免费文献传递   相关文献

高效液相色谱法测定酸模各部位大黄素含量



全 文 :— 60—
第 4 2 卷 第 1 期温 州 医 学 院 学 报
infarction [J].J Electrocardiol,2003,36(1):11-16.
[7] Zhan ZQ,Nikus KC.Editorial:Factors influencing and sig-
nificance of ST-segment deviation in lead aVR in acute infe-
rior wall ST-eleation myocardial infarction[J].J Electro-
cardiol,2010,43(4):288-293.
[8] Tierala I,Nikus KC,Sclarovsky S,et al.Predicting the culprit
artery in acutte ST elevation myocardial infarction and in-
troducing a new algorithm to predict infarct-related artery
in inferior ST-elevation myocardial infarction:correlation
with coronary anatomy in the HAAMU Trial [J].J
Electrocardiol,2009,42(2):120-127.
[9] Fiol M,Cygankiewicz I,Carrillo A,et al.Value of electrocar-
diographic algorithm based on ups and downsof ST in as-
sessment of a culprit artery in evolving inferior wall acute
myocardial infarction[J].Am J Cardiol, 2004,94(6):709-714.
[10] 马登峰,裴志强,张艳婷,等.急性下壁ST段抬高心肌梗死直接
冠脉内支架置入术靶血管判定及预后评估 [J].中国心血管病
研究,2011,9(5):360-363.
(本文编辑:胡苗苗)
·临床经验·
高效液相色谱法测定酸模各部位大黄素含量
黄爱芳1,林崇良1,蔡进章2,林观样1
(1.温州医学院附属第一医院 药剂科,浙江 温州 325000;2.温州医学院附属第二医院 药剂科,浙江
温州 325003)
[摘 要]目的:建立高效液相色谱(HPLC)法测定酸模大黄素含量的方法,并对酸模各部位的大黄素含
量进行比较。方法:采用超声提取法制备供试品溶液,运用HPLC法测定酸模大黄素含量。Zorbax XDB-
C18色谱柱;流动相为甲醇:1%冰醋酸=70:30(V:V);检测波长:254 nm;流速:1.5 mL· in-1;柱温:
40 ℃;进样量:20μL。结果:大黄素进样在1~500μg·mL-1浓度范围内与峰面积线性关系良好(r=0.
9995),加样回收率为97.52%,RSD为2.40%(n=6)。酸模根、根茎与叶中大黄素含量分别为2.7204、
2.5966和0.0580 mg·g-1。结论:本法适用于酸模中大黄素含量的检测。酸模根与根茎中大黄素含量
高于叶中大黄素含量。
[关键词] 酸模;大黄素;高效液相色谱法;含量比较
[中图分类号] R931.6[文献标志码] B [文章编号] 1000-2138(2012)01-0060-03
酸模(Rumex acetosa L.)为蓼科植物,全草
均可入药。主要功能有凉血、解毒、通便、杀虫。现
代药学研究表明其具有抑菌、抗病毒、抗氧化、抗
肿瘤、免疫调节和抗感染作用,以及对心血管和肝
脏功能的调节作用[1]。酸模主要含大黄素、大黄素
甲醚、大黄酚、白藜芦醇、酸模素等化学成分[2]。大
黄素具有广泛的生物活性,具有抗菌抗病毒、抗感
染、改善肝肾功能、免疫调节和抗肿瘤等作用[3]。为
更好地控制药材的质量,本实验对酸模不同药用部
位进行大黄素含量测定。
1 材料
1.1仪器 美国Agilent 1100系列液相色谱仪
收稿日期:2011-07-27
作者简介:黄爱芳(1 9 6 6 -),女,浙江乐清人,主管药师。
(四元泵),紫外检测器;UPWS超纯水器(杭州永洁
达净化科技有限公司);TU-1901紫外分光光度计(北
京普析通用);KQ-5000DE型数控超声清洗器(昆山
市超声仪器有限公司)。
1.2试剂和药品 大黄素对照品(中国药品生物
制品检定所,批号:756-8902);甲醇为色谱纯;水
为超纯水;其余试剂均为分析纯。药材样品采自温
州瑞安荆谷乡,经温州医学院附属第一医院药剂科
林观样老师鉴定为蓼科酸模。
2 方法和结果
2.1色谱条件 色谱柱Zorbax Ecilpse XDB-C18
(4.6 mm×150.0 mm,5μm);流动相为甲醇:1%
冰醋酸=70:30(V:V);流速:1.5 mL· in-1;柱温:
40 ℃;进样量:20μL。
第 4 2 卷第 1 期
2012 年 1 月
温 州 医 学 院 学 报
Journal of Wenzhou Medical College
Vol.42 No.1
Jan.20 2
DOI:10.13771/j.cnki.33-1386/r.2012.01.006
