全 文 ：·贮藏保鲜加工· 北方园艺２０１６（０６）：１２０～１２４
第一作者简介：方贺（１９９０－），女，硕士研究生，研究方向为药物新
剂型研究。Ｅ－ｍａｉｌ：３５８８３１９４０＠ｑｑ．ｃｏｍ．
责任作者：陈文（１９６７－），男，博士，教授，研究方向为药物新剂型研
究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｃｈｅｎ－ｗｅｎ２０００＠１２６．ｃｏｍ．
基金项目：国家“重大新药创制”科技重大专项资助项目
（２０１１ＺＸ０９４０１－００７）。
收稿日期：２０１５－１２－１６
ＤＯＩ：１０．１１９３７／ｂｆｙｙ．２０１６０６０３０
大孔吸附树脂纯化黄花柳花
总黄酮工艺研究
方 　 贺，宋 旺 弟，陈 　 文
（石河子大学 药学院，新疆 石河子８３２０００）
　　摘　要：以黄花柳花为试材，采用紫外分光光度法，选择５种不同型号的树脂进行静态吸附
试验，筛选出对其吸附解吸效性能高的树脂，再通过动态吸附与解吸试验研究上样浓度、树脂上
样量、洗脱剂及流速等条件对黄花柳花总黄酮纯化效果的影响，优化维药黄花柳花总黄酮的大孔
树脂纯化工艺。结果表明：ＡＢ－８型大孔吸附树脂对黄花柳花总黄酮具有较好的吸附解吸效果，最
佳纯化条件为黄花柳花待纯化液浓度为３．１３ｇ／Ｌ，调节上样液ｐＨ　４．２，上样量５．５ｍＬ／ｇ，以
１．０ｍＬ／ｍｉｎ流速上样，依次用１０ＢＶ蒸馏水淋洗，６ＢＶ　７０％乙醇以２．０ｍＬ／ｍｉｎ流速洗脱，得纯
化液。经ＡＢ－８纯化后的黄花柳花总黄酮纯度达５１．９９％。ＡＢ－８型大孔吸附树脂能有效提高黄
花柳花中总黄酮纯度，并符合中药有效部位研究要求。
关键词：黄花柳花；大孔树脂；总黄酮；纯化工艺
中图分类号：Ｒ　２８４．１　文献标识码：Ａ　文章编号：１００１－０００９（２０１６）０６－０１２０－０５
　　黄花柳（Ｓａｌｉｘ　ｃａｐｒｅａ　Ｌ．）属杨柳科（Ｓａｌｉｃａｃｅａ）柳属
（Ｓａｌｉｘ．Ｌ）植物，又名羊柳，生于新疆阿尔泰地区的河谷
或林缘，外蒙古、西伯利亚及欧洲各地均有分布［１］，其生
长速度快，可防沙固土，是经济实用的维吾尔药材之一。
其维吾尔药名为比地木西克，民间多以嫩枝、叶、根、茎
皮和花入药，且常与玫瑰花、牛舌草、香青兰等维药组方
治疗心血管疾病［２］。其性湿寒、味辛，维吾尔医学认为
　　　　
其具有补脑补心、爽心止痛、生湿止渴、清热解肿、滋补
眼睛、降逆止吐等功效［３］。
药理研究表明黄花柳花具有抗炎，抗癌，抗氧化以
及抑制肿瘤等生物活性［４－６］，但其有效成分尚不明确。
黄花柳花化学成分主要为黄酮、黄酮苷类化合物［７］。目
前国内对黄花柳花的总黄酮进行了提取与含量测定等
研究［８－９］，故对其总黄酮的富集将为后续有效成分的研
究奠定基础。ＡＢ－８大孔吸附树脂为聚苯乙烯型弱极性
聚合物吸附剂，目前已广泛应用在黄酮类化合物的分离
提纯中，具有较好的分离纯化效果［１０］。该试验选用ＡＢ－８、
Ｄ１０１、ＨＺ８４１、ＨＰＤ６００以及聚酰胺树脂用于黄花柳花总黄
酮的富集，考察了ＡＢ－８大孔吸附树脂分离纯化黄花柳花
黄酮的工艺参数，确定了最佳的吸附、解吸条件，以期为黄
花柳花总黄酮的分离纯化提供相关方法与技术参数

。
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｅｔｈａｎｏｌ　ｒｅｆｌｕｘ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍＬｙｃｏｐｏｄｉ　ｈｅｒｂａ　ｗｅｒｅ　ｓｔｕｄｉｅｄ．Ｉｎ　ｏｒｄｅｒ
ｔｏ　ｉｎｃｒｅａｓｅ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｙｉｅｌｄ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ，ｔｈｅ　ｅｔｈａｎｏｌ　ｒｅｆｌｕｘ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍ
Ｌｙｃｏｐｏｄｉ　ｈｅｒｂａ　ｗａｓ　ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ　ｂｙ　ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｔｅｓｔ　Ｌ９（３４）ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｓｉｎｇｌｅ－ｆａｃｔｏｒ　ｔｅｓｔｓ．Ｍｅａｎｗｈｉｌｅ，ｔｈｅ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ
ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍＬｙｃｏｐｏｄｉ　ｈｅｒｂａ　ｗａｓ　ｅｖａｌｕａｔｅｄ　ｂｙ　ｍｅａｎｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ｃａｐａｃｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｈｙｄｒｏｘｙｌ　ｆｒｅｅ
ｒａｄｉｃａｌ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ＤＰＰＨ　ｆｒｅｅ　ｒａｄｉｃａｌ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｕｍ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ　ｗｅｒｅ　７５％ｏｆ　ｔｈｅ　ｖｏｌｕｍｅ
ｆｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｔｈａｎｏｌ，６０∶１ｍＬ／ｇ　ｏｆ　ｌｉｑｕｉｄ　ｍａｔｅｒｉａｌ　ｒａｔｉｏ，１５０ｍｉｎｕｔｅｓ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ，８０℃ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，
ａｎｄ　ｕｎｄｅｒ　ｔｈｅｓｅ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｗａｓ　１．８２％．Ｗｈｅｎ　ｔｈｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ
ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｗａｓ　０．０１４　０ｍｇ／ｍＬ，ｔｈｅ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ｒａｔｅｓ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｏｎ·ＯＨ　ａｎｄ　ＤＰＰＨ· ｗｅｒｅ　７２．６５％ａｎｄ
９３．０２％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｗｈｉｃｈ　ｉｍｐｌｉｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｈａｄ　ｇｏｏｄ　ａｂｉｌｉｔｙ　ｔｏ　ｓｃａｖｅｎｇｅ·ＯＨ　ａｎｄ　ＤＰＰＨ·．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｌｙｃｏｐｏｄｉ　ｈｅｒｂａ；ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ；ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｐｒｏｃｅｓｓ；ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ
０２１
北方园艺２０１６（０６）：１２０～１２４ ·贮藏保鲜加工·
１　材料与方法
１．１　试验材料
黄花柳花药材经石河子大学药学院成玉怀高级实
验师鉴定为黄花柳（Ｓａｌｉｘ　ｃａｐｒｅａ　Ｌ．）的干燥花絮，干燥
阴凉处避光保存。
ＵＶ－２４０１紫外分光光度计（日本岛津公司），ＳＥＮＣＯ
Ｒ１００旋转蒸发器（上海申生科技有限公司），ＳＨＡ－Ｃ水
浴恒温震荡器（江苏金坛医疗仪器厂），ＴＰ－３００超声波提
取器（北京天鹏电子新技术有限公司），ＨＩ２２１台式酸度
测定仪（意大利哈纳），常压玻璃柱（φ１．５×Ｈ　４０ｃｍ），
ＢＰ２１１Ｄ电子天平（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ）。
芦丁（中国药品生物制品鉴定所，批号１０００８０－２００７０７），
