全 文 ：作者简介:袁胜浩 ,男 ,博士 ,讲师　　研究方向:中药化学　　＊通讯作者:陈黎 , 女 ,硕士 ,副主任药师　　研究方向:中药化学　　Tel:
(0791)8801157　　E-mail:chenli0201@sina.com。
武当青牛胆化学成分与抑菌活性的初步研究
袁胜浩 1 ,方建敏 1 ,涂青梅1 ,涂自良 1 ,聂格 2 ,陈黎1＊(1.郧阳医学院附属太和医院 ,湖北 十堰 442000;2.郧阳医学院药检学院 ,
湖北 十堰 442000)
摘要:目的　对武当青牛胆 [ Tinosporasagittata(Oliv.)Gagnep.]的化学成分进行研究 , 并初步筛选具有抑菌活性的化合物。
方法　对青牛胆干燥块根进行渗漉提取 ,用柱色谱方法(Silicagel, MCI, Rp-8等)对乙酸乙酯部位提取物进行分离纯化 ,并根
据理化性质和光谱数据(MS, 1H-NMR, 13C-NMR)进行结构鉴定。单体化合物采用比浊法测定最小抑菌浓度(MIC)。 结果　
从武当青牛胆中分离得到 5个化合物 , 分别鉴定为古伦宾 、异古伦宾 、药根碱 、金果榄苷 、巴马汀 , 其中巴马汀抑菌活性最强 , 药
根碱次之 , 古伦宾 、异古伦宾和金果榄苷最弱。结论　本实验首次以武当道地药材青牛胆为材料进行化学成分分析和单体活
性研究 , 为武当青牛胆的活性成分研究开发提供了理论依据 , 对于阐明其药理作用的物质基础具有一定的指导意义。
关键词:青牛胆;化学成分;分离;结构鉴定;抑菌活性
中图分类号:R284　　　文献标识码:A　　　文章编号:1001-2494(2010)10-0733-03
ChemicalConstituentsandantimicrobialefectofTinosporasagitata(Oliv.)Gagnep.
YUANSheng-hao1 , FANGJian-min1 , TUQing-mei1 , TUZi-liang1 , NIEGe2 , CHENLi1＊(1.TaiheHospitalAffiliated
YunyangMedicalColege, Shiyan442000, China;2.SchoolofDrugTestofYunyangMedicalColege, Shiyan442000, China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　TostudychemicalconstituentsandantimicrobialefectofTinosporaesagittata(Oliv.)Gagnep.
METHODS　ThecompoundswereisolatedfromethanolextractionandpurifiedbyMCI, Rp-8, silicagelcolumnchromatograph.The
structuresofthecompoundsweredeterminedbyphysicochemicalpropertiesandthespectrumanalysis(TLC, MS, 1H-NMR, 13C-
NMR).Theantimicrobialabilitiesofthefivecompoundsweredeterminedbycolorimetry.RESULTS　Fivecompoundswereseparated
fromTinosporasagitataandwereidentifiedascolumbin(Ⅰ ), isocolumbin(Ⅱ), jatrorrhizine(Ⅲ), tinoside(Ⅳ)andpalmatine
(Ⅴ).Theantimicrobialactivityofpalmatinewasthestrongest, jatrorrhizinewasrelativelyweak.CONCLUSION　ThecompoundⅠ
-Ⅴ allwereisolatedfromWuDangTinosporaesagitata(Oliv.)Gagnep.forthefirsttime.
