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高效液相色谱法测定杠板归中槲皮素含量



全 文 :高效液相色谱法测定杠板归中槲皮素含量
杨佃志,戚秀萍
(山东医药技师学院,山东 泰安271000)
摘 要:目的:建立药材杠板归中槲皮素含量的测定方法。方法:色谱柱:ODS Dikma C18色谱柱(4.6mm
×150mm,5μm);柱温:30℃;流动相:甲醇-0.2%磷酸(体积比55:45);流速:1.0mL/min;检测波长:
360nm。结果:槲皮素在浓度19.8~198μg/mL的浓度范围内与峰面积线性关系良好(r=0.999 1),回
收率100.37%,RSD为0.78%。结论:本方法简便,结果可靠,可用于杠板归及其制剂的质量控制。
关键词:杠板归;槲皮素;高效液相色谱法;含量测定
中图分类号:R284   文献标识码:A   文章编号:1673-2197(2011)07-0026-02
收稿日期:2011-04-15
作者简介:杨佃志(1976-),男,硕士,山东医药技师学院助理讲师,研究方向为中药新药研究。
HPLC for content measurement of quercetin in Polygonum perfoliatum
Yang Dianzhi,Qi Xiuping
(Shandong medical technician institute,Shandong 271000,China)
Abstract:Objective:To establish an HPLC method for content determination of quercetin in Polygonum perfoliatum.Methods:HPLC
method was carried on Kromasil Cl8column.Using methanol:0.2%phosphoric acid(55:45)as the mobile phase under the detection wave-
length of 360nm.Results:The contration for quercet was linear in the range of 19.8—198μg/mL.The verage recovery was 100.37%with
RSD 0.78% .Conclusion:The method is simple、convenient and reliable for quality control of Polygonum perfoliatum.
Key Words:Polygonum Perfoliatum;Quercetin;HPLC;Content Determination
  杠板归为蓼科植物杠板归(Polygonum perfoliatum
(L.))的干燥地上部分。夏季开花时采割,本品为少数民族
用药,味酸、苦,性平,归肺、小肠经,具有清热解毒、利湿消
肿、散瘀止血的功效[1]。有文献报道了采用双波长薄层扫
描测定杠扳归糖浆中槲皮素的含量方法[2],为更有效地对
其进行质量控制,本文建立了杠扳归药材中槲皮素的高效
液相色谱测定方法。
1 仪器与试药
1.1 仪器
Water 600高效液相色谱仪,600泵;Water 2487紫外检
测器,威马龙色谱工作站;电子天平(上海精密科学仪器有限
公司),ODS Dikma C18色谱柱(4.6mm×150mm,5μm)。
1.2 材料
杠板归,经贵阳中医学院中药鉴定学教研室陈德媛教
授鉴定为杠板归,药材60℃干燥30min,粉碎,过40目筛。
槲皮素对照品(批号:100081-200406),购自中国药品生物制
品检定所,纯度为97.3%;水为双重蒸馏水;甲醇为色谱纯;
其他试剂为分析纯。
2 色谱条件
流动相:MeOH-0.2%磷酸(55∶45),流速:1.0mL/
min;检测波长360nm,柱温30℃,进样量为10μL,理论塔板
数按槲皮素峰计算大于6 000。在此条件下,槲皮素峰的tR
为14.7min,与相邻峰分离良好(R>1.5)。
图1 杠板归药材HPLC色谱
3 方法学考察
3.1 对照品溶液的制备
精密称取经120℃干燥至恒重后,精密称取槲皮素对
照品4.08mg,置于10mL量瓶,加甲醇9mL,超声溶解,冷
却至室温后加甲醇定容至刻度,摇匀即得槲皮素对照品储
备液(0.397mg/mL)。精密吸取储备液2mL,置10mL容
量瓶中,加入甲醇至刻度,摇匀,槲皮 素 对 照 品 溶 液
(79.4μg/mL)。
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3.2 样品溶液的制备
精密称取杠板归粗粉0.5g,置于50mL圆底烧瓶中,精
密加入20%盐酸乙醇溶液25mL,水浴加热回流提取2h,放
冷,称定重量,用甲醇补足减失重量,0.45μm微孔膜过滤,
