全 文 ：第 32 卷 第 3 期 暨南大学学报(自然科学版) Vol． 32 No． 3
2011 年 6 月 Journal of Jinan University(Natural Science) Jun． 2011
［收稿日期］ 2010 － 11 － 08
［基金项目］ 广东省自然科学基金团队项目(8351063201000003) ;教育部新世纪优秀人才计划项目 (NCET － 08 － 0612) ;中央高校基本科研
业务费专项资金项目(21609202) ;广东省高层次人才项目(JN2010)
［作者简介］ 叶青美 (1985 －) ，女，硕士研究生，研究方向:天然药物活性成分及质量标准研究
通讯作者:江仁望，男，教授．博士生导师
RP-HPLC法测定火炭母药材中鞣花酸的质量分数
叶青美1， 江仁望1，2， 田海妍1， 姜 飞1， 张建龙1， 叶文才1，2
(暨南大学 1．中药及天然药物研究所;
2．中药药效物质基础及创新药物研究广东省高校重点实验室，广东 广州 510632)
［摘 要］ 采用色谱柱为 Welch Materials XB-C18 柱 (4. 6 mm × 250 mm，3 μm) ，流动相为 V甲醇 ∶
V体积分数为0. 2%的甲酸水溶液 = 45∶ 55，流速为 0. 8 mL·min
－1，柱温为 30 ℃，检测波长为 357 nm．结果显示，鞣花酸对照品的
峰面积与进样量在 0. 067 ～ 2. 68 μg 的范围内呈良好的线性关系 (r = 0. 999 9) ，该方法的平均回收率为 99. 6 %，
RSD为 1. 09%，测得 10 份样品中鞣花酸的质量分数在 0. 592 ～ 3. 439 mg·g －1范围内．本方法快速、简便、重复性
好，可用于火炭母药材中鞣花酸的含量测定．
［关键词］ 火炭母; 鞣花酸; RP-HPLC法; 含量测定
［中图分类号］ R914． 1 ［文献标志码］ A ［文章编号］ 1000 － 9965(2011)03 － 0300 － 04
Determination of Ellagic acid in Polygonum chinense L． by RP-HPLC
YE Qing-mei1， JIANG Ren-wang1，2， TIAN Hai-yan1， JIANG Fei1， ZHANG Jian-long1， YE Wen-cai1，2
(1． Institute of Traditional Chinese Medicine and Natural Products;2． Guangdong Province Key
Laboratory of Pharmacodynamic Constituents of TCM and New Drugs Research，Jinan University，Guangzhou 510632，China)
［Abstract］ Ellagic acid in Polygonum chinense L． was determined by a RP-HPLC method using s XB-
C18 column (4. 6 mm × 250 mm，3 μm)． The mobile phase consisted of methanol and 0. 2% formic
acid at a flow rate of 0. 8 mL /min． The detection wavelength was set at 357 nm and the column tempera-
ture was 30 ℃ ． The results show that the linear range of ellagic acid was 0. 067 ～ 2. 68 μg (r =
0. 9999)． The average recovery was 99. 6 % (RSD = 1. 09 %) ，and the content of ellagic acid in ten
samples was in the range of 0. 592 ～ 3. 439 mg·g －1 ． This method is found to be quick，simple and re-
producible，and it is quite suitable to be used for the determination of ellagic acid in Polygonum chinense L．
