全 文 ：［收稿日期］ 20110927(007)
［基金项目］ 国家科技支撑计划项目(2007BAI27B05)
［第一作者］ 吴丽媛，研究生，从事热带药用植物(南药黎药)
研究与开发，Tel:020-39358312，E-mail:wuliyuan3
@ 163. com
［通讯作者］ * 刘明生，教授，博士生导师，从事热带药用植物
(南药黎药)研究与开发，Tel:0898-65232366，E-
mail:mingsliu2002@ yahoo. com
HPLC测定海南青牛胆中盐酸巴马汀的含量
吴丽媛1，张鹏威2，董琳2，刘明生3* ，袁中文1，周郁斌1
(1. 广州中医药大学中药学院，广州 510006;2. 海南医学院药学院，海口 571101;
3. 海南省南药黎药研究院，海口 571101)
［摘要］ 目的:建立海南青牛胆药材中盐酸巴马汀的 HPLC 含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法，Agilent TC-C18
(4. 6 mm × 250 mm，5 μm)柱，流动相为乙腈-0. 4%三乙胺水溶液(24∶ 76) ，用磷酸调 pH 至 4. 0，流速 1. 0 mL·min － 1，检测波长
347 nm，柱温 40℃。结果:盐酸巴马汀在线性范围 0. 006 ～ 0. 15 mg(r = 0. 999 9)。平均回收率为 99. 8%，RSD 0. 8%。结论:该
测定方法精密度高，重复性好，可作为海南青牛胆中盐酸巴马汀的含量测定方法。
［关键词］ 海南青牛胆;盐酸巴马汀;高效液相色谱;含量测定
［中图分类号］ R284． 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2012)08-0075-03
HPLC Determination of Palmatine Hydrochloride in
Tinospora hainanensis
WU Li-yuan1，ZHANG Peng-wei2，DONG Lin2，LIU Ming-sheng3* ，YUAN Zhong-wen1，ZHOU Yu-bin1
(1. School of Traditional Chinese Materia Medica，Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou
510006，China;2. College of Pharmacy，Hainan Medical College，Haikou 571101，China;
3. Hainan Provincial Institute of South and Li Medicine Development ＆ Research，Haikou 571101，China)
［Abstract］ Objective:To establish an HPLC method for determination of palmatine hydrochloride in
Tinospora hainanensis. Method:HPLC method was applied on Agilent TC-C18 column (4. 6 mm × 250 mm，5 μm)
at 40 ℃ with acetonitrile-0. 4% triethylamine (24∶ 76) and adjusts pH with phosphoric acid to 4. 0 as the mobile
phase;detected wavelength was at 347 nm， and the flow rate was 1. 0 mL·min － 1 . Result:The linear rage of
palmatine chloride was 0. 006-0. 15 mg (r = 0. 999 9) . The average recovery was 99. 8% and RSD was 0. 8%
. Conclusion:This determination method is accurate and reproducible，which can offer a suitable method for the
determination of palmatine hydrochloride in T． hainanensis
［Key words］ Tinospora hainanensis;palmatine hydrochloride;HPLC;determination
海南青牛胆 Tinospora hainanensis H. S. Lo et
Z. X. Li. 为防己科青牛胆属植物，为海南特有种，别
名松筋藤，黎药名肖稔。药用部位为其干燥茎，在海
南有长期的食用历史。具有镇痛、肌松、抗炎、抗菌
之功效。黎族地区用其藤茎松弛肌肉紧张，并可治
疗跌打损伤［1］。海南青牛胆的化学成分主要包括
甾酮类化合物和季铵类生物碱。研究发现甾酮类化
合物具有防治骨质疏松的功效，能显著地抑制钙的
流失和促进成骨细胞的形成，可改善因钙流失或成
骨细胞合成受阻而造成的骨质疏松［2］。季铵类生
物碱具有抗炎、抗菌、止痛和肌松等作用［3］。其中
巴马汀碱对痢疾杆菌、大肠杆菌、乙型链球菌和亚洲
甲型流感病毒均有抑制效果，具有清热解毒作用，能
治疗多种炎症［4］，另外还具有促进血液循环和活血
化瘀的作用［5］。为充分利用海南青牛胆这一资源，
控制其质量，本研究建立了 HPLC 测定海南青牛胆
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第 18 卷第 8 期
2012 年 4 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 18，No． 8
Apr．，2012
DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2012.08.038
中盐酸巴马汀含量的方法。
1 材料
1. 1 仪器 SHIMADZU LC-2010AHT 高效液相色
谱仪(紫外检测器，LC-solution 色谱工作站) ，色谱柱
