｕｉｄ ｒａｔｉｏ
提取温度／℃
Ｒｅｆｌｕｘｉｎｇ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ
提取时间／ｈ
Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ
总黄酮含量／（ｍｇ／ｇ）
Ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｃｏｎｔｅｎｔ
１ １（６０） １（１∶３０） １（６０） １（２） ２８．８０９
２ １ ２（１∶４０） ２（７０） ２（３） ２３．０９９
３ １ ３（１∶５０） ３（８０） ３（４） ２７．８３６
４ ２（７０） １ ２ ３ １８．１８０
５ ２ ２ ３ １ ２２．１８８
６ ２ ３ １ ２ １６．９９５
７ ３（８０） １ ３ ２ ２２．７３５
８ ３ ２ １ ３ ２１．０９５
９ ３ ３ ２ １ ４．２４１
表４ 山莓茎皮正交试验各因素水平总黄酮含量的均值与极差
Ｔａｂｌｅ ４ Ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ａｎｄ ｒａｎｇｅ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｉｎ ｔｈｅ ｓｔｅｍ ｂａｒｋ ｏｆ Ｒ．ｃｏｒｃｈｏｒｉｆｏｌｉｕｓ ａｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ
均值
Ａｖｅｒａｇｅ
乙醇浓度／％
Ｅｔｈａｎｏｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
料液比／（ｇ／ｍＬ）
Ｓｏｌｉｄ－ｌｉｑｕｉｄ ｒａｔｉｏ
提取温度／℃
Ｒｅｆｌｕｘｉｎｇ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ
提取时间／ｈ
Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ
ｋ１ ２６．５８１ ２３．２４１ ２２．３００ １８．４１３
ｋ２ １９．１２１ ２２．１２７ １５．１７３ ２０．９４３
ｋ３ １６．０２４ １６．３５７ ２４．２５３ ２２．３７０
Ｒ １０．５５７ ６．８８４ ９．０８０ ３．９５７
·８３·
贵 州 农 业 科 学
Ｇｕｉｚｈｏｕ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ
质量浓度 /(mg/mL)
Mass%concentration
清
除
率
/%
Sa
ve
ng
in
g%
ra
te
s
0
20
40
60
80
100
0%%%%%%%%%%%%%%%%%0.01%%%%%%%%%%%%%%%%0.02%%%%%%%%%%%%%%0.03%%%%%%%%%%%%%0.04 0%%%%%%%%%%%%0.02%%%%%%%%%%%%0.04%%%%%%%%%%%0.06%%%%%%%%%%%0.08%%%%%%%%%%0.1
质量浓度 /(mg/mL)
Mass%concentration
清
除
率
/%
Sa
ve
ng
in
g%
ra
te
s
0
20
40
60
80
100
总黄酮 BHT
ABTS%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%DPPH
图示 山莓茎皮黄酮和ＢＨＴ不同浓度对ＡＢＴＳ和ＤＰＰＨ自由基的清除率
Ｆｉｇ． ＡＢＴＳ ａｎｄ ＤＰＰＨ ｆｒｅｅ ｒａｄｉｃａｌ－ｓａｖｅｎｇｉｎｇ ｒａｔｅｓ ｏｆ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｂａｒｋ ｏｆ Ｒ．ｃｏｒｃｈｏｒｉｆｏｌｉｕｓ ａｎｄ ＢＨＴ
影响作用最显著，其次是料液比，影响最小的是提取
时间。根据４个因素的ｋ１、ｋ２和ｋ３值大小可知，Ａ
因素Ａ１＞Ａ２＞Ａ３，Ｂ因素Ｂ１＞Ｂ２＞Ｂ３，Ｃ因素Ｃ３＞
Ｃ１＞Ｃ２，Ｄ因素Ｄ３＞Ｄ２＞Ｄ１。因此，乙醇回流提取
山莓茎皮总黄酮的最佳工艺条件为 Ａ１Ｂ１Ｃ３Ｄ３，即
乙醇浓度６０％、料液比１∶３０、回流温度８０℃、提取
时间４ｈ，经验证试验得总黄酮提取量为２８．８１１
ｍｇ／ｇ。
２．３ 山莓茎皮黄酮清除ＡＢＴＳ和ＤＰＰＨ自由基的
能力
ＢＨＴ是人工合成的抗氧化剂，具有提高产品稳
定性和保持品质等效果，但是有对人体造成潜在伤
害的弊端［２０］。由图示可见，山莓茎皮黄酮的提取液
对ＡＢＴＳ和ＤＰＰＨ自由基具有明显的清除效果，清
除能力比ＢＨＴ高，且随着质量浓度的增加，清除率
也随着增大，但增加到一定的质量浓度时，清除率增
大幅度趋于平缓。在黄酮、ＢＨＴ抗氧化剂的质量浓
度较低时，２种溶液对ＡＢＴＳ和ＤＰＰＨ自由基的清
除率（ｙ）与质量浓度（ｘ）之间呈近似线性关系（表
５）。可见，山莓茎皮黄酮的提取液具较强的抗氧化
性，山莓黄酮提取液对ＡＢＴＳ和ＤＰＰＨ自由基清除
率达５０％时，ＩＣ５０值均低于合成抗氧化剂ＢＨＴ的
ＩＣ５０值，因此有望成为一种天然抗氧化剂。
表５ 清除率与抗氧化剂加入量的线性关系及抗氧化剂ＩＣ５０值