［Key words］ Polygonum chinense L．; ellagic acid; HPLC; content determination
火炭母为蓼科 (Polygonaceae)蓼属 (Polygo-
num)植物火炭母 (Polygonum chinense L．)的干燥
全草，是岭南地区常用的一味中草药，同时也是多种
广东凉茶的主要成分之一［1 － 2］．其性凉，味酸、涩，归
肝、脾经，具有清热利湿、凉血解毒、平肝明目等功
效，临床上用于治疗痢疾，咽喉肿痛，肝炎等症［3］．
现代药理研究表明，火炭母主要具有抗炎、抗菌、抗
病毒、抗氧化和降压等作用［3 － 4］．其主要成分为黄酮
类［5］、酚酸类［6］和甾体类［7］化合物等． 火炭母的应
用广泛，曾收载于 1977 年版《中国药典》［8］，在 2004
年被收入《广东省药材地方标准》［9］，但一直未建立
指标成分的含量测定方法． 本课题组在对火炭母的
研究过程中，发现其鞣花酸(ellagic acid，EA)的含
量很高，且鞣花酸(ellagic acid，EA)具有抗炎［10］、
抗氧化［11 － 12］、抗肿瘤［13］及抗病毒［14］等多种药理活
性，与火炭母药材的主要功效一致． 因此，鞣花酸
(ellagic acid，EA)可作为火炭母药材的指标成分．
本实验首次建立了 HPLC测定火炭母中鞣花酸含量
的方法，并对广州市 10 个不同地区的火炭母药材中
鞣花酸含量进行了测定，为中药火炭母及相关成方
制剂的质量评价提供科学依据．
1 仪器与试药
Agilent-1200 型高效液相色谱仪 (G1311A四元
泵，自动进样器，DAD 检测器，G1316A 紫外检测
器) ，色谱柱:Welch Materials，XB-C18 色谱柱 (4. 6
mm ×250 mm，3 μm)．甲醇为色谱纯 (Dima公司) ，
水为纯净水 (屈臣氏公司) ，其他试剂均为分析纯．
火炭母药材购自广州市不同地区(越秀区、海
珠区、荔湾区、天河区、萝岗区、白云区、番禹区、黄埔
区、花都区、南沙区)药店，经暨南大学药学院周光
雄教授鉴定为蓼科植物 Polygonum chinense L． 的干
燥全草．对照品鞣花酸购于上海晶纯试剂有限公司，
其纯度大于 98% ．
2 方法
(1)色谱条件 Welch Materials，XB-C18 色谱
柱 (4. 6 mm ×250 mm，3μm) ，柱温为 30 ℃，流速为
0. 8 ml·min －1，检测波长为 357 nm，进样量为 10
μL，流动相为 V甲醇 ∶ V体积分数为0. 2%的甲酸水溶液 = 45∶ 55．
(2)对照品溶液的制备 精密称取鞣花酸对照
品 6. 7 mg，置于 25 mL 容量瓶中，加入甲醇溶解并
定容至刻度，再从中取 0. 5 mL，置于 1 mL 容量瓶
中，加入甲醇并定容至刻度，制成 0. 134 mg·mL －1
的对照品储备液．
(3)供试品溶液的制备 取本品粉末过 60 目
筛，精密称取 0. 500 g，置于具塞锥形瓶中，精密加入
甲醇溶液 10 mL，精密称定重量，超声提取 60 min
(100 W，40 kHz) ，温度 40 ℃ ．放置至室温后，精密
称定重量，以纯甲醇溶液补足减失的质量． 滤过，精
密吸取续滤液，摇匀，经微孔滤膜 (0. 45 μm)过滤，
即得供试液．
(4)线性关系考察 精密量取上述对照品溶液
适量，分别以 0. 5、1、2、4、8、16、20 μL注入 HPLC
色谱仪进行分析．以峰面积为纵坐标，鞣花酸的进样
量 (μg)为横坐标进行回归，结果在 0. 067 ～ 2. 68
μg内，鞣花酸的进样量与峰面积呈良好的线性关
系，其回归方程和线性相关系数分别为 Y = 16. 66 X
－ 47. 863，r = 0. 999 9．
(5)精密度试验 精密吸取同一鞣花酸对照品
溶液 4 μL，按照上述色谱条件连续重复进样 6 次，
测定鞣花酸的峰面积值．结果 RSD 为 0. 77%，表明
精密度良好．
(6)重复性试验 取同一火炭母药材粉末
(No． 4)6 份，按供试品的方法制备，在上述色谱条
件下进行分析，测定鞣花酸的峰面积，样品中鞣花酸
平均质量分数为 0. 947 mg /g，RSD 为 0. 92 %，表明
样品处理过程和测定方法均有良好的重现性．
(7)稳定性试验 精密吸取同一供试液 (No．