KEYWORDS:Tinosporasagittata.;chemicalconstituents;isolation;identification;antimicrobialactivity
　　青牛胆为防己科植物青牛胆 [ Tinosporasagita-
ta(Oliv.)Gagnep.]的干燥块根 ,分布在秦岭以南
至南岭山脉 ,主产于四川 、湖南 、广西 、湖北 、贵州等
省区 ,是 《中国药典》收载的具有本地区特色的中药
材 ,含盐酸巴马汀 、盐酸药根碱等生物碱类活性成
分 ,具有清热解毒 ,利咽止痛之功效;主治咽喉肿痛 、
痈疽疔毒 、泄泻 、痢疾 、脘腹热痛等 [ 1] 。为了全面及
深入的研究青牛胆药理作用的物质基础 ,开发利用
我国的中药植物资源 ,特对采集于湖北武当山的青
牛胆的乙酸乙酯部位进行了化学成分分析 ,并对其
抑菌活性进行了初步研究 。
1　仪器及材料
VARINXL-200核磁共振光谱仪(TMS内标),
ZAB-3F型 EI质谱仪 (ThermoQuest公司),
AZB-HS型 FAB质谱仪(VG公司),旋转蒸发仪
RE-52A(上海亚荣生化仪器厂), WZS-I842266
折光仪(上海阿贝),薄层色谱及柱色谱硅胶(青岛
海洋化工厂)。
青牛胆样品 [ 2006年 8月采自湖北武当山 ,由湖
北中医学院药学院詹亚华教授鉴定为防己科植物青
牛胆 [ Tinosporasagitata(Oliv.)Gagnep.]的块根。
金黄色葡萄球菌 、大肠杆菌 、铜绿假单孢菌 、白色念珠
菌 、枯草芽孢杆菌(郧阳医学院基础医学院)。
2　方　法
2.1　武当青牛胆的提取与分离
称取青牛胆粗粉 4kg,用体积分数 95%乙醇渗
漉提取 ,回收溶剂 ,得到乙醇提取物 452 g。将所得
的乙醇提取物用水溶解 ,加入乙酸乙酯萃取 ,静置分
·733·中国药学杂志 2010年 5月第 45卷第 10期　　　　　　　　　　　　　 ChinPharmJ, 2010May, Vol.45No.10
层 ,在水和乙酸乙酯中间有一乳化层 ,收集乳化层 ,
精制 ,得到一针状结晶 ,即化合物 Ⅰ;乙酸乙酯部分
浓缩得到浸膏 103 g。将乙酸乙酯部位经硅胶柱色
谱(CHCl3 -MeOH=95∶5洗脱),精制 ,得到 5个化合
物:化合物 Ⅰ (3.6 g)、Ⅱ(2.2 g)、Ⅲ (0.45 g)、Ⅳ
(0.41 g)、Ⅴ(0.39 g)。
2.2　化合物最小抑菌浓度(MIC值)的测定 [ 2]
采用液体培养基连续稀释法培养后检测每个化
合物对供试菌株的最小抑菌浓度(MIC)。方法为:
①配制质量浓度为 2.00 g·L-1的药液 10 mL,用肉
汤液体培养基将各实验药按倍半稀释法稀释为 1 ,
1∶2, 1∶4 , 1∶8, 1∶16.1∶32和 1∶64,共 7个浓度 。②
实验操作在 96微孔板上进行 ,每实验微孔用移液枪
加入液体培养基 100 μL,实验菌液加 20 μL,药液
120μL,混匀后置 37℃培养 ,培养 24 h后观察 。每
个实验 3个重复 ,并设立不加实验菌的本底对照
(120μL药液 +120 μL液体培养基)和阳性对照
(盐酸小檗碱)。 ③采用酶标仪检测微孔板实验菌
的生长情况 ,检测指标为微孔中培养液体系(A值),
检测波长 620 nm。实验微孔的 A值减去同浓度的
本底对照的 A值即为实验微孔的 A净值。根据 A
净值判定药物对该实验菌的 MIC值 。
3　结果与分析
3.1　结构鉴定
化合物 Ⅰ:C20 H22 O6 ,白色晶体 , mp184 ～ 185
℃,溶于甲醇 ,丙酮 ,氯仿 。可见光及紫外灯下均显
黄色荧光 , 20%硫酸-乙醇溶液显暗黄色。 IR(KBr)
νmax1 780 , 1 705, 1 508, 1 022 , 875, 812 cm-1。说明
结构中可能有一内酯环和不饱和呋喃环存在。 EI-
MSm/z(%):359(4), 314(6), 296(3), 246(17),
231(34), 218(3), 204(6), 190(8), 161(35), 152
(100), 133(34), 121(23), 107(47), 95(18), 93
(24), 91(37), 79(23), 67(6), 55(9)。13 C-NMR
(600 MHz, CDCl3 )δ:70.6(d, C-1), 128.7(d, C-
