全 文 ：高效液相色谱法测定杠板归中槲皮素含量
杨佃志，戚秀萍
（山东医药技师学院，山东 泰安２７１０００）
摘　要：目的：建立药材杠板归中槲皮素含量的测定方法。方法：色谱柱：ＯＤＳ　Ｄｉｋｍａ　Ｃ１８色谱柱（４．６ｍｍ
×１５０ｍｍ，５μｍ）；柱温：３０℃；流动相：甲醇－０．２％磷酸（体积比５５：４５）；流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ；检测波长：
３６０ｎｍ。结果：槲皮素在浓度１９．８～１９８μｇ／ｍＬ的浓度范围内与峰面积线性关系良好（ｒ＝０．９９９　１），回
收率１００．３７％，ＲＳＤ为０．７８％。结论：本方法简便，结果可靠，可用于杠板归及其制剂的质量控制。
关键词：杠板归；槲皮素；高效液相色谱法；含量测定
中图分类号：Ｒ２８４　　　文献标识码：Ａ　　　文章编号：１６７３－２１９７（２０１１）０７－００２６－０２
收稿日期：２０１１－０４－１５
作者简介：杨佃志（１９７６－），男，硕士，山东医药技师学院助理讲师，研究方向为中药新药研究。
ＨＰＬＣ　ｆｏｒ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ　ｏｆ　ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ　ｉｎ　Ｐｏｌｙｇｏｎｕｍ　ｐｅｒｆｏｌｉａｔｕｍ
Ｙａｎｇ　Ｄｉａｎｚｈｉ，Ｑｉ　Ｘｉｕｐｉｎｇ
（Ｓｈａｎｄｏｎｇ　ｍｅｄｉｃａｌ　ｔｅｃｈｎｉｃｉａｎ　ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｓｈａｎｄｏｎｇ　２７１０００，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ａｎ　ＨＰＬＣ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ　ｉｎ　Ｐｏｌｙｇｏｎｕｍ　ｐｅｒｆｏｌｉａｔｕｍ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＨＰＬＣ
ｍｅｔｈｏｄ　ｗａｓ　ｃａｒｒｉｅｄ　ｏｎ　Ｋｒｏｍａｓｉｌ　Ｃｌ８ｃｏｌｕｍｎ．Ｕｓｉｎｇ　ｍｅｔｈａｎｏｌ：０．２％ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ　ａｃｉｄ（５５：４５）ａｓ　ｔｈｅ　ｍｏｂｉｌｅ　ｐｈａｓｅ　ｕｎｄｅｒ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｗａｖｅ－
ｌｅｎｇｔｈ　ｏｆ　３６０ｎｍ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅ　ｃｏｎｔｒａｔｉｏｎ　ｆｏｒ　ｑｕｅｒｃｅｔ　ｗａｓ　ｌｉｎｅａｒ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒａｎｇｅ　ｏｆ　１９．８—１９８μｇ／ｍＬ．Ｔｈｅ　ｖｅｒａｇｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｗａｓ　１００．３７％ｗｉｔｈ
ＲＳＤ　０．７８％ ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　ｓｉｍｐｌｅ、ｃｏｎｖｅｎｉｅｎｔ　ａｎｄ　ｒｅｌｉａｂｌｅ　ｆｏｒ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｏｆ　Ｐｏｌｙｇｏｎｕｍ　ｐｅｒｆｏｌｉａｔｕｍ．