ＡＢ－８大孔树脂（天津光复精细化工研究所），ＨＺ８４１、
ＨＰＤ６００大孔树脂（上海摩速科学器材有限公司），Ｄ１０１
大孔树脂（天津海光化工公司），聚酰胺树脂（北京索莱
宝科技有限公司），其它试剂均为分析纯。
１．２　试验方法
１．２．１　黄花柳花供试液制备　精密称定粉碎后的黄
花柳花５００ｇ，采用６０％乙醇超声提取２次（料液比
１∶３０ｇ／ｍＬ），每次３０ｍｉｎ，合并提取液，离心，取上清液
减压浓缩后得浓缩液，加蒸馏水稀释成吸附所需浓度的
原料液，备用。
１．２．２　黄花柳花总黄酮含量测定方法　精密称取芦丁
标准品２０．０ｍｇ，用６０％乙醇定容至１００ｍＬ（０．２０ｇ／Ｌ），
摇匀即得。分别吸取芦丁标准液０．５、１．０、２．０、３．０、４．０、
５．０ｍＬ，置１０ｍＬ 容量瓶中，加５％ ＮａＮＯ２ 溶液
０．３ｍＬ，摇匀，静置６ｍｉｎ；加入１０％ Ａｌ（ＮＯ３）３溶液
０．３ｍＬ，摇匀，静置６ｍｉｎ；最后加入４％ ＮａＯＨ溶液
４．０ｍＬ，用６０％乙醇稀释至刻度，摇匀，静置１５ｍｉｎ，在
５０１ｎｍ处测定其吸收值。以吸光度为纵坐标，以浓度
（ｇ／Ｌ）为横坐标，得线性回归方程：ｙ＝１１．５０３ｘ＋０．０２０　６，
Ｒ２＝０．９９８　３（线性范围０．０１～０．１０ｇ／Ｌ）。精密度相对
标准偏差（ＲＳＤ）为０．２％（ｎ＝５），重复性ＲＳＤ为０．４５％。
黄酮测定的平均回收率为９９．０４％，ＲＳＤ为２．７９％。方
法学考察结果表明，该方法有效稳定，能够作为测量黄
花柳花总黄酮含量方法的依据。
１．２．３　最大吸收波长测定　分别吸取芦丁标准液
１．０ｍＬ、黄花柳花样品１．０ｍＬ，置１０ｍＬ容量瓶中，按
ＮａＮＯ２－Ａｌ（ＮＯ３）３－ＮａＯＨ经典显色法显色，在波长４００～
６００ｎｍ扫全波长，确定最大吸收波长。
１．２．４　树脂预处理　参考程振玉等［１１］的方法：树脂用
９５％乙醇浸泡２４ｈ，用水洗至流出液澄清为止，再以蒸
馏水洗至无乙醇味。用５％ ＨＣｌ冲洗树脂并浸泡４ｈ，
加蒸馏水洗至ｐＨ中性，再加４％ＮａＯＨ冲洗树脂，浸泡
４ｈ，用蒸馏水冲洗至ｐＨ中性，备用。
１．２．５　吸附量、吸附率及解吸率［１２］的测定　饱和吸附
量＝（Ｃ０－Ｃｅ）Ｖｅ／Ｗ（１），吸附率（％）＝（Ｃ０－Ｃｅ）／Ｃ０×
１００（２），洗脱率（％）＝ＣｄＶｄ／（Ｃ０－Ｃｅ）Ｖｅ×１００（３），总
黄酮纯度（％）＝（Ｃ×Ｖ×稀释倍数）／Ｍ×１００（４），式中，
Ｃ０表示初始浓度（ｇ／Ｌ），Ｃｅ表示吸附后浓度（ｇ／Ｌ），Ｖｅ表
示吸附液体积（ｍＬ），Ｃｄ洗脱液浓度（ｇ／Ｌ），Ｖｄ洗脱液体
积（ｍＬ），Ｗ 树脂量（ｇ），Ｃ纯化后干物质浓度，Ｖ 纯化后
溶解体积（ｍＬ），Ｍ 干物质重量（ｍｇ）。以上各式适用于
静态、动态吸附洗脱试验。
１．２．６　树脂静态筛选　准确称取５份预处理好的树脂
１ｇ，。置于１００ｍＬ具塞磨口锥形瓶中，加入浓度１．７２ｇ／Ｌ
黄花柳花总黄酮的待纯化液２５ｍＬ，２５℃下，置于摇床内
（１８０ｒ／ｍｉｎ）振荡２４ｈ后取出过滤，测定溶液中的总黄酮
的含量，按（１）式计算树脂饱和吸附量。将吸附后的树
脂用蒸馏水冲洗数次后，加入６０％乙醇４０ｍＬ，２５℃水
浴振荡２４ｈ，静置２ｈ过滤，测定滤液浓度，按（２）式计算
洗脱率。分别准确称取１ｇ预处理好的ＡＢ－８与Ｄ１０１
树脂，置于１００ｍＬ锥形瓶中，各加２５ｍＬ待纯化液
（１．７２ｇ／Ｌ），２５℃下振摇（１８０ｒ／ｍｉｎ）１２ｈ，每隔１ｈ测１
次溶液中总黄酮的含量，以吸附率为指标，绘制吸附动
力学曲线，考察静态吸附动力学特性。上样液ｐＨ考察：
分别称取１ｇ　ＡＢ－８树脂置于６个１００ｍＬ的具塞磨口锥
形瓶中，加入ｐＨ为２．２、３．２、４．２、５．２、６．２、７．０的２５ｍＬ
黄花柳花黄酮待纯化液，２５℃震荡４ｈ，待吸附平衡后，
分别测定上清液中各ｐＨ值吸附后黄酮含量。
１．２．７　ＡＢ－８分离纯化黄花柳花总黄酮工艺研究　上
样流速考察：准确称取ＡＢ－８树脂２０ｇ，装入（φ１．５×Ｈ
４０ｃｍ）玻璃层析柱中，将一定浓度的黄花柳花黄酮待纯
化液分别以０．５、１．０、１．５、２．０、２．５ｍＬ／ｍｉｎ的流速通过
层析柱，收集流出液检测其黄酮浓度，按式２计算吸附
率。上样量考察：装柱同上，分别将质量浓度为１２．４２、
６．２１、３．１３、１．５７、０．７０ｇ／Ｌ （ｐＨ　４．２）的待纯化液，以
１．０ｍＬ／ｍｉｎ流速上样，按（２）式计算总黄酮吸附量。上
样量考察：取浓度３．１３ｇ／Ｌ（ｐＨ　４．２）样品液通过ＡＢ－８