2), 136.7(d, C-3), 80.5(s, C-4), 37.1(s, C-5),
25.5(t, C-6), 17.3(t, C-7), 47.5(d, C-8), 35.2(s,
C-9), 44.4(d, C-10), 41.8(t, C-11), 74.1(d, C-
12), 124.7(s, C-13), 108.4(d, C-14), 139.6(d, C-
15), 143.9(d, C-16), 175.5(s, C-17), 173.4(s, C-
18), 24.3(q, C-19), 28.2(q, C-20)。其数据与文
献 [ 3-4]报道的古伦宾(columbin)一致 。
化合物 Ⅱ:C20 H22 O6 , 白色晶体 , mp185 ～
186℃,易溶于甲醇 , 20%硫酸 -乙醇溶液显暗黄色 。
EI-MSm/z(%):314(36), 296(3), 272(3), 268
(4), 252(9), 246(16), 231(24), 205(49), 188
(15), 173(10), 159(26), 153(70), 133(28), 121
(56), 107(100), 105(51), 94(57), 93(54), 91
(59), 79(97), 77(72), 65(29), 55(39)。13C-NMR
(600 MHz, CDCl3)δ:69.6(d, C-1), 129.1(d, C-2),
136.7(d, C-3), 80.7(s, C-4), 38.6(s, C-5), 26.0(t,
C-6), 16.2(t, C-7), 57.4(d, C-8), 36.3(s, C-9),
41.6(d, C-10), 46.9(t, C-11), 74.2(d, C-12),
123.4(s, C-13), 108.5(d, C-14), 139.8(d, C-15),
143.8(d, C-16), 175.3(s, C-17), 173.2(s, C-18),
24.6(q, C-19), 26.0(q, C-20)。其数据与文献 [ 3-4]
报道异古伦宾(isocolumbin)一致。
化合物Ⅲ:C20H20 NO4 ,黄色针晶 , mp198 ～ 201
℃,易溶于甲醇 ,有鲜黄色荧光 , 20%硫酸-乙醇显色
显黄色 ,碘化铋钾反应呈阳性。 EI-MSm/z:278,
294, 308, 322 , 337, 352, 353。1H-NMR(600MHz, CD3
OD)δ:3.21(2H, t, J=6.6 Hz, H-5), 4.92(2H, t,
J=6.0 Hz, H-6), 3.95(3H, s, OCH3), 4.05(3H, s,
OCH3), 4.12(3H, s, OCH3), 6.81(1H, s, H-4), 7.60
(1H, s, H-1), 7.97(1H, d, J=9.6 Hz, H-12), 8.07
(1H, d, J=9.6 Hz, H-11), 8.79(1H, s, H-13), 9.72
(1H, s, H-8)。13C-NMR(600 MHz, CD3OD)δ:109.6
(d, C-1), 149.3(s, C-2), 56.2(C-2a), 149.8(s, C-
3), 57.3(C-3a), 112.4(d, C-4), 132.8(s, C-4a),
27.9(t, C-5), 57.8(t, C-6), 145.9(d, C-8), 117.8
(s, C-8a), 152.0(s, C-9), 56.6(C-9a), 144.9(s, C-
10), 123.4(d, C-11), 112.3(d, C-12), 121.7(s, C-
12a), 124.8(d, C-13), 136.6(s, C-13a), 127.4(s, C-
13b)。其波谱数据与文献 [ 5-6]报道药根碱 (jatrorrh-
izine)一致 , TLC的 Rf值与药根碱对照品一致 。
化合物Ⅳ:C26H32O11 ,白色晶体 , mp198 ～ 201
℃, 溶于甲醇 , 丙酮 , 氯仿 。13 C-NMR(600 MHz,
CD3OD)δ:71.8(d, C-1), 138.1(d, C-2), 141.3(d,
C-3), 78.1(s, C-4), 38.6(s, C-5), 23.5(t, C-6),