为 Agilent TC-C18 (4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ，
CascadeIX 超纯水器(美国 PALL 公司) ，FA-1104 型
电子天平(110 g /0. 000 1 g，德国赛多利斯仪器有限
公司) ，KH5200DE 型数控超声波清洗仪(昆山禾创
超声仪器有限公司)。
1. 2 试药 盐酸巴马汀对照品(批号 100080-
200707，中国药品生物制品检定所提供) ，甲醇、乙
腈(色谱纯，SIGMA 公司) ，磷酸、盐酸和三乙胺
(AR，广东光华化学工厂有限公司) ，水为超纯水。
海南青牛胆药材采自海南省文昌市，由中国医学科
学院药用植物研究所海南分所陈伟平教授鉴定。
2 方法和结果
2. 1 色谱条件选择和系统适用性实验 色谱柱为
Agilent TC-C18(4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ，流动相为
乙腈-0. 4%三乙胺水溶液(24 ∶ 76) ，用磷酸调 pH 至
4. 0，流速 1. 0 mL·min － 1，检测波长 347 nm，柱温 40
℃，见图 1。
1. 盐酸巴马汀
图 1 盐酸巴马汀色谱图
2. 2 对照品溶液的制备 精密称取盐酸巴马汀对
照品适量，加甲醇制成 0. 006 g·L － 1的溶液，微孔滤
膜(0. 45 μm)过滤即得。
2. 3 供试品溶液的制备 精密称取干燥海南青牛
胆细粉 1. 0 g，置于 50 mL 锥形瓶，加入含 1% 盐酸
的甲醇溶液 50 mL，称重，静置 30 min 后，超声
40 min，补提取液至初重，微孔滤膜(0. 45 μm)过滤
即为供试品溶液。
2. 4 线性关系考察 盐酸巴马汀对照品溶液进样
量分别为 1，5，10，15，20，25 μL，在上述色谱条件下
测定，以进样质量(X)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐
标进行线性回归，得标准曲线 Y = 4. 09 × 106 －
1. 02 × 102(r = 0. 999 9) ，结果表明盐酸巴马汀在
0. 006 ～ 0. 15 mg 呈良好的线性关系。
2. 5 密度试验 对照品溶液连续进样 5 次，进样量
10 μL，测定盐酸巴马汀峰面积结果 RSD 1. 19%。
2. 6 稳定性试验 取同一份供试品溶液分别在 0，
2，4，8，12，24 h 进样测定，每次进样 10 μL。所得盐
酸巴马汀的峰面积 RSD 1. 94%。说明供试品溶液
中盐酸巴马汀含量在 24 h 内稳定。
2. 7 重复性试验 取同一批药材细粉，平行制备供
试品溶液 5 份，分别进样，每次进样 10 μL。测定盐
酸巴马汀峰面积，结果 RSD 1. 59%。
2. 8 加样回收率试验 取同批盐酸巴马汀质量分
数为 0. 052 6 mg·g － 1的药材细粉 9 份，3 份一组，3
组分别加入 2. 2 项下对照品溶液 7. 0，8. 5，10. 0
mL，按供试品溶液制备及测定。结果见表 1。
表 1 盐酸巴马汀加样回收率试验
No.
称样量
/ g
样品中
含量
/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均值
/%
RSD
/%
1 1. 001 0 0. 052 7 0. 042 0 0. 093 4 98. 7
2 1. 001 9 0. 052 7 0. 042 0 0. 094 1 99. 4
3 1. 002 6 0. 052 7 0. 042 0 0. 094 0 99. 2
4 1. 002 5 0. 052 7 0. 051 0 0. 104 5 100. 7
5 1. 002 4 0. 052 7 0. 051 0 0. 103 0 99. 3 99. 8 0. 8
6 1. 001 1 0. 052 7 0. 051 0 0. 103 2 99. 6
7 1. 002 9 0. 052 8 0. 060 0 0. 114 0 101. 1
8 1. 003 3 0. 052 8 0. 060 0 0. 113 2 100. 3
9 1. 003 0 0. 052 8 0. 060 0 0. 112 9 100. 1
2. 9 含量测定 3 批药材分别按照 2. 3 项下方法
制备供试品溶液，HPLC 测定，进样量 10 μL。结果
分别为0. 052 6，0. 052 9，0. 053 9，0． 053 4 mg·g － 1生
药材。
3 讨论
实验选用了 Agilent TC-C18(4. 6 mm × 250 mm，5
μm)、Diamonsil(钻石二代)C18(4. 6 mm × 250 mm，5
μm)、Gemini C18(4. 6 mm × 250 mm，5 μm)3 种液相
柱进行了考察，Agilent TC-C18柱分离效果及峰形最
佳。考察了流动相如乙腈-KH2PO4(磷酸调 pH)、乙
腈-磷酸、甲醇-磷酸等，柱温(20，30，35，40 ℃)以及
流动相的 pH(2. 5，3. 0，3. 8，4. 0，4. 2)对分离效果的
影响。结果显示，温度及 pH 对峰形对称度及保留
时间影响明显。最后，通过综合的比较不同参数色
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第 18 卷第 8 期
2012 年 4 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 18，No． 8
Apr．，2012
檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶
谱图的分离度、拖尾因子、保留时间，得到了最佳的
色谱条件，色谱柱为 Agilent TC-C18(4. 6 mm × 250
mm，5 μm) ，流动相为乙腈-0. 4% 三乙胺水溶液
(24∶ 76) ，用磷酸调 pH 至 4. 0，流速 1. 0 mL·min － 1，
检测波长 347 nm，柱温 40 ℃。本文建立的 HPLC 法
具有良好的精密度和准确性，适合于测定海南青牛
胆中盐酸巴马汀的含量，可有效评价海南青牛胆的
质量。
［参考文献］
［1］ 刘明生 . 黎药学概论 ［M］. 北京:人民卫生出版社，
2008:134.