型树脂２０ｇ，以１．０ｍＬ／ｍｉｎ流速进行动态吸附。流出
液按每１０ｍＬ为单位分份收集，共收集３０份，收集液逐
份按总黄酮含量测定的方法测定，以含量为纵坐标，累
积上样体积为横坐标绘制泄漏曲线。洗脱剂乙醇体积
分数考察：以上述优化后条件上样，用蒸馏水洗去杂质，
当水洗至１０ＢＶ时，盐酸－ｍｏｌｉｓｈ反应呈阴性，故选用
１０ＢＶ蒸馏水除杂，再分别以３０％、５０％、６０％、７０％、
８０％的乙醇洗脱，按（３）式计算总黄酮洗脱量，（４）式计算
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·贮藏保鲜加工· 北方园艺２０１６（０６）：１２０～１２４
纯度。洗脱流速考察：动态吸附除杂试验同上，再用
７０％乙醇分别以１．０、２．０、４．０、６．０、８．０ｍＬ／ｍｉｎ的流速
过层析柱进行洗脱，收集洗脱液，以解吸率为衡量指标。
洗脱剂用量考察：以上相同条件吸附除杂，再用７０％乙
醇以２．０ｍＬ／ｍｉｎ的流速进行洗脱，分份收集洗脱液，测
定总黄酮含量。以总黄酮含量为纵坐标，洗脱剂用量为
横坐标，考察洗脱剂最佳用量。
２　结果与分析
２．１　最大吸收波长确定
由图１可知，芦丁在５０１ｎｍ处有最大吸收，样品在
４９５ｎｍ处有最大吸收，由于黄花柳花总黄酮中存在的其
它黄酮类成分，对其色谱图有一定影响，使最大吸收与
标准品相较，略有偏差，但黄花柳花在５０１ｎｍ处与４９５ｎｍ
　　
图１　芦丁对照品与供试品紫外－可见扫描图谱
Ｆｉｇ．１　Ｔｈｅ　ＵＶ－ｖｉｓｉｂｌｅ　ｓｃａｎｎｉｎｇ　ｍａｐｓ　ｏｆ　ｒｕｔｉｎ　ａｎｄ
Ｓａｌｉｘ　ｃａｐｒｅａ　Ｌ．ｅｘｔｒａｃｔｓ
处吸光度值相差小于０．００２，故在５０１ｎｍ波长处测其吸
光度值［１３］。
２．２　静态吸附试验
２．２．１　树脂筛选　不同类型树脂吸附解吸效果见表１，
吸附效果分别为 ＡＢ－８＞聚酰胺＞Ｄ１０１＞ＨＺ８４１＞
ＨＰＤ６００，但从解吸率可以看出，聚酰胺树脂解吸量最
低，而ＡＢ－８与Ｄ１０１具有良好的解吸效果。
２．２．２　ＡＢ－８与Ｄ１０１静态吸附动力学特性　根据表１
测得各组吸附率和解吸率结果可知，从中选出纯化黄花
柳花黄酮效果较好的２种树脂，进行动力学研究。由图
２可知，ＡＢ－８树脂在４ｈ后吸附率逐渐趋于平缓，而
Ｄ１０１树脂在４ｈ后吸附率略有上升趋势。数据表明，
ＡＢ－８树脂属于快速吸附平衡型树脂且ＡＢ－８吸附率和
解吸率都优于Ｄ１０１树脂，故选择ＡＢ－８树脂纯化黄花柳
花提取物。
２．２．３　黄花柳花待纯化液ｐＨ值对吸附作用的影响　
上样液ｐＨ值为２．２、３．２、４．２、５．２、６．２、７．０时，黄花柳花
对总黄酮吸附率分别为６８．５６％、６９．６３％、７１．２１％、
６７．９１％、６４．３２％、５８．０７％。随着ｐＨ值降低，总黄酮吸
附率逐渐增大，这可能是由于黄花柳花待纯化液呈弱酸
性，在酸性条件下多以分子的形式存在，故上样液偏酸
性时，有利于树脂对总黄酮的吸附。因此，选取上样液
ｐＨ值为４．２时为最佳吸附条件。
　　表１ 不同型号树脂物理参数及吸附解吸性能
　　Ｔａｂｌｅ　１ Ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ　ａｎｄ　ｐｈｙｓｉｃａｌ　ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ　ｏｆ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｔｙｐｅｓ　ｏｆ　ｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓ　ｒｅｓｉｎ
树脂类型
Ｔｈｅ　ｔｙｐｅ　ｏｆ
ｒｅｓｉｎ
极性
Ｐｏｌａｒｉｔｙ
平均孔径
Ａｖｅｒａｇｅ　ｐｏｒｅ　ｓｉｚｅ
／ｎｍ
粒径范围
Ｒａｎｇｅ　ｏｆ　ｐａｒｔｉｃｌｅ　ｓｉｚｅ
／ｍｍ
饱和吸附量
Ｓａｔｕｒａｔｅｄ　ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｃａｐａｃｉｔｙ
／（ｍｇ·ｇ－１）
吸附率
Ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｅｆｉｃｉｅｎｃｙ
／％
解吸量
Ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｃａｐａｂｉｌｉｔｙ
／（ｍｇ·ｇ－１）