Ｋｅｙ　Ｗｏｒｄｓ：Ｐｏｌｙｇｏｎｕｍ　Ｐｅｒｆｏｌｉａｔｕｍ；Ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ；ＨＰＬＣ；Ｃｏｎｔｅｎｔ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
　　杠板归为蓼科植物杠板归（Ｐｏｌｙｇｏｎｕｍ　ｐｅｒｆｏｌｉａｔｕｍ
（Ｌ．））的干燥地上部分。夏季开花时采割，本品为少数民族
用药，味酸、苦，性平，归肺、小肠经，具有清热解毒、利湿消
肿、散瘀止血的功效［１］。有文献报道了采用双波长薄层扫
描测定杠扳归糖浆中槲皮素的含量方法［２］，为更有效地对
其进行质量控制，本文建立了杠扳归药材中槲皮素的高效
液相色谱测定方法。
１　仪器与试药
１．１　仪器
Ｗａｔｅｒ　６００高效液相色谱仪，６００泵；Ｗａｔｅｒ　２４８７紫外检
测器，威马龙色谱工作站；电子天平（上海精密科学仪器有限
公司），ＯＤＳ　Ｄｉｋｍａ　Ｃ１８色谱柱（４．６ｍｍ×１５０ｍｍ，５μｍ）。
１．２　材料
杠板归，经贵阳中医学院中药鉴定学教研室陈德媛教
授鉴定为杠板归，药材６０℃干燥３０ｍｉｎ，粉碎，过４０目筛。
槲皮素对照品（批号：１０００８１－２００４０６），购自中国药品生物制
品检定所，纯度为９７．３％；水为双重蒸馏水；甲醇为色谱纯；
其他试剂为分析纯。
２　色谱条件
流动相：ＭｅＯＨ－０．２％磷酸（５５∶４５），流速：１．０ｍＬ／
ｍｉｎ；检测波长３６０ｎｍ，柱温３０℃，进样量为１０μＬ，理论塔板
数按槲皮素峰计算大于６　０００。在此条件下，槲皮素峰的ｔＲ
为１４．７ｍｉｎ，与相邻峰分离良好（Ｒ＞１．５）。
图１　杠板归药材ＨＰＬＣ色谱
３　方法学考察
３．１　对照品溶液的制备
精密称取经１２０℃干燥至恒重后，精密称取槲皮素对
照品４．０８ｍｇ，置于１０ｍＬ量瓶，加甲醇９ｍＬ，超声溶解，冷
却至室温后加甲醇定容至刻度，摇匀即得槲皮素对照品储
备液（０．３９７ｍｇ／ｍＬ）。精密吸取储备液２ｍＬ，置１０ｍＬ容
量瓶中，加入甲醇至刻度，摇匀，槲皮 素 对 照 品 溶 液
（７９．４μｇ／ｍＬ）。
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３．２　样品溶液的制备
精密称取杠板归粗粉０．５ｇ，置于５０ｍＬ圆底烧瓶中，精
密加入２０％盐酸乙醇溶液２５ｍＬ，水浴加热回流提取２ｈ，放
冷，称定重量，用甲醇补足减失重量，０．４５μｍ微孔膜过滤，
即得。
３．３　线性范围关系考察
精密吸取储备液０．１、０．２、０．４、０．８、１．０ｍＬ，分别置于
２ｍＬ量瓶中，加甲醇至刻度，混匀，按上述色谱条件分别进
样，测定峰面积。以槲皮素对照品溶液浓度为横坐标Ｙ，峰
面积积分值为坐标Ｘ，绘制标准曲线，计算回归方程为：Ｙ＝
２．６４Ｘ×１０－５＋３．８１，ｒ＝０．９９９　１（ｎ＝５），表明槲皮素在１９．８
～１９８μｇ／ｍＬ的浓度范围内呈良好线性关系。
３．４　重现性试验
连续进样６次，１０μＬ／次，测定槲皮素标准品溶液的峰
面积，ＲＳＤ为１．２２％。
３．５　精密度试验
分别精密吸取５μＬ对照品溶液，日内差试验在同日内
测定，每个样品重复进样５次，ＲＳＤ为２．４０％（ｎ＝５）；日间
差试验在连续５日内测定，ＲＳＤ为２．１８％（ｎ＝５）。通过对
标准品日内及日间进样测定，结果表明精密度良好。
３．６　稳定性试验
按上述实验方法称取药材０．６０１　１ｇ制备样品溶液，精
密吸取１０μＬ，每隔２ｈ进样１次，共进样５次，ＲＳＤ＝０．４１，
结果表明供试品溶液在８ｈ内稳定性良好。
３．７　加样回收率试验
精密称取杠板归药材粗粉０．２５ｇ，取已知含量的供试液
１．０ｍＬ６份，分别加入槲皮素标准溶液（２．４２０ｍｇ／ｍＬ）１ｍＬ
