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中 药蛇莓的 薄层色谱 鉴别 及含量测定研究
李玲玲 ， 黄 炎 ， 毕 志 明
中 国 药 科 大 学 天 然 药 物 活 性 组 分 与 药 效 国 家 重 点 实 验 室 ， 南 京
摘 要 目 的 ： 建 立 中 药 蛇 莓 的 薄 层 鉴 别 及 含 量 测 定方 法 。 方 法 ： 采 用 薄 层 色 谱 法 为 定 性 鉴 别 方 法 ； 用
法 测 定 蛇 莓 中 鞣 花 酸 的 含 量 ， 色 谱 柱 为 汉 邦 柱 （ 以 乙 腈 磷
酸 水 为 流 动 相 进行 梯 度 洗 脱 ， 流 速 为 检 测 波 长 为 ！！ ， 柱 温 为 。 ： 。 结果 ： 不 同 产 地 批
蛇 莓 药 材 的 薄 层 色 谱斑 点 清 晰 ， 且供试 品 色 谱 中 ， 在 与 对 照 药 材 色 谱 相 应 的 位 置 上 ， 显 相 同 颜 色 斑 点 ； 鞣 花 酸
在 进 样 量 丨 问 范 围 内 有 良好 的 线 性 关 系 （ 「 ， 平 均 加 样 回 收 率 为
。 结 论 ： 定 性 定 量 方 法 快 速 、 准 确 、 专 属 性 强 、 重 复 性 好 ， 可 用 于 蛇 莓 药 材 的 质 量 控 制 。
关键 词 蛇 莓 ； 薄 层 鉴 别 ； 高 效 液 相 色 谱 法 ； 鞣 花 酸
中 图 分类 号 文献标 志 码 文章编号
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中药 蛇 莓为 蔷 激 科 植 物 蛇 莓 加 的 干燥 全 草 ， 为 民 间 常用 草 药 ， 另 名
三 匹风 、地莓 、 一 点红 、 蛇含草 、 宝珠草 、 野杨 梅等 ， 其
基金 项 目 版《 中 国 药 典 》 国 家 药 品标 准 提升项 性味甘 、苦 、 寒 ， 具有 清 热凉 血 、 消 肿 解毒 之功 效 ，
作者 简 介 李玲玲 ， 女 ， 领 士 研 究 生 ， 主要 从事 中 药 药 效 物 质基 袖 与 用 于治 疗热病 、 原 痛 、 病 疾 、 咽 喉 月 中 痛 、 咳嗽 吐 血 、 蛇
质 量控 制 研 究 ： 虫 咬伤 等症 。 蛇莓临 床 应 用历 史 悠 久 ， 市场 流 通 量通讯作者 毕志 明 ， 男 ， 副 教授 ， 主要 从 事 中 药 药 效物 质 基础 与 质
量控 制 研 究 。 ： 大 ， 但 《 中 华人 民 共和 国 药 典》 年 版一部中 并无
中 国新药杂志 年第 卷 第 期
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蛇莓质量标 准 ， 仅 见 附 录 成方 制剂 中 本 版 药 典 出 ， 晾干 ， 喷 以 香草 醛浓硫 酸溶液 在 加
未 收载 的 药 材 和饮 片 ” 中 有 蛇莓 的 名 称 和 来 源 描 热至斑点 显 色清晰 。 结果 表 明 ， 批 不 同 产地 的供
述 。 文献 报道 ， 蛇莓药 材 中 鞣 花 酸 含量较 试品 色谱 中 ， 在与对 照药材 色谱相应 的位置上 ， 显相
高 ， 且鞣 花酸具有抗病毒 、抗菌 、抗肿 瘤 、 抗氧化及 增 同 颜色斑点 。 见 图 。
强 免疫等药理 作用 ， 为 蛇莓 的 主要 活性 成分 。 为 完
善 和提 升蛇莓 的 质量 标准 ， 我们 收集 了 批不同 来
源 的蛇莓 药材 ， 采用 薄 层 色谱法及 高 效液 相 色谱法
对其进行定 性和定 量分析 研究 ， 建 立 了 中 药 蛇莓 的
薄层 鉴别 和含 量测 定 方 法 。 该方法 专 属性强 ， 灵 敏
度 准确度 高 ， 可 为蛇莓 的 质量控 制 方法 的完 善 和提
升 提供科学 依据 。
材 料
高 效 液 相 色 谱 仪 （ 包 括
二元泵 、 自 动 进 样 器 、 检 测 器 、
色谱工 作 站 ， 美 国 公 司 ） ； ： 四川 成都 ： 安徽 安 庆 ； ： 广西 玉 林 ： 湖 北 武
型数控 超声波清 洗器 （ 昆 山 禾 创超 声 仪器 有 汉 江苏南京 （ 对 照药材 ） ； 河 北 保 定 辽 宁