洗脱率
Ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｅｆｉｃｉｅｎｃｙ
／％
ＨＰＤ６００ 极性 ８５．０　 ０．３～１．２０　 ２４．５８　 ５７．３０　 １７．８２　 ７４．５４
ＨＺ８４１ 非极性 ９０．０　 ０．３～１．２０　 ２６．５７　 ６１．９３　 ２３．５６　 ８１．１６
Ｄ１０１ 非极性 ２５．０～２８．０　 ０．３～１．２５　 ３０．０７　 ７０．１０　 ２７．８４　 ９０．４２
ＡＢ－８ 弱极性 １３．５　 ０．３～１．２５　 ３１．２２　 ７２．７７　 ３０．００　 ９７．５３
聚酰胺 弱极性 无 ０．３～１．２５　 ３０．８１　 ７１．８３　 １１．７０　 ３９．３９
图２　ＡＢ－８和Ｄ１０１静态吸附曲线
Ｆｉｇ．２　Ｓｔａｔｉｃ　ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｃｕｒｖｅｓ　ｏｆ　ＡＢ－８ａｎｄ　Ｄ１０１
２．３　ＡＢ－８分离纯化黄花柳花总黄酮工艺研究
２．３．１　上样流速对吸附量的影响　当待纯化液上样流
速为０．５、１．０、１．５、２．０、２．５ｍＬ／ｍｉｎ时，黄花柳花对总黄
酮吸附率分别为７５．９０％、７４．５５％、７２．４３％、６６．５７％、
６１．５０％。由此可知，当上样流速不断增大时，树脂吸附
的黄酮在逐渐减少，这可能是由于上样流速过快，导致
样品未充分吸附在树脂上就已流出，其上样流速越慢，
吸附效果越好［１４］，但０．５ｍＬ／ｍｉｎ与１．０ｍＬ／ｍｉｎ上样
流速相比，二者的吸附率相差较小。为了节省时间，选
择１．０ｍＬ／ｍｉｎ作为最佳的上样速度。
２．３．２　上样液质量浓度对吸附的影响　当上样液浓度
２２１
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为１２．４２、６．２１、３．１３、１．５７、０．７０ｇ／Ｌ（ｐＨ　４．２），黄花柳花
对黄酮的吸附率分别为６５．７０％、６９．９７％、７３．７５％、
７０．４０％、６８．５２％；随着上样浓度不断增大，待纯化液粘
度增大，形成传递阻滞，不利于上样液的吸附，而样品溶
液浓度过低时，也不易吸附在树脂上，故选择３．１３ｇ／Ｌ
为最佳上样浓度。
２．３．３　样品最大吸附量确定　对其泄漏曲线考察，可最
大限度的充分利用树脂的吸附效果，一般泄漏量为上样
浓度的１／１０时，吸附效果较好，故选择合适的上样量，能
有效利用树脂。由图３可知，初始阶段吸附效果较好，
当待纯化液上样量为１１０ｍＬ开始发生明显泄漏，此时
树脂上样量为２０ｇ，故选择黄花柳花树脂上样量为
５．５ｍＬ／ｇ。
图３　ＡＢ－８动态吸附泄漏曲线
Ｆｉｇ．３　Ｄｙｎａｍｉｃ　ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｃｕｒｖｅ　ｏｆ　ＡＢ－８
２．３．４　洗脱剂乙醇体积分数筛选　由图４可知，随着乙
醇浓度的增大，黄花柳花总黄酮解吸率随之增加，当乙
醇浓度７０％时，解吸率与黄酮纯度均达到最大值，但乙
醇浓度继续增大时，洗脱液中非极性杂质增多，黄酮纯
度降低，解吸效果也随之减弱。故选择乙醇浓度为７０％
作为洗脱溶剂。
图４　乙醇浓度－解吸率、纯度关系
Ｆｉｇ．４　Ａｌｃｏｈｏｌ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｒａｔｅ，
ｐｕｒｉｔｙ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ
２．３．５　洗脱速率对解吸率的影响　７０％乙醇洗脱流速
为１．０、２．０、４．０、６．０、８．０ｍＬ／ｍｉｎ时，其黄酮解吸率分别
为７８．４８％、７９．６３％、７４．７２％、６９．５５％、６２．４９％。说明
随着洗脱剂流速增大解吸率降低，这是因为在乙醇浓度
相同的情况下，乙醇流速过大，洗脱剂还未充分洗脱树
脂上吸附的黄酮就已经流出柱外，因此，洗脱流速应比
较小，但流速过低将导致整个洗脱过程时间变长，生产
周期延长，故选择洗脱速率为２．０ｍＬ／ｍｉｎ。
２．３．６　洗脱剂用量　由图５可知，洗脱剂用量为２ＢＶ
时，洗脱液中黄酮含量最高，洗脱剂用量为６ＢＶ时，其
中黄酮含量仅为１．４１ｍｇ，为节约工艺成本，因此选用
６ＢＶ的７０％乙醇可以基本洗脱完全。
图５　ＡＢ－８的动态解吸曲线