20.9(t, C-7), 46.0(d, C-8), 36.4(s, C-9), 56.5(d,
C-10), 49.4(t, C-11), 62.5(d, C-12), 126.0(s, C-
13), 109.8(d, C-14), 142.4(d, C-15), 145.0(d, C-
16), 177.6(s, C-17), 170.1(s, C-18), 26.9(q, C-
19), 33.9(q, C-20)。 103.6(C-1′), 72.8(C-2′),
77.9(C-3′), 71.6(C-4′), 75.1(C-5′), 56.5(C-6′),
其数据与文献 [ 6-7]报道金果榄苷(tinoside)一致 。
化合物Ⅴ:C21H22NO4 ,黄色针晶 , mp196 ～ 199
℃,易溶于甲醇 ,可见光及紫外灯下均显黄色荧光 ,
·734· ChinPharmJ, 2010May, Vol.45No.10　　　　　　　　　　　　　 中国药学杂志 2010年 5月第 45卷第 10期
20%硫酸-乙醇溶液显黄色 ,碘化铋钾反应呈阳性 。
1H-NMR(600MHz, CD3 OD)δ:3.24(2H, q, J=6.6
Hz, H-5), 4.94(2H, t, J=6.6Hz, H-6), 3.88(3H, s,
OCH3), 3.93(3H, s, OCH3 ), 4.04(3H, s, OCH3),
4.14(3H, s, OCH3), 6.99(1H, s, H-4), 7.60(1H, s,
H-1), 7.96(1H, d, H-12), 8.05(1H, d, J=9.6 Hz,
H-11), 8.74(1H, s, H-13), 9.70(1H, s, H-8)。13 C-
NMR(600 MHz, CD3 OD)δ:109.6(d, C-1), 150.1
(s, C-2), 56.6(C-2a), 150.8(s, C-3), 57.3(C-3a),
112.4(d, C-4), 134.0(s, C-4a), 26.9(t, C-5), 56.2
(t, C-6), 145.9(d, C-8), 120.8(s, C-8a), 152.6(s,
C-9), 62.1(C-9a), 144.4(s, C-10), 56.3(C-10a),
123.9(d, C-11), 111.8(d, C-12), 122.1(s, C-12a),
127.1(d, C-13), 138.4(s, C-13a), 129.0(s, C-
13b)。其波谱数据与文献 [ 6-8]报道的巴马汀(palma-
tine)一致 , TLC的 Rf值与巴马汀对照品一致。
3.2　抑菌活性
从武当青牛胆提取分离得到的 5个单体化合物
对 5种常见微生物的最低抑菌浓度测定结果(盐酸小
檗碱为阳性对照)见表 1, 5个化合物均有一定的抑菌
活性 ,但是抑菌能力存在一定的差异。在分离得到的
5个化合物中 ,巴马汀的抑菌谱最大 ,抑菌作用也最
强 ,药根碱次之 ,古伦宾 、异古伦宾和金果榄苷最弱。
4　结　论
武当青牛胆为武当山地区的道地药材 ,本文首
次对武当青牛胆进行化学成分分析 ,分离得到 5个
生物碱类化合物 ,抑菌实验结果表明 ,巴马汀 、药根
碱等生物碱类化合物可能即为武当青牛胆抗菌消炎
的主要活性成分。本实验为武当青牛胆的活性成分
研究开发提供了理论依据 ,对于阐明武当青牛胆药
理作用的物质基础具有一定的指导意义 。
表 1　化合物 1 ～ 5对 5种菌株的最低抑菌浓度 .mg· mL-1
Fig.1　MICofthe5compounds.mg· mL-1
Compound Staphylococusaureus E.coli P.aeruginosa Candicaalbicans Bacilussubtilis
Columbin 1.00 >1.00 - >1.00 0.50
Isocolumbin >1.00 >1.00 - 1.00 0.50
Jatrorhizine 0.50 - 1.00 - 0.50
Tinoside 1.00 - 1.00 1.00 -
Palmatine 0.50 1.00 0.50 0.50 0.25
BerberineHydrochloride 0.25 0.50 1.00 1.00 0.25
REFERENCES
[ 1] 　Ch.P(2005)VolⅠ (中国药典 2005年版 .一部)[ S] .