— 61—
第 4 2 卷 第 1 期
2.2对照品溶液的制备 精密称取大黄素对照品
5.0 mg,以甲醇溶解并定容至10 mL,摇匀,配成
500μg·mL-1的溶液。
2.3供试品溶液的制备 取新鲜酸模根、根茎与叶
适量于10 ℃阴干。精密称取根、根茎和叶各5 g研
细,置于100 mL具塞锥形瓶中。加入甲醇25 mL,
称定,50 ℃超声提取30 min,冷却,再称定,以
甲醇补足损失的质量。取1 mL上清液,8000 r/
min离心15 min,取上清液600μL备用。
2.4线性关系考察 取500μg·mL-1的对照品溶
液,用甲醇稀释为500、200、50、10、5、1μg·
mL-1,按上述色谱条件测定,每个浓度重复3次,进
样量为20μL。以对照品峰面积积分值为纵坐标,以
进样浓度为横坐标进行线性回归,得回归方程为:
Y=24.862X+29.723(R=0.9995)。表明大黄素在
1~500μg·mL-1浓度范围内线性关系良好。
2.5精密度试验 精密吸取同一对照品溶液20μL,
按上述色谱条件重复进样6次,测得大黄素峰面积
积分值RSD为1.97%(n=6),表明本法精密度良好。
2.6稳定性试验 将供试品溶液在室温下储存,在
相同色谱条件下,精密吸取同一供试品溶液20μL,
分别于0、2、4、8、12、24 h进样,测定大黄素峰
面积积分值,得RSD=2.34%(n=6),表明供试品溶
液在试验期间基本稳定。
2.7重复性试验 按“2.3”项制备方法平行配置
同一批供试品溶液6份,分别进样测定大黄素峰面
积积分值,得RSD=2.06%(n=)。
2.8加样回收率试验 精密称取已知含量(136.02
μg·mL-1)阴干酸模根茎0.5 g各6份研细,分别
精密加入大黄素对照品(50μg·mL-1)10、20、30
mL,按样品溶液制备方法以及上述色谱条件,测定
大黄素峰面积,计算回收率,结果见表1。
A:大黄素标准品(1为大黄素色谱峰,下同);B:酸模根茎;C:酸模根;D:酸模叶
图1 HPLC图
表1 加样回收率试验结果
称样量(g)
0.5013
0.5008
0.4993
0.5003
0.4987
0.5011
样品含量(mg)
1.3955
1.3624
1.3583
1.3610
1.3566
1.3632
加入标准品含量(m g)
0.5
0.5
1.0
1.0
1.5
1.5
测定量(mg)
1.8821
1.8455
2.3708
2.3434
2.8212
2.7738
回收率(%)
97.33
96.62
101.25
98.24
97.64
94.04
平均回收率(%)
97.52
RSD(%)
2.40
黄爱芳,等:高效液相色谱法测定酸模各部位大黄素含量
— 62—
第 4 2 卷 第 1 期温 州 医 学 院 学 报
2.9样品含量测定 精密称取阴干后酸模根、根
茎和叶各5 g(n=6),按“2.3”项制备方法制备供
试品溶液,精密吸取20μL供试品溶液进样,测定
大黄素含量。HPLC图见图1,结果见表2。
3 讨论
3.1流动相的选择 预实验中我们选择了两种流
动相系统进行实验,甲醇:0.1%磷酸=70:30(V:V)
与甲醇:0.1%冰醋酸=70:30(V:V),结果均能达到
满意的分离效果,大黄素峰均达基线分离,峰型对
称。但前者出峰时间太晚,保留时间17.5 min,故
选择甲醇:0.1%冰醋酸=70:30(V:V)作为流动相。
3.2提取方法与提取条件的选择 通过与水提法
和醇提法大黄素提取率的比对,我们选择了超声辅
助提取法,具有实验操作简便,产物提取率高的优
点。制备供试品溶液过程中,选择提取溶剂的种类
以及超声提取时间和温度作为考察因素,每个因素
取三个水平进行正交试验,结果用甲醇50 ℃超声
提取30 min为最佳提取条件。离心过程低于15
min,部分样品的上清液静置后仍会出现沉淀现象,
故上清液离心时间应不小于15 min。
3.3大黄素含量比较 结果表明,酸模根大黄素含
量为2.7204 mg·g-1,酸模根茎大黄素含量为2.5966
mg·g-1,酸模叶大黄素含量为0.058 mg·g-1,各部
位大黄素含量存在差异,酸模根与根茎大黄素含量
明显高于叶中大黄素含量,具有提取价值。本实验
可为酸模药材质量控制提供实验室依据。
参考文献:
[1] 张广庆,赵海鹏,王振月,等. 酸模属植物的化学成分与药理活
性研究进展[J].世界科学技术 -中医药现代化,2008,10
(5):86-93.
[2] 王振月,左月明,康毅华,等.毛脉酸模化学成分的研究(Ⅱ)[J].
中草药,2005,36(11):1626-1627.
[3] 丁艳,黄志华.大黄素药理作用研究进展[J] .中国药理与临
床,2007,23(5):236-238.
(本文编辑:丁敏娇)
表2 样品中大黄素含量测定结果(n=6)
样品部位
酸模根(5g)
酸模根茎(5g)
酸模叶(5g)
RSD(%)
1.98
2.13
2.47
大黄素平均含量(mg·g-1)
2.7204
2.5966
0.0580
日前,从在苏州举行的全国卫生系统“号、手”创建活动表彰暨经验交流会上获悉,我校附属二院
急诊科喜获2009-2010年度卫生系统“全国青年文明号”称号。
(温州医学院附属第二医院)
我校附属第二医院急诊科获2009-2010年度
国家级“青年文明号”称号
· 消 息 ·