全 文 ：液相色谱法 ( H P L C ) 。 该方法利用喜树碱在紫外光
照下的天然荧光 , 在毫微克水平即可进行分析 。 喜
树碱浓度依据 己知喜树碱标准品与未知样品斑点的
大小进行比较测定 。 为了检验 T L C 分离得到的样品
纯度 , 把 T L C 板上重复出现的 3 个喜树碱斑点剥下
合并 , 用氯仿溶解 , H PL C 测定保留时间为 4 . 1m in ,
与参照化合物及文献报道一致 。 H PL C 光谱法证明 ,
T L c 分离与 lA ph al m ag er 分析连用结果快速 、 量化
精确 。 此外 , 本技 术不需要大 量的样 品和 昂贵的
H P L C 装置 。 为了证明该方法对筛选叶片的潜在可能
性 , 用两种标准的打孔器从 5 种非同源细胞繁殖的
喜树的小叶 (长 1 0 e m ) 和大叶 ( 长 3 0 e m ) 中获取
样品 , 冻干后用二氯 甲烷提取 。 结果表明 , 小叶中
喜树碱的浓度高于大叶 ; 大叶样品确定出 2 号树喜
树碱产量较高 , 超过其它树的 4 倍 ( n留m g 干重 ) 。
小叶样品喜树碱含量较一致 ; 2 号树并未显示高含
量 。 采用痕量测定法有利于筛选大量样品 , 尤其是
不同类型样 品的筛选 , 需要连续的测定 。 为 了确定
高产量的喜树碱生产线 , 需要考虑组织的发育阶段
并进行连续的比较测定 。
( 龚苏晓摘译 江纪武校 )
03 1 块茎青牛胆中抑制 N O 生成成分的检测 〔英〕 /
Y b k o z a w a T… / B io l P h a r l l l B u l l 一2 0 0 1 , 2 4 ( 10 ) 一
1 15 3~ 1 15 6
防己科植物块茎青牛胆 ( 兀n o sP o ar tub e cr u al at )
分布于中国西南部至亚洲东南部 , 包括越南 、 泰国 、
马来西亚 、 印度尼西亚和印度 。 该植物作为民间药物
广泛用 于退热 、 缓解腹痛 、 止泻 、 解毒 、 驱虫及滋补 ,
而药理作用机理多数不明 。 研究发现块茎青牛胆水提
物抑制 N O 的生成 。 本次采用脂多糖 ( L P )S 激活巨
噬细胞的方法 , 对块茎青牛胆水提物中抑制 N O 生成
的活性成分进行了检测 。
块茎青牛胆干燥茎 ( kI g ) 粉碎 , 60 一 70 ℃水提
3 次 , 药渣于室温下用 甲醇再提取 3 次 。 水提液浓缩 ,
在 乙酸乙酷和水中分配 , 得到溶于 乙酸 乙酷的部分
和水层 ; 水层进一步经 iD ia on H P 一 2 0 5 5 柱分离 , 得
到 B 、 C 、 D 3 个部分 。 甲醇提取液浓缩 , 在乙酸乙
酷和水中分配 , 得到溶于乙酸乙酷的 E部分和水层 F
部分 。
采用 L P S 激活 巨噬细胞的方法 , 检查各部分对
N O 生成的抑制作用 。 结果表 明 , 不同剂量的块茎青
牛胆提取物对 N O 生成的抑制作用具有浓度依赖性 。
相对于整个提取物而言 C 和 F 部分活性较弱 , 而 E
部分活性较强 。 将 E 部分进一步经硅胶柱色谱分离 ,
得到 E 一 l一 E一5 5 个部分 。 其中 , E 一3 部分显示出很高
的抗 N O 活性 , 50协g/ m L 和 10 0林g/ m L 时 N O 生成量
的浓度分别为 9 . 08 pM 和 6 . 39 林M 。 将含有主要成分
的 E一 3 部分经葡聚糖凝胶 L H 一20 柱纯化 , 得到 N 一反 -
阿魏酞酪胺 ( 370 m g ) , 该成分显示出很强的抗 N O
活性 , 对 N O 生成的抑制作用 具有浓度依赖性 ,
50 拼岁m L 时的抑制作用 与 10 0林M 氨基呱的作用相
似 , 故该成分是块茎青牛胆中活性最强的成分 。
对诱导型 N O 合酶 ( iN O S ) 的抑制活性试验表
明 , 块茎青牛胆提取物对 iN O S 的抑制作用具有浓度
依赖性 , 块茎青牛胆提取物 5 0 、 一0 0 、 2 0 0林g/ m L 时
iN O S 活性分别为 86 % 、 72 % 和 6 % 。 在各部分中 ,
E 部分的抑制活性较高 , 从中分离的 E一 3 部分的抑制
活性最强 , 与其中含有 N 一反一阿魏酞酪胺有关 , 该成
分 50 拼留m L 时对 iN O S 的抑制作用亦 与 10 抖M 氨基
肌的作用相似 。 与氦基呱相 比 , N 一反一阿魏酞酩胺可
改善 L P S 条件下的细胞存活力 。
(龚苏晓摘译 江纪武校 )
03 2 较蓝中环加氧酶 2 抑制成分的鉴定和分离 〔英〕 /
D 田 IZ H… / P lan at M de 一 20() l , 6 7 ( 5 ) 并 11一 4 16
十字花科植物落蓝 ( sI a ist int c ot r ia ) 为传统染料
和药用植物 , 用于治疗创伤 、 溃疡 、 肿瘤 、 痔疮 、
蛇咬伤和各种炎性疾病 。 从该植物的不同部位中已
分离出约 10 种化合物 , 包括叫睬类生物碱 、 人工
靛青染料及其前体 、 葱衍生物 、 芥子油苔和其它有
机硫化合物 、 氨基酸 、 菇类 、 核普 、 普类 、 芳香脂
肪族梭酸和黄酮类 。 为了证实箱蓝作为抗炎药物的
可能性 , 本次制备了多种秘蓝提取物 , 用直接对抗
16 个炎性靶点进行了体外筛选 。
材料和方法 : ①干燥落蓝叶和根粉碎 , 等分样
品 , 在室温下用二氯 甲烷 ( E( :M ) 或乙醉提取 , 分
别得到干燥叶 D C M 及乙醇提取物 、 干燥根二氯 甲烷