2005:150-151.
[ 2] 　YANGY, YEXL, LIXG.Antimicrobialefectoffouralkaloids
fromrhizomecoptidis[ J] .LishizhenMedMaterMedRes(时珍
国医国药), 2007, 18(12):3013-3014.
[ 3] 　VERSHAW, RAKESHM, RANDHIRSK.Cordioside, aclero-
danefuranoditerpeneglucosidefromTinosporacordifolia[ J] .
Phytochemistry, 1991, 38(2):447-449.
[ 4] 　HANSA, HANSH.Clerodane-typediterpenesandotherconstitu-
entsofpenianthuszenkeri[ J] .Phytochemistry, 1991, 30(6):
1957-1962.
[ 5] 　GUOYY, LINLB, SHENJ.Isolationandindentitlcationofal-
kaloidsfromTinosporahainanens[ J] .ActaPharmSin(药学学
报), 1998, 33(5):350-354.
[ 6] 　CHANGHM, EI-FISHAWYAM, SLATKINDJ, etal.Quan-
ternaryalkaloidsofTinosporacaplilipes[J] .PlantaMed, 1984,
50(1):88-90.
[ 7] 　AMARENDRAP, ARUNDHATIG, ALOKKM.Alkaloidsof
stephaniaglabra[ J] .PlantaMed, 1980, 40(2):333-336.
[ 8] 　HEKJ, LIUBM, LUWJ.ChemicalconstituentsfromMahonia
duclouxianaGanep(Ⅰ )[ J] .WestChinaJPharmSci(华西药
学杂志), 2008, 23(2):172-173.
(收稿日期:2009-09-01)
《现代中药质量控制及技术 》已出版
由高文远教授编写的《现代中药质量控制及技术》已于 2010年 3月在科学出版社出版发行 , 该书从中药质量控制的重要
性和必要性出发 , 叙述了中药质量控制的发展历史 、发展趋势;详细介绍了中药的来源鉴别 、性状鉴别 、显微鉴别 、理化鉴别和
新技术在中药鉴别中的应用;高效液相色谱 、超高压液相色谱 、高效毛细管电泳 、色谱 -质谱联用技术等色谱技术在中药质量
控制中的应用;还包括中药指纹图谱质量控制技术及生物效价 、代谢组学 、分子生物学等现代质量控制技术。此外 , 还专辟章
节介绍了含不同类型活性成分中药及不同剂型中药 , 中药材 、中药饮片和中成药 ,以及中药保健食品的质量控制。既可以供
中药和药学相关领域的科研 、教学人员使用 , 也可以作为中药和药学相关领域的研究生 、本科生参考。
当当网 、卓越网 、新华书店及医学专业书店有销售。定价 120.00元。免邮寄挂号费用 , 联系人:温晓萍 , 电话:010-
64034601, 64015165, 地址:北京市东黄城根北街 16号 科学出版社(100717)(请在汇款附言注明您购书的书名 、册数 、联系电
话 、发票等)。 [本刊讯 ]
·735·中国药学杂志 2010年 5月第 45卷第 10期　　　　　　　　　　　　　 ChinPharmJ, 2010May, Vol.45No.10