［2］ 海南医学院 . 海南青牛胆植物总甾酮的医药用途及
其制备方法 . 中国［P］． ZL 02 1 28429. 6，2005-2-23.
［3］ 吴丽媛，关世侠，姜月霞，等 . 海南青牛胆化学成分与
药理学研究进展［J］. 现代药物与临床，2010，25
(3) :197.
［4］ 国家医药管理局中草药情报中心站 . 植物药有效成
分手册［M］. 北京:人民卫生出版社，1986:287，800.
［5］ Virtanen-P，Lasslia-V， Sderstrm K O. Natural
protoberberine alkaloids from Enantia chlorantha，
palmatine， columbamine and jatrorrhizine for
thioacetamide traumatized rat live［J］. Acta Amat Basel，
1998，132(2) :166.
［责任编辑 蔡仲德］
［收稿日期］ 20111205(012)
［基金项目］ 广东省佛山市产学研专项资金项目(2007CT003)
［第一作者］ 谢清春，助理研究员，从事药物新剂型与质量研究，Tel:020-39352508，E-mail:xieqchun@ 163. com
［通讯作者］ * 吕竹芬，教授，Tel:020-39352506，E-mail:luzhufen@ 163. com
竭红跌打凝胶膏剂中阿魏酸的测定
谢清春1，梁兆丰1，陈卉1，林世源1，孙美丽1，冯思欣1，班俊峰1，黄思玉1，邬威尧2，吕竹芬1*
(1. 广东药学院药物研究所 广东省药物新剂型重点实验室，广州 510006;
2. 佛山冯了性药业有限公司，广东 佛山 528000)
［摘要］ 目的:探索 HPLC 测定竭红跌打凝胶膏剂中阿魏酸的含量。方法:采用 Kromasil C18色谱柱(4. 6 mm × 250 mm，5
μm) ，以乙腈-水-三乙胺(9∶ 91∶ 0. 15)用冰乙酸调节 pH 4. 0 为流动相，流速 1. 0 mL·min － 1，检测波长 316 nm，柱温 40 ℃。结
果:阿魏酸在 0. 631 ～ 20. 20 mg·L － 1回归方程为 A = 0. 794 8C + 0. 006 4(r = 0. 999 7) ，平均回收率为 100. 62%，RSD 3. 08%(n
= 6)。结论:该方法操作简便，准确，重复性良好，可用于竭红跌打凝胶膏剂的质量控制。
［关键词］ 竭红跌打凝胶膏剂;高效液相色谱;阿魏酸;含量测定
［中图分类号］ R284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2012)08-0077-03
Study on Determination of Ferulic Acid in Jiehongdieda Cataplasm
XIE Qing-chun1，LIANG Zhao-feng1，CHEN Hui1，LIN Shi-yuan1，SUN Mei-li1，FENG Si-xin1，
BAN Jun-feng1，HUANG Si-yu1，WU Wei-yao2，LV Zhu-fen1*
(1. Institute of Material Medica，Key Laboratory of Advanced Drug Delivery of
Guangdong Province，Guangdong Pharmaceutical College，Guangzhou 510006，China;
2. Foshan Fengliaoxing Pharmaceutical Co. ，Ltd，Foshan，528000，China)
［Abstract］ Objective:To develop a HPLC method for determination off ferulic acid in Jiehong Dieda
cataplasm. Method:Kromasil C18 (4. 6 mm × 250 mm，5 μm)column was used，acetonitrile-water-triethylamine
(9∶ 91 ∶ 0. 15，pH was adjusted to 4. 0 by acetic acid) as mobile phase. The flow rate was 1. 0 mL·min － 1，
detection wavelength at 316 nm，and column temperature at 40 ℃ . Result:The linear response ranges were
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2012 年 4 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 18，No． 8
Apr．，2012