混合均匀，测定含量，其平均回收率为１００．３７％，ＲＳＤ为
０．７８％（ｎ＝６）。结果见表１。
表１　槲皮素加样回收率 （ｎ＝６）
样品
号
取样量
（ｇ）
样品中槲皮
素含量（ｍｇ）
加入量
（ｍｇ）
测得量
（ｍｇ）
回收率
（﹪）
平均回收
率（﹪）
ＲＳＤ
（％）
１　 ０．２５０２　 １．２１９３　 ２．４２０　２．４２５９　１００．２７
２　 ０．２５０５　 １．２１４０　 ２．４２０　２．４２７１　９９．７４
３　 ０．２５０６　 １．２１４７　 ２．４２０　２．４２６２　９９．８８　 １００．３７　 ０．７８
４　 ０．２５０５　 １．２１４０　 ２．４２０　２．４２７３　９９．７４
５　 ０．２５２０　 １．２２８０　 ２．４２０　２．４２７２　１００．９０
６　 ０．２５３４　 １．２３４９　 ２．４２０　２．４２４８　１０１．６８
３．８　样品含量测定
分别于贵阳万东桥药品交易市场购得贵州产杠板归药
材３批，每批药材取３份样品，依上法测定含量，结果见表
２。
４　结语
４．１　指标性成分的确定
由于国内外对杠板归尚未进行系统的化学成分研究，
基础研究很不充分。杠板归中缺乏能够直接测定的有效成
分或指标成分，或含量太低。本实验以槲皮索含量为指标
成分，实验表明本方法快速、简便、准确，而且槲皮素本身具
有祛痰、止咳、平喘作用，可作为杠板归的质量控制指标成
分。
表２　杠板归药材含量测定
药材产地
称取药材量
（ｇ）
峰面积
（Ａ）
槲皮素含量
（ｍｇ／ｍＬ）
ＲＳＤ　
（％）　
贵州龙里
０．４７１８　 １９０５９１５　 ２．８７０
０．４７９９　 １９１２３０２　 ２．８３１　 ２．８５
０．４８８３　 ２００４７１８　 ２．９１７
贵阳花溪
０．５１２３　 １１８３６１０　 １．６４１
０．５１１８　 １１６８２００　 １．６２２　 ０．６６
０．５０９９　 １１７５６３９　 １．６３８
贵州织金
０．５０６４　 ３３５９５９１　 ４．７１３
０．５０５５　 ３３３９７３０　 ４．６９４　 ０．３０
０．５０７８　 ３３４６１７５　 ４．６８２
标准品 ７９．４μｇ／ｍＬ　 ２７９３９２４
４．２　色谱条件的确定
４．２．１　检测波长的选择
取槲皮素对照品溶液，通过紫外扫描，溶液在２５４ｎｍ、
３６０ｎｍ两个波长时有明显吸收。通过双波长色谱图分析，
最后选择３６０ｎｍ作为测定波长，结果比较理想，峰形较好，
干扰较少。
４．２．２　流动相的选择考察
本实验用甲醇与０．２％磷酸（体积比４５∶５５）可将槲皮
素与其他峰分离，且流动相配比简单。在实验中曾考察了
甲醇－０．２％磷酸不同比例（体积比５５∶５０、５０∶５０、４５∶
５５）。结果表明，流动相比例除对保留时间有一定影响外，
对槲皮素峰的分离和峰纯度无明显影响。
４．３　提取及水解条件的选择
杠板归药材中的槲皮素有一部分以苷元形式存在的，
要将杠板归药材中的槲皮素提取出来，在实验中对提取溶
剂、提取方法、提取时间、加酸量进行了考察。结果表明，确
定采用２０％盐酸的乙醇溶液加热回流提取２ｈ时，提取率较
高。
杠板归药材因特有的疗效而广泛应用于临床，但关于
其质量评价方法的报道极少，本实验为杠板归药材及其制
剂的质量控制提供了一种简便准确的分析方法，值得推广
应用。
参考文献：
［１］　贵州省中药材．民族药材质量标准［Ｍ］．贵州：贵州科技出版
社，２００３．
［２］　谢辉，顾汉冲，许金宏．薄层扫描法测定杠板归糖浆中槲皮素
的含量［Ｊ］．南京中医药大学学报，１９９７，１３（２）：８８．
（责任编辑：姜付平）
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