Ｔａｂｌｅ ５ Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗｅｅｎ ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ ｒａｔｅ ａｎｄ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ＩＣ５０ｏｆ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ
类型
Ｔｙｐｅ
试样
Ｓａｍｐｌｅ
线性方程
Ｌｉｎｅａｒ ｅｑｕａｔｉｏｎ
Ｒ２ 线性范围／（ｍｇ／ｍＬ）
Ｌｉｎｅａｒ ｒａｎｇｅ
ＩＣ５０／
（ｍｇ／ｍＬ）
ＡＢＴＳ自由基 ＢＨＴ ｙ＝３ ０１６．８７４ ８ｘ＋４．７０２ ５ ０．９７４ ２ ０．００３～０．０３３ ０．０１５
ＡＢＴＳ ｆｒｅｅ ｒａｄｉｃａｌ 山莓茎皮黄酮 ｙ＝１ ４０６．１９７ ５ ｘ＋３．８０６ ３ ０．９７３ ８ ０．００１～０．０１２ ０．００６
ＤＰＰＨ自由基 ＢＨＴ ｙ＝６９９．４５８ ０ ｘ＋４１．２５１ ４ ０．８４１ ４ ０．００８～０．０８３ ０．０１３
ＤＰＰＨ ｆｒｅｅ ｒａｄｉｃａｌ 山莓茎皮黄酮 ｙ＝２ ８６６．４５２０ ｘ＋３３．６７９ ０ ０．８６９ １ ０．００３～０．０２５ ０．００６
３ 结论
１）正交试验结果表明，乙醇回流提取山莓茎皮
总黄酮最佳提取工艺条件为：乙醇浓度６０％、料液
比１∶３０、回流温度８０℃、提取时间４ｈ，在此提取条
件下，山莓茎皮中总黄酮的含量可达２８．８１１ｍｇ／ｇ。
２）贵州春季野生山莓茎皮中总黄酮的含量高
达２８．８１１ｍｇ／ｇ，高于文献报道的山莓叶春季总黄
酮含量１．４６３ ７ｍｇ／ｇ［１６］。说明，黔产野生山莓茎皮
蕴含丰富的总黄酮资源。
３）经验证试验，山莓茎皮黄酮提取液对ＡＢＴＳ
和ＤＰＰＨ自由基清除率达５０％时，ＩＣ５０值均低于合
成抗氧化剂ＢＨＴ的ＩＣ５０值，因此具较好的抗氧化
性，有望成为一种天然抗氧化剂，为进一步开发与利
用野生山莓资源提供科学依据。
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（下转第４３页）
·９３·
石登红 等 山莓茎皮总黄酮的提取及其抗氧化活性
ＳＨＩ Ｄｅｎｇｈｏｎｇ ｅｔ ａｌ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｆｒｏｍＲｕｂｕｓ ｃｏｒｃｈｏｒｉｆｏｌｉｕｓ Ｂａｒｋ ａｎｄ Ｉｔｓ Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ Ａｃｔｉｖｉｔｙ
茎存活率均比茎尖薯苗优，而选择茎尖薯苗栽插越
冬，虽然增加株高、地下茎产量、柴根产量及数量，但
作为种源繁殖速度方面仍不及二节薯苗。因为按照
苗长２０ｃｍ的栽插要求，其增加的株高不足以增加
种苗数量，但增加的分枝可作为种苗利用。该结果
与郭源俊［１６］越冬藤育苗比种薯育苗至少可提早出
苗１５ｄ的研究结果相似。
２）叶菜型甘薯薯苗越冬试验是以越冬保证种
苗持续供应为目标，越冬薯苗存活率、越冬薯苗产
量、株高、分枝数、地下茎（苕鼻子）存活率和产量、柴
根产量和数量等８项性状指标都直接或间接影响来
年种源数量或质量，而水分和温度是保证越冬苗安
全成活的关键。因此，选择最高气温１５℃，土壤水
分６０％时扣棚，及时提高薯苗生长温度，维持土壤
水分，保证最低棚温，对薯苗生长十分有效。与罗晓
锋等［１５］菜用甘薯没有明显的生育期，因而可以周年
生产，但当气温低于１５℃时其茎叶生长停滞，低于
６～８℃则呈萎蔫状，与经霜则枯死的观点一致。
３）越冬薯苗、地下茎和柴根均是来年叶菜型甘
薯的主要种源。该试验结果表明，来年利用越冬薯
苗栽插作种，其生长速度快于地下茎萌发作种，首次
采苗时间可提前７ｄ。与蔡章棣［１４］的研究结果一
致；而利用柴根做种，其首次采苗时间比地下茎延后
１０ｄ，但后期地下茎和柴根萌发苗数较薯苗多，主要
是其腋芽数量多的缘故。
４）茎尖薯苗栽插越冬具有生长快的特性，其地
下部性状优于二节薯苗栽插越冬。该结果与万海清
等［１８］的研究结果一致。
５）试验仅选用２个品种的茎尖薯苗和二节薯
苗，关于选择栽插茎尖薯苗越冬，采取摘心栽插技术
是否能有效地提高存活率、增加分枝，提高薯苗的产
量及地下茎存活率，还需进一步研究。
［参 考 文 献］
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（责任编辑：王 海
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（责任编辑：孙小岚）
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徐 茜 等 叶菜型甘薯大棚越冬栽培薯苗存活率及其产量性状表现
ＸＵ Ｑｉａｎ ｅｔ ａｌ Ｓｅｅｄｌｉｎｇ Ｓｕｒｖｉｖａｌ Ｒａｔｅ ａｎｄ Ｙｉｅｌｄ ｏｆ Ｖｉｎｅ－ｖｅｇｅｔａｂｌｅ Ｓｗｅｅｔ Ｐｏｔａｔｏ ｕｎｄｅｒ Ｏｖｅｒｗｉｎｔｅｒｉｎｇ Ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ ｉｎ Ｇｒｅｅｎｈｏｕｓｅ