Ｆｉｇ．５　Ｄｙｎａｍｉｃ　ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｃｕｒｖｅ　ｏｆ　ＡＢ－８
２．４　ＡＢ－８纯化工艺验证
为验证优选工艺的可行性，按照已优选的最佳工艺
条件：待纯化液ｐＨ值为４．２，上样质量浓度为３．１３ｇ／Ｌ，
树脂的上样量５．５ｍＬ／ｇ，上样液流速１．０ｍＬ／ｍｉｎ，依次
用１０ＢＶ水洗脱，６ＢＶ　７０％乙醇洗脱，进行５次平行试
验，洗脱液浓缩至干，称重。按（４）式测定计算得总黄酮
的质量分数，结果总黄酮纯度分别为５２．１８％、５２．５７％、
５１．３１％、５２．０７％、５１．８２％，结果表明，在上述工艺条件
下 ＡＢ－８树脂对黄花柳花总黄酮的吸附纯化效果好，且
总黄酮的纯度稳定。
３　讨论
该试验对线性关系、精密度、回收率等方法学进行
考察，表明该含量测定方法稳定有效，能够作为测定黄
花柳花总黄酮依据。采用以大孔吸附树脂为分离基质
对黄花柳花总黄酮进行了工艺纯化研究的方法，通过静
态下吸附与解吸试验比较了５种不同树脂对黄花柳花
总黄酮的吸附效果，选取吸附及解吸量较高的树脂研究
其吸附动力学过程，结果表明，ＡＢ－８大孔吸附树脂能实
现总黄酮的快速吸附平衡，且对黄花柳花总黄酮吸附解
吸效果优于其它树脂。根据动态吸附洗脱试验考察了
上柱原液总黄酮浓度、流速、洗脱剂及其用量等条件对
总黄酮纯度的影响，最终得出了最佳纯化工艺。
该试验对比了极性、弱极性及非极性树脂对黄花柳
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·贮藏保鲜加工· 北方园艺２０１６（０６）：１２０～１２４
花总黄酮吸附性能的影响，结果显示弱极性与非极性类
树脂对黄花柳花总黄酮吸附性能较佳［１５］。试验过程中
发现上样液浓度对树脂吸附效果影响较大，若浓度过
大，则溶液粘度增大，容易导致树脂内部对于黄酮的吸
附效果减弱，使得部分黄酮未能及时吸附。而上样液浓
度过低时，虽有利于树脂充分吸附黄花柳花总黄酮，但
同时导致上样体积增大，在一定流速内，引起上样流速
大于传质速度，从而导致吸附未彻底就已流出，故在试
验过程中应选择合适的上样浓度。按上述工艺对黄花
柳花中的总黄酮进行富集，总黄酮由纯化前（４．６０±
０．２７）％提高至（５１．９９±０．４７）％，该方法能够有效提高
黄花柳花总黄酮含量，为进一步开发黄花柳花药理作用
的有效成分奠定一定物质基础。
参考文献
［１］　何江，徐芳，陈燕，等．维吾尔药材黄皮柳花与其混淆品黄花柳花的
鉴别研究［Ｊ］．时珍国医国药，２０１０，２１（８）：１９９７－１９９８．
［２］　居来提·托乎提，吐洪·艾买尔，吴秋灵．维吾尔医药爱维心口服液
治疗冠心病心绞痛临床疗效观察试验研究［Ｊ］．中国民族医药杂志，２００９，４
（４）：１０－１３．
［３］　中国医学百科学编辑委员会．中国医学百科书（维吾尔医学）［Ｍ］．上
海：上海科学技术出版社，２００５：２１０－２１１．
［４］　ＡＬＡＭ　Ｍ　Ｓ，ＫＡＵＲ　Ｇ，ＪＡＢＢＡＲ　Ｚ，ｅｔ　ａｌ．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ
ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　Ｓａｌｉｘ　ｃａｐｒｅａｆｌｏｗｅｒｓ［Ｊ］．Ｐｈｙｔｏｔｈｅｒ　Ｒｅｓ，２００６，２０（６）：４７９－４８３．
［５］　ＴＵＮＯＮ　Ｈ，ＯＬＡＶＳＤＯＴＴＥＲ　Ｃ，ＢＯＨＬＩＮ　Ｌ．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｎｔｉ－
ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｓｏｍｅ　ｓｗｅｄｉｓｈ　ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　ｐｌａｎｔｓ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｒｏｓｔａ－
ｇｌａｎｄｉｎ　ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ａｎｄ　ＰＡＦ－ｉｎｄｕｃｅｄ　ｅｘｏｃｙｔｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｊ　Ｅｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ，
