全 文 ：分光光度法测定赤胫散不同部位总黄酮含量研究
李玉华, 张 磊
（毕节学院化学与化学工程学院， 贵州 毕节 551700）
收稿日期：2011-05-15
基金项目：贵州省教育厅青年项目，项目编号：20070085；毕节地区科技局计划项目，项目编号：2007046
作者简介：李玉华（1966-），男，贵州毕节人，毕节学院化学与化学工程学院高级实验师。 研究方向：天然产物化学研究。
摘 要：用超声提取法制备样品溶液，提取溶剂为 70%乙醇水溶液，浸提时间为 40 min，提取温度为
30℃，以芦丁为标准对照品，用 NaNO2、Al(NO3)3和 NaOH 显色，采用分光光度法于 510nm 波长处测定
赤胫散中总黄酮的含量。 实验表明：总黄酮在 0.008-0.040mg/mL 范围内线性关系良好，其回归方程为：
A=9.5786C+0.0068，相关系数 R2=0.9987，其根、茎、叶中总黄酮含量分别为 60.17 mg/g、28.07 mg/g、
49.73 mg/g(n=3)，RSD值分别为 1.75%、2.83%和 2.19%。最后得出结论:赤胫散中总黄酮在根部的含量最
高，叶部次之，茎部最低。
关键词： 赤胫散； 不同部位； 光度法； 总黄酮
中图分类号：069 文献标识码：A 文章编号：1673-7059-（2011）08-0089-05
黄酮类化合物又叫生物类黄酮， 其分布广， 种类多， 大量存在于蓼属植物中， 具有抗菌、 消炎、
抗突变、 降压、 清热解毒等作用， 除此之外， 也具有抗氧化、 抗癌、 防癌、 抑制脂肪酶等效果，[1]是
一种重要的具有很大开发前景的天然有机抗氧化剂 [2]。 赤胫散又名花蝴蝶、 蛇头蓼、 血当归， 是蓼属
植物羽叶蓼的变种， 其根、 茎及叶均可药用， 为贵州苗族用药， 也是 《贵州省中药材、 民族药材质
量标准》[3]收藏品种， 主要分布在云南、 贵州、 四川等地[4]。 可以以芦丁为标准品， 用分光光度法测定
总黄酮含量。
在国外， 还未见有关赤胫散研究的报道。 但国内有相关研究： 蔡泽贵等对野生和人工种植的赤
胫散的挥发油化学成分进行了比较研究， 同时也进行了抗菌活性实验 [5]；向红等对赤胫散醇的提取物
水溶液的抗菌作用进行定量检测 [6]；王绪英等研究了不同溶剂的赤胫散提取液中总黄酮的含量。 到目
前为止， 有关赤胫散根、 茎、 叶中总黄酮的含量测定和含量比较分析尚未见过报道。 本文采用分光
光度法， 以芦丁为标准品， NaNO2、 Al (NO3) 3和 NaOH 显色， 用可见分光光度计 [8]于波长 510 nm[9]
处测定赤胫散根、 茎、 叶中总黄酮的含量并对各部位含量进行比较分析， 旨在为我们选取赤胫散药
物各部位作为药剂原料提供理论依据， 并且为利用和进一步开发天然药物资源奠定一定的理论基础。
1 材料与方法
1.1 材料
赤胫散的根、 胫、 叶 （采于贵州省毕节市）
1.2 试剂与仪器
试剂： 芦丁标准品 （生化试剂）： 中国医药集团上海化学试剂公司， 亚硝酸钠 （AR）： 重庆北碚
化学试剂厂， 硝酸铝 （AR）： 广东汕头市西陇化工厂， 无水乙醇 （AR）： 重庆川东化工 (集团) 有限
公司化学试剂厂。
2011 年第 8 期
第 29 卷
（总第 133 期）
NO.8，2011
Vol.29
General No.133
毕 节 学 院 学 报
JOURNAL OF BIJIE UNIVERSITY
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仪器： 电热干燥箱 (武汉精华科教仪器有限公司）， SG5200HPT 超声波清洗器 （上海冠特超声
仪器有限公司）， VIS-723G可见分光光度计 （北京瑞利分析仪器公司）， FA2004N 电子天平 （上海箐
海仪器有限公司）。
1.3 测定方法
1.3.1 样品溶液的制备
将在同一生长环境下采摘回来的赤胫散 （取自于贵州省毕节市， 经六盘水师范学院生物系向红
教授鉴定， 确认为蓼科植物赤胫散） 洗净并进行根、 茎、 叶分离， 放入电热干燥箱中， 40℃， 烘干
20 h， 然后进行粉碎， 过 60 目筛后放于干燥器中备用。 分别精确称取赤胫散根、 茎、 叶样品干燥粉
末各 1g， 加入 20mL 70%的乙醇溶液做溶剂， 超声提取。 设定超声清洗器功率为 100%， 提取时间为
40 min， 温度为 30℃， 超声提取赤胫散根、 茎、 叶中黄酮类化合物， 重复提取 3 次， 并将每次提取
液分别合并和过滤后用浓度为 70%的乙醇溶液定容于 100mL容量瓶中， 即得到样品溶液[10]。
1.3.2 标准溶液的制备
精密称取已干燥至恒重的芦丁对照品 100mg 于 100mL 小烧杯中， 加入 70％乙醇适量， 温热溶
解， 冷却至室温， 然后转移于 100mL 溶量瓶中， 并用 70％乙醇定溶至刻度， 摇匀。 精密吸取 20mL