即得。
3.3 线性范围关系考察
精密吸取储备液0.1、0.2、0.4、0.8、1.0mL,分别置于
2mL量瓶中,加甲醇至刻度,混匀,按上述色谱条件分别进
样,测定峰面积。以槲皮素对照品溶液浓度为横坐标Y,峰
面积积分值为坐标X,绘制标准曲线,计算回归方程为:Y=
2.64X×10-5+3.81,r=0.999 1(n=5),表明槲皮素在19.8
~198μg/mL的浓度范围内呈良好线性关系。
3.4 重现性试验
连续进样6次,10μL/次,测定槲皮素标准品溶液的峰
面积,RSD为1.22%。
3.5 精密度试验
分别精密吸取5μL对照品溶液,日内差试验在同日内
测定,每个样品重复进样5次,RSD为2.40%(n=5);日间
差试验在连续5日内测定,RSD为2.18%(n=5)。通过对
标准品日内及日间进样测定,结果表明精密度良好。
3.6 稳定性试验
按上述实验方法称取药材0.601 1g制备样品溶液,精
密吸取10μL,每隔2h进样1次,共进样5次,RSD=0.41,
结果表明供试品溶液在8h内稳定性良好。
3.7 加样回收率试验
精密称取杠板归药材粗粉0.25g,取已知含量的供试液
1.0mL6份,分别加入槲皮素标准溶液(2.420mg/mL)1mL
混合均匀,测定含量,其平均回收率为100.37%,RSD为
0.78%(n=6)。结果见表1。
表1 槲皮素加样回收率 (n=6)
样品

取样量
(g)
样品中槲皮
素含量(mg)
加入量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(﹪)
平均回收
率(﹪)
RSD
(%)
1  0.2502  1.2193  2.420 2.4259 100.27
2  0.2505  1.2140  2.420 2.4271 99.74
3  0.2506  1.2147  2.420 2.4262 99.88  100.37  0.78
4  0.2505  1.2140  2.420 2.4273 99.74
5  0.2520  1.2280  2.420 2.4272 100.90
6  0.2534  1.2349  2.420 2.4248 101.68
3.8 样品含量测定
分别于贵阳万东桥药品交易市场购得贵州产杠板归药
材3批,每批药材取3份样品,依上法测定含量,结果见表
2。
4 结语
4.1 指标性成分的确定
由于国内外对杠板归尚未进行系统的化学成分研究,
基础研究很不充分。杠板归中缺乏能够直接测定的有效成
分或指标成分,或含量太低。本实验以槲皮索含量为指标
成分,实验表明本方法快速、简便、准确,而且槲皮素本身具
有祛痰、止咳、平喘作用,可作为杠板归的质量控制指标成
分。
表2 杠板归药材含量测定
药材产地
称取药材量
(g)
峰面积
(A)
槲皮素含量
(mg/mL)
RSD 
(%) 
贵州龙里
0.4718  1905915  2.870
0.4799  1912302  2.831  2.85
0.4883  2004718  2.917
贵阳花溪
0.5123  1183610  1.641
0.5118  1168200  1.622  0.66
0.5099  1175639  1.638
贵州织金
0.5064  3359591  4.713
0.5055  3339730  4.694  0.30
0.5078  3346175  4.682
标准品 79.4μg/mL  2793924
4.2 色谱条件的确定
4.2.1 检测波长的选择
取槲皮素对照品溶液,通过紫外扫描,溶液在254nm、
360nm两个波长时有明显吸收。通过双波长色谱图分析,
最后选择360nm作为测定波长,结果比较理想,峰形较好,
干扰较少。
4.2.2 流动相的选择考察
本实验用甲醇与0.2%磷酸(体积比45∶55)可将槲皮
素与其他峰分离,且流动相配比简单。在实验中曾考察了
甲醇-0.2%磷酸不同比例(体积比55∶50、50∶50、45∶
55)。结果表明,流动相比例除对保留时间有一定影响外,
对槲皮素峰的分离和峰纯度无明显影响。
4.3 提取及水解条件的选择
杠板归药材中的槲皮素有一部分以苷元形式存在的,
要将杠板归药材中的槲皮素提取出来,在实验中对提取溶
剂、提取方法、提取时间、加酸量进行了考察。结果表明,确
定采用20%盐酸的乙醇溶液加热回流提取2h时,提取率较
高。
杠板归药材因特有的疗效而广泛应用于临床,但关于
其质量评价方法的报道极少,本实验为杠板归药材及其制
剂的质量控制提供了一种简便准确的分析方法,值得推广
应用。
参考文献:
[1] 贵州省中药材.民族药材质量标准[M].贵州:贵州科技出版
社,2003.
[2] 谢辉,顾汉冲,许金宏.薄层扫描法测定杠板归糖浆中槲皮素
的含量[J].南京中医药大学学报,1997,13(2):88.
(责任编辑:姜付平)
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