限公司 ） ； 十 万分之 一 电 子天平 （ 德 沈 阳 江 苏 盱 眙 江苏 无锡 江 苏苏 州
国 公 司 ） 。 图 不 问 产地 蛇萄 的 薄层 色谱 图
鞣 花酸对 照品 （ 批号 ： 纯度 上
海 同 田 生物技 术有 限公 司 ） ， 丨 批 蛇 莓 药材 收 集 于 鞣花酸 的 含 量测定
国 内 相 关产地 ， 均 经 中 国 药科大 学 生 药学教 研室 毕 对照 品 溶液的 制 备 精 密称取鞣花 酸 ，
志明 副 教授鉴定 ， 确 定为蔷薇科 植物 蛇莓 置于 的 容量瓶 中 ， 加 乙 醇溶 解并 定容 ， 制
的 干燥全 草 。 薄 层 色 谱 中 对 成 对照 品 储 备液 。
照药材 采 自 江苏南京 中 国 药 科 大学 校 园 ， 凭 证标 本 供试品 溶 液的 制 备 取本 品 粉 末 （ 过三 号 筛 ）
存 放于 中 国 药 科大 学生药 学 教研室 。 定量 实 约 精 密 称 定 ， 置 具塞 锥形 瓶 中 ， 加 乙 醇
验 中 以批号 的 样 品 进 行 方 法学考 察 。 硅 密 塞 ， 超 声处 理 （ 功率 频 率
胶 薄层 板 （ 烟 台 市 化学工业研究 所 ） ， 乙 腈 为 色谱 取 出 ， 放置至 室 温 ， 用 乙 醇补 足丢 失 重
纯 ， 水 为 重蒸 水 ， 其余为分析纯 。 量 ， 滤 过 ， 取 续 滤 液 ， 以 微 孔 滤 膜 （ 滤 过 ，
、
即 得 。
系 统适 用 性试 验
薄层 色 谱 鉴别 色谱 条件 色谱柱 ： 汉邦 柱 （
供 试 品 及 对照 品 溶 液 的 制 备 取 本 品 粉 末 ； 流 动 相 ： 以 乙 腈 为 流 动 相 以 水
， 加 甲 醇 ， 超声 处理 ， 滤 过 ， 滤 液 蒸 （ 含 磷 酸 ） 为 流动 相 梯 度 洗脱 ， 洗脱程 序
干 ， 残渣加 甲 醇 使 溶 解 ， 作 为供试 品 溶 液 。 另 如下 ；
取蛇莓 对照 药材 ， 同 法制 成对照药材溶液 。 。 流
薄 层 色 谱 条 件 及 其 结 果 照 薄 层 色 谱 法 速 、柱 温 ； 检 测 波长 ： 进
年版 《 中 国药 典 》 一 部 附录 试验 ， 吸取 上 样 量 ： 。 理论 板 数 按 鞣 花 酸 计 算 应 不 低 于
述溶液 ， 点于 同 一硅 胶 薄 层板 上 ， 以 二 甲 苯 。 在上 述色谱 条件下 ， 对 照 品 和 供试 品 的 色谱
丙酮 乙醇 氨水 （ 为展开剂 ， 展 开 ， 取 见 图 。
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A B

J V ^ 一
图 鞣花 酸 对照品 （ 及供试 品 （ 的 色 谱图
线 性关 系 考 察 将 “ ” 项下 的 对 照 品储备液 度 ： 取 — 的鞣 花酸 对 照 品 溶 液 ， 按 拟 定
依次精密稀 释为 ， 色谱条 件 ， 将对照 品溶 液每天进 样 次 ， 连续 ， 测
浓度 的 梯度溶 液 ， 按 照拟 定 的 色谱 定 鞣花 酸峰 面 积 ， 计算 。 结果 表 明 仪
条件分 别进样 自 动 进 样 器 ） 进 行 分析 ， 测 定 器 精 密度 良好 。
峰面 积 ， 以 进 样浓 度 （ 为 横坐 标 ， 峰 面 积 （ 为纵 重 复 性 试 验 称 取 蛇 莓 药 材 粉 末 （ 批 号 为
坐标 ， 以 最 小 二 乘 法 分 别 计 算 得 回 归 方 程 ： 份 ， 每份 精 密称 定 ， 按 “ 供试 品
， 结果显示 鞣花 溶 液 的 制 备 ” 项 下 方法 制 备 供 试 品 溶 液 并 记 录 峰
酸在进 样量 范 围 内 有 良 好 的 线 性 面 积 ， 以 外 标 法 计 算 鞣 花 酸 的 平 均 含 量 为
关系 。 计算 。 结 果 表 明 本 方 法 重
检 测 限 与 定量 限 测 定 先进一针空 白 溶剂 ， 测 复性 良 好 。
出 噪 音 ， 再进 已知浓 度 的 对照 品 溶液 ， 根 据其 对应 的 稳定性试验 取 “ 重 复性试验 ” 项 下一份 供试
峰高 值 ， 将 对照 品溶 液 稀释 至 约 倍信 噪 比 的浓 度 品 溶液 ， 分别于 ， ， ， ， 进 样 ， 记录其 中 鞣