于 100mL容量瓶中， 加入 70％乙醇至刻度 (芦丁浓度 0.2 mg/mL)， 作为贮备液备用[11]。
1.3.3 标准曲线的绘制
分别吸取芦丁标准品溶液 0.0、 1.0、 2.0、 3.0、 4.0、 5.0mL 于 25mL 溶量瓶中， 首先加 5%亚硝酸
钠溶液 1mL， 摇匀， 放置 6min， 然后加 10%硝酸铝溶液 1mL， 摇匀， 放置 6min， 再加入 5%氢氧化
钠溶液 10mL， 最后以 70%乙醇定容至刻度， 摇匀， 放置 15min。 以不加芦丁标准液为参比， 选用
1cm 比色皿， 在波长为 510nm 处， 测定吸光度， 以加入标准溶液的浓度为横坐标， 相应吸光度为纵
坐标， 作标准曲线[12]。 标准溶液吸光度的测定结果如表 1所示。 根据标准溶液的不同浓度和相应的吸
光度绘制标准曲线， 如图 1。 芦丁的回归方程为： A =9.5786C+0.0068， 其中 A 为吸光度， C 为芦丁
的浓度 (mg/mL)， 相关系数 R2 = 0.9987。 实验表明： 总黄酮在 0.008-0.040 mg/mL 范围内线性关系良
好。
表 1 标准溶液吸光度的测定
图 1 芦丁标准曲线
吸
光
度
0
0.450
0.400
0.350
0.300
0.250
0.200
0.150
0.100
0.050
0.045
0.000
0.005 0.01 0.015 0.02 0.025 0.03 0.035 0.04
浓度 （mg/mL）
y=9.5786x+0.0068
R2=0.9987
浓度/(mg/mL) 吸光度
0 0
0.008 0.091
0.016 0.163
0.024 0.233
0.032 0.315
0.040 0.388
图 1 芦丁标准曲线
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1.3.4 精密度实验
分别吸取 3mL赤胫散根、 茎、 叶样品液 (各平行 3 份)， 分别置于 25mL 容量瓶中， 按 1.2.3 项下
所述方法显色， 以不加样品溶液为参比， 选用 1cm比色皿， 在 510 nm波长下测定吸光度。 结果见表
2， 赤胫散根、 茎、 叶样品相对标准偏差分别为 1.04%、 0.94%、 1.86%， 都小于 3%， 表明该仪器精
密度良好。
表 2 精密度试验
1.3.5 稳定性实验
按 1.2.1 项下方法制备样品溶液， 分别吸取 3mL 赤胫散根、 茎、 叶样品液和芦丁标准溶液各 3
份， 按 1.2.3 项下所述方法显色， 以不加样品溶液和芦丁标准溶液为参比， 选用 1cm 比色皿， 在
510nm 波长下测定吸光度， 然后在 40min 内每隔 10min 测定吸光度一次， 观察吸光度的变化情况。
结果见表 3， 在 0-40min范围内， 测得值基本不变， 芦丁相对标准偏差为 0.51%， 赤胫散根、 茎、 叶
样品相对标准偏差分别为 0.73%、 0.57%、 2.58%， 都小于 3%， 说明在 40min 范围内芦丁和样品溶液
吸光度的稳定性较好。
表 3 稳定性试验
1.3.6 样品溶液总黄酮含量的测定
分别吸取赤胫散根、 茎、 叶样品液各 1mL (各平行 3份?)， 分别置于 25mL容量瓶中， 按 1.2.3项
下所述方法显色， 以不加样品溶液为参比， 选用 1cm比色皿， 在 510 nm波长下测定吸光度。
2 结果与讨论
序号 吸光度 1 (根) 吸光度 2 (茎) 吸光度 3 (叶)
1 0.498 0.274 0.402
2 0.488 0.272 0.439
3 0.495 0.269 0.417
平均值 0.494 0.272 0.419
RSD/% 1.04 0.94 1.86
时间/min 吸光度 1 (根) 吸光度 2 (茎) 吸光度 3 (叶) 芦丁吸光度
0 0.501 0.268 0.413 0.217
10 0.492 0.274 0.399 0.221
20 0.493 0.266 0.401 0.223
30 0.486 0.261 0.414 0.219
40 0.482 0.260 0.389 0.214
平均值 0.491 0.266 0.403 0.219
RSD/% 0.73 0.57 2.58 0.51
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2.1 结果
赤胫散根、 茎、 叶样品溶液吸光度的测定结果如表 4， 根据回归方程， 计算出赤胫散各部位样品
溶液中总黄酮的含量， 结果如表 5。
表 4 样品吸光度测定
表 5 样品含量计算
2.2讨论
2.2.1 黄酮类化合物分子易与金属盐类如铝盐、 锶盐、 镁盐等反应生成有色金属络合物[13]，可用于
黄酮类化合物含量的测定。 在本实验中， 以赤胫散为原料， 采用 70%乙醇为提取溶剂， 超声提取赤