１９９５，４８（２）：６１－７６．
［６］　ＳＵＬＴＡＮＡ　Ｓ，ＳＡＬＥＥＭ　Ｍ．Ｓａｌｉｘ　ｃａｐｒｅａｉｎｈｉｂｉｔｓ　ｓｋｉｎ　ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ
ｉｎ　ｍｕｒｉｎｅ　ｓｋｉｎ：ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｏｘｉｄａｔｉｖｅ　ｓｔｒｅｓｓ，ｏｒｎｉｔｈｉｎｅ　ｄｅｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ａｎｄ
ＤＮＡ　ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｅｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２００４，９１（２）：２６７－２７６．
［７］　ＡＨＭＥＤ　Ａ，ＳＨＡＨ　ＷＡ，ＡＫＢＡＲ　Ｓ，ｅｔ　ａｌ．Ａ　ｓｈｏｒｔ　ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｒｅｖｉｅｗ　ｏｎ
Ｓａｌｉｘｃａｐｒｅａｃｏｍｍｏｎｌｙ　ｋｎｏｗｎ　ａｓ　ｇｏａ　ｗｉｌｏｗ［Ｊ］．Ｉｎｔ　Ｊ　Ｒｅｓ　Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍ　Ｐｈａｒｍａ－
ｃｏｌ，２０１１，１（１）：１７－２０．
［８］　孙慧丽，艾来提·苏里坦，买吾兰·买提努尔，等．黄花柳中总黄酮
含量的研究［Ｊ］．新疆农业科学，２００８，４５（１）：８４－８７．
［９］　买吾兰江·买提努尔，艾来提·苏里坦，夏热帕提，等．响应面分析
法优化超声波提取黄花柳总黄酮工艺［Ｊ］．新疆农业科学，２００９，４６（４）：８６７－
８７２．　
［１０］陈小川，冉继春，蒋瑶．大孔吸附树脂在中草药分离纯化中的应用
［Ｊ］．重庆中草药研究，２０１４（１）：２７－３０．
［１１］程振玉，宋海燕，杨英杰，等．ＡＢ－８大孔吸附树脂静态纯化北五味子
木脂素工艺研究［Ｊ］．北方园艺，２０１５（７）：１４１－１４５．
［１２］闵建华，章振鹏，孟亚会，等．红景天苷大孔吸附树脂纯化工艺研究
［Ｊ］．中草药，２０１３，４４（１１）：１４２６－１４３０．
［１３］柴建新，万茵，付桂明，等．杜仲叶总黄酮含量测定方法优化［Ｊ］．中国
食品学报，２０１３，１３（４）：２２５－２３０．
［１４］杨艳俊，王亚红，王君龙．景天三七总黄酮大孔吸附树脂纯化工艺研
究［Ｊ］．北方园艺，２０１４（７）：１４４－１４７．
［１５］朱梦良，招丽君，梁新丽，等．大孔吸附树脂分离纯化葛根总黄酮和
葛根素的工艺优选［Ｊ］．中国实验方剂学杂志，２０１３，１９（４）：２３－２６．
Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｔｏｔａｌ　Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　Ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　Ｆｌｏｗｅｒｓ　ｏｆ　Ｓａｌｉｘ　ｃａｐｒｅａ　Ｌ．ｂｙ
ｔｈｅ　Ｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓ　Ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ　Ｒｅｓｉｎ
ＦＡＮＧ　Ｈｅ，ＳＯＮＧ　Ｗａｎｇｄｉ，ＣＨＥＮ　Ｗｅｎ
（Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｓｈｉｈｅｚｉ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｉｈｅｚｉ，Ｘｉｎｊｉａｎｇ　８３２０００）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔａｋｉｎｇ　Ｓａｌｉｘ　ｃａｐｒｅａ　Ｌ．ａｓ　ｍａｔｅｒｉａｌ，ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｕｍ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ　ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ
ｆｌａｖｏｎｅｓ　ｆｒｏｍＳａｌｉｘ　ｃａｐｒｅａ　Ｌ．ｆｌｏｗｅｒｓ　ｗｉｔｈ　ｍａｃｒｏｒｅｔｉｃｕｌａｒ　ｒｅｓｉｎｓ　ｗａｓ　ｅｘｐｌｏｒｅｄ．Ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｗｅｒｅ
ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｂｙ　ｕｓｉｎｇ　ＵＶ－Ｖｉｓ　ｓｐｅｃｔｒｕｍ．Ｆｉｖｅ　ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　ｒｅｓｉｎｓ　ｗｅｒｅ　ｅｘａｍｉｎｅｄ　ｂｙ　ｓｔａｔｉｃ　ｔｅｓｔ．Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｗｅｒｅ
ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ　ｂｙ　ｕｓｉｎｇ　ｄｙｎａｍｉｃ　ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ＡＢ－８ｍａｃｒｏｐｏｒｕｓ　ｒｅｓｉｎ　ｈａｄ
ｇｏｏｄ　ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ　ｆｏｒ　ｆａｖｏｎｏｉｄｓ　ｉｎ　Ｓａｌｉｘ　ｃａｐｒｅａｆｌｏｗｅｒｓ．Ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｒｅｆｉｎｅｄ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｗｅｒｅ　ａｓ
ｆｏｌｏｗｓ：ｔｈｅ　ｖｅｌｏｃｉｔｙ　ｏｆ　ｓａｍｐｌｅ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ　１．０ｍＬ／ｍｉｎ　ａｎｄ　ｐＨ　４．２，ｓａｍｐｌｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　３．１３ｇ／Ｌ，ｔｈｅ　ｌｏａｄｅｄ　ａｍｏｕｎｔ　ｏｆ
５．５ｍＬ／ｇ，ｗａｓｈｉｎｇ　ｗｉｔｈ　ｄｉｓｔｉｌｅｄ　ｗａｔｅｒ　１０ＢＶ，ｔｈｅｎ　ｅｌｕｔｅｄ　ｗｉｔｈ　６ＢＶ　ｏｆ　７０％ｅｔｈａｎｏｌ　ａｔ　２．０ｍＬ／ｍｉｎ．Ｕｎｄｅｒ　ｔｈｏｓｅ
ｏｐｔｉｍｕｍ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｔｈｅ　ｐｕｒｉｔｙ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｗａｓ　ｕｐ　ｔｏ　５１．９９％．ＡＢ－８ｍａｃｒｏｒｅｔｉｃｕｌａｒ　ａｂｓｏｒｐｔｉｖｅ
ｒｅｓｉｎ　ｃｏｕｌｄ　ｅｆｅｃｔｉｖｅｌｙ　ｓｅｐａｒａｔｅ　ａｎｄ　ｐｕｒｉｆｙ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｅｓ　ｆｒｏｍＳａｌｉｘ　ｃａｐｒｅａｆｌｏｗｅｒｓ，ｔｈｅ　ｐｕｒｉｔｙ　ｃｏｅｆｉｃｉｅｎｔ　ｔｈｕｓ　ｗａｓ　ｏｖｅｒ
５０％，ｗｈｉｃｈ　ｗａｓ　ｉｎ　ｌｉｎｅ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　ｅｆｅｃｔｉｖｅ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ　ｏｆ　ｈｅｒｂａｌ　ｍｅｄｉｃｉｎｅ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｓａｌｉｘ　ｃａｐｒｅａｆｌｏｗｅｒｓ；ｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓ　ｒｅｓｉｎ；ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ；ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
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