4)10 μL，分别于 0、4、8、14、18、24 h进样，记录鞣花
酸色谱峰面积，计算 RSD 为 0. 79%，表明供试品溶
液在 24 h内是稳定的．
(8)回收率试验 取本品粉末过 60 目筛，精密
称取 6 份，每份约 0. 25 g，分别精密加入 0. 23 mg 的
鞣花酸对照品，按供试品溶液制备方法操作，精密吸
取 10 μL，注入 HPLC 色谱仪，照上述色谱条件测
定，记录鞣花酸的峰面积，以外标法计算含量，鞣花
酸的平均回收率为 99. 6 %，计算 RSD 为 1. 09 %
(n = 6)．
(9)样品分析 将从广州市不同地区收集的 10
份样品分别按供试品溶液制备项下方法处理，分别
精密吸取对照品溶液和供试品溶液各 10 μL，注入
HPLC色谱仪，按上述色谱方法进行测定，平行操作
3 次，外标法计算含量．
3 结果
(1)按上述色谱方法，对照品溶液与供试品溶
液(No． 4)各 10 μL，注入 HPLC 色谱仪进行测定，
得到对照品及供试品的色谱图见图 1． 在 20 min 内
供试品中的鞣花酸与其他成分达到了有效分离，且
分离度大于 1． 5．
(2)样品分析结果:10 份样品按上述色谱方
法，分别精密进样 10 μL，获得各药材的色谱图见图
2，可见各样品的色谱图较为一致，但色谱峰的高低
略有不同．
103第 3 期 叶青美，等:RP-HPLC法测定火炭母药材中鞣花酸的质量分数
(A)与供试品的 HPLC图 (B)
图 1 鞣花酸对照品的 HPLC图及紫外光谱图
图 2 10 份样品的 HPLC图
(3)样品含量测定结果:用外标法计算鞣花酸
的含量，所得结果见表 1．
表 1 10 份样品中鞣花酸的质量分数测定结果
序号 收集地区 n w平均值 /(mg·g
－1)
1 越秀区 3 1． 438
2 海珠区 3 1． 709
3 荔湾区 3 1． 446
4 天河区 3 0． 966
5 萝岗区 3 1． 368
6 白云区 3 0． 854
7 番禹区 3 1． 054
8 黄埔区 3 0． 592
9 花都区 3 1． 386
10 南沙区 3 3． 439
4 讨论
(1)供试品制备方法的考察 根据溶剂极性大
小不同，实验中分别采用甲醇、乙醇、丙酮和乙酸乙
酯超声提取，超声时间采用 30、45 和 60 min 进行了
考察，发现用甲醇为溶剂，超声 60 min提取最完全．
(2)色谱条件的选择 本实验取鞣花酸对照品
适量，用甲醇制成每 1 mL 约含 10 μg 样品的溶液，
在 190 ～ 400 nm 波长范围内进行扫描，鞣花酸有两
个最大吸收波长 268 nm 及 357 nm，其中在 357 nm
下，基线平稳且干扰较少，故确定特征吸收波长 357
nm为检测波长．
(3)流动相的选择 本实验选取不同比例的流动
相 (甲醇 －水、乙腈 －水)和不同的流速 (1、0. 8 mL·
min －1)，以峰的对称因子为指标进行实验，结果表明 10
份样品在流动相为 V甲醇 ∶ V体积分数为0. 2%的甲酸水溶液 =
45∶ 55，流速为 0. 8 mL·min －1，柱温为 30 ℃条件下
鞣花酸色谱峰的对称因子为 1，并且在 20 min内，鞣
花酸与样品中的其他色谱峰可达到基线分离．
本实验采用超声提取的方法制备火炭母供试
液，以鞣花酸为对照品建立了火炭母中鞣花酸含量
的 RP-HPLC 测定方法，该方法快速、简便、重复性
好，可用于火炭母中鞣花酸的含量测定．同时测定了
10 份火炭母药材中鞣花酸的质量分数，其质量分数
范围为 0. 592 ～ 3. 439 mg·g －1，最高质量分数为最
低质量分数的六倍，说明广州市不同地区的火炭母
药材中鞣花酸的含量差别较大． 鞣花酸为火炭母中
的主要成分，且其药理活性与火炭母药材基本一致．
因此建立火炭母药材中鞣花酸的含量测定方法，以
控制该药材质量很有必要．
此外，鞣花酸为自然界的“明星”分子，生物活
性多样［15 － 16］且分布广泛，既存在于多种水果
中［17 － 18］，又存在于多种中草药中并为其活性成
分［19］．因此本实验建立的鞣花酸的含量测定方法对
于这些食品和草药的质量控制具有重要参考意义．
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［责任编辑:黄建军］
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