胫散根、 茎、 叶中总黄酮， 以芦丁为标准对照品， 采用 NaNO2-Al (NO3)3-NaOH 络合法， 先用 NaNO2
还原黄酮， 再加 Al (NO3)3进行络合， 最后加 NaOH 溶液显色， 产生红色化合物进行比色测定测定其
中的黄酮类物质。
2.2.2 采用分光光度法分别测定了赤胫散根、 茎、 叶中总黄酮的含量， 在精密度试验、 稳定性试
验和测定含量结果中相对标准偏差值都符合要求， 说明测定仪器精密度良好， 方法可行。
2.2.3 中草药中的总黄酮成分大多数的稀释液在室温下久置以后吸收强度会下降， 在测定时应现
制现用或者低温避光保存。
3 结论
根据本课题研究， 提取中药赤胫散根、 茎、 叶中的黄酮类化合物， 测得平均含量分别为60.17
mg/g、 28.07 mg/g、 49.73 mg/g， 由此可见， 赤胫散中总黄酮在根部的含量最高， 叶部次之， 茎部含
量最低。 通过研究， 初步认识到黄酮类化合物在赤胫散中不同部位的含量分布， 为选择中药赤胫散
各部位作为药剂原料提供理论依据。
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序号 吸光度 1 (根) 吸光度 2 (茎) 吸光度 3 (叶)
1 0.233 0.117 0.202
2 0.241 0.111 0.194
3 0.238 0.115 0.196
平均值 0.237 0.114 0.197
RSD/% 1.71 2.70 2.12
序号 根/( mg/g) 茎/(mg/g) 叶/( mg/g)
1 59.04 28.76 50.95
2 61.13 27.20 48.86
3 60.34 28.24 49.38
平均值/(mg/g) 60.17 28.07 49.73
RSD/% 1.75 2.83 2.19
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Determination of the Total Flavonoids in Different Sections
of Rruncinate Knotweed Herb by Visible Spectrophotometry
LI Yu-hua, ZHANG Lei
（School of Chemistry and Chemical Engineering of Bijie University, Bijie, Guizhou551700, China）
Abstract： The sample solution was prepared by the method of ultrasonic extraction with 70% Ethanol
solution at 30 ℃ for 40 min, of which the total flavonids were determined, with the method of visible spec-
trophotometry at 510 nm in runcinate knotweed herb with rutin as the standard sample, NaNO2, Al (NO3)
3 and NaOH as the color agent. The result showed that a good linear relationship between 0.008 and
0.040mg/mL, the regression equation was A=9.5786C+0.0068, with the correlation coefficient R2= 0.9987.
The content of total flavonoids in runcinate knotweed herb from roots was 60.17 mg/g, the stalks was 28.07
mg/g, and the leaves was 49.73 mg/g (n=3) , with the RSD value of 1.75%, 2.83% and 2.19% respectively.
Conclusively, the highest content of total flavonoids was in the runcinate knotweed herb roots, and the low-
est was in the leaves.
Key words: Runcinate Knotweed Herb; Different Sections; Visible Spectrophotometry; Total
Flavonoids
（责编： 任秀秀 责校： 张永光）
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