测 得检测 限 为 将 对照品 溶 花酸 的峰 面积 ， 计 算 测定 结 果 的 表 明
液稀释至约 倍信 噪 比 的 浓 度 （ ， 测 得定 供试品 溶 液在 内 稳定性 良 好 。
量限 为 ， 并 且在 定 量 限处 重 复 进 样 回 收率试验 取 已 知含量 的蛇莓 药材 粉末 （ 批
次 ， 计算 峰 面积 的 。 号 为 ， 鞣 花 酸 的 含 量 为 ， 平
精 密 度 试 验 日 内 精 密 度 ： 取 “ 线 性 关 系 考 行 份 ， 分别 精 密加 入鞣 花 酸对照 品 适量 ， 按 “ 供试
察 ” 项 下 鞣花 酸 浓 度 为 — 的 对 照 品 溶 品 溶 液 的 制 备 ” 项 制 备 供试 品 溶 液 并 记 录峰 面 积 ，
液 ， 按拟定 色谱条件 ， 将 对 照 品 溶 液 连 续进样 次 ， 计算 平 均 加 样 回 收 率 为
测定 鞣 花 酸 峰 面积 ， 计算 ； 日 间 精 密 （ 。 结 果 见表 。
表 加样 回 收率试验 结果
药材量 含有量 加 人 量 测 得总量 回 收率 平 均 回收率
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3 . 9 供试品测 定 按 拟定 的色谱方 法测 定 了 批 样 品 ， 结 果 见表 。
表 批样 品 中 鞣花 酸的 含量 ％ ，
编号 批号 来 源 鞣花酸平均含 量
年 月 采 自 江苏南京
年 月 购 自 四 川 成都
年 月 购 自 安徽安庆
年 月 购 自 广西玉林
年 月 购 自 湖 北武汉
年 月 购 自 河北保定
年 月 购 自 辽宁 沈阳
年 月 购 自 江苏盱眙
年 月 购 自 江苏无锡
年 月 购 自 江苏苏州
耐用 性试验 采用 系列 高 效 液 在定 量实验研究 中 ， 关于 供试品 溶液 的 制备方
相 色谱仪 ， 考 察 种 不 同 的 柱 对 分离 度 的 影 响 ， 法 ， 分别考察 了不 同浓度 甲 醇 、 乙醇和水饱和正 丁醇
结果鞣花酸均能得 到较好 分离 ， 各项 参数 见表 。 等 种溶剂进 行加 热 回 流 （ 、 冷 浸 、 超
声 提取方法 的 提取效率 结果表 明 乙 醇
表 种 色谱柱 对鞣 花酸 的 分离 参数 超声 提取效率较 高 且 操作 简便 ； 还 对 超 声 提取
色谱 柱 鞣花酸分离 度 理论板 数 对 称因 子 进 行 了 考 察 ， 结 果 表 明 超 声 提 取
巳 提 取完 全 。 经 紫 外 光谱 扫 描 ， 鞣 花 酸 在
° 波长处 有最大吸收 ， 故选择 为检测 波
长 。 本实 验 采 用 法 测 定 蛇 莓 中 鞣 花 酸 的 含
量 鞣花酸 与相邻峰 的分离 度均 大 于 符合 中 国
药典含量测定 的 要求 ， 为 蛇莓质量控 制 方法 的完善
和提 升提供科学依据 。
“ 蛇莓质量标准 研究 ” 为 版 《 中 华 人 民 共
和 国药典 》 药品 标 准提升 项 目 ， 本 实 验 收 集 了 国 内 ：
相 关产地 批蛇莓 药材 并进 行 了 详细 的定 性定量 丨 国 家中 医药管 理局 《 中 华本草 》 编委会 中 华本草 上 海 ：
实验研究 。 在 定性 薄 层 色谱鉴 别 实验 中 ， 提 取条件 ，
方面分别对 提取 溶剂 （ 甲 醇 、 乙 醇 、 水 饱 和正 丁 醇 ）
丄 … 国 医 药科技 出 版社 ， 附录和 提取方式 （ 超 尸 、 加 、 、 回 、 索 氏 取 郭增 军 潭林 徐颖 等 餘花酸类化合物在植物界的分布及其
、 冷浸 以 及提取时 间进行考 察 ， 并 确定 用 甲 生 物活性 ⑶ 天然产 物研究 与开发 ：
醇 超声 处理 来 提 取 。 在 展 开 剂 系 统 王 予褀 斯建勇 ， 刘 新 民 等 蛇莓中鞣花酸 和短叶苏木酚羧 酸
方面 比较 了 正丁醇 冰醋酸 三 氯 甲 焼 甲 醇 和 的 分离鉴 定 含量 测定 天 然产物 究与开 发 ，
二 甲 苯 丙酮 乙 醇 氨水 等展开剂 ， 确定 用 二 甲 苯 丙 （
酮 乙 醇 氨水 （ 为 展 开 剂 （ 温 度 编 辑 郭 超 伟 接 受 日 期 ：雇善
相对湿度 。
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