全 文 :不同产地火炭母总黄酮含量测定
韦 玉 1 ,高 雅 2 , 张可锋1* (1.桂林医学院,广西桂林 541004;2.桂林医学院附属医院 ,广西桂林 541001)
摘要 采用紫外-可见分光光度法测定不同产地火炭母中的总黄酮含量。结果表明 ,火炭母总黄酮的标准曲线方程为y=13.65x-
0.004 5,在 0.008 64~ 0.069 12mg/ml浓度范围内线性关系良好(r=0.999 9),平均回收率为 100.3%, RSD为 2.01%, 样品中总黄酮含
量为 1.60%~ 3.74%。
关键词 火炭母;总黄酮;含量测定
中图分类号 S567 文献标识码 A 文章编号 0517-6611(2011)06-03265-02
ContentDeterminationonTotalFlavonoidsinPolygonumchineseL.fromDifferentPlaces
WEIYuetal (GuilinMedicalUniversity, Guilin, Guangxi541004)
Abstract ThecontentsoftotalflavonoidsinPolygonumchineseL.fromdiferentplacesweredeterminedbyUV-visspectrometry.Theresults
indicatedthatthestandardcurveequationoftotalflavonoidsinP.chineseL.wasy=13.65x-0.004 5anditslinearcorrelationwasgoodinthe
concn.rangeof0.008 64-0.069 12mg/ml(r=0.999 9);theaveragerecoverywas100.3%, RSDwas2.01%andthedeterminedcontentof
totalflavonoidsinP.chineseL.samplewas1.60%-3.74%.
Keywords PolygonumchineseL.;Totalflavonoids;Contentdetermination
作者简介 韦玉(1973-),女 ,广西柳州人 ,讲师 ,从事生药质量与药效
研究 , *通讯作者 ,硕士 ,从事生药质量及活性成分药效研
究。 E-mail:xueshengcailiao@ 163.com。
收稿日期 2010-11-29
火炭母为蓼科植物火炭母(PolygonumchinenseL.)或粗
毛火炭母(PolygonumchinenseL.var.hispidumHook.f.)的
干燥全草 。其味辛 、苦 ,性凉 ,有毒 ,具有清热利湿 、凉血解
毒 、平肝明目 、活血舒筋等功效。常用于治疗痢疾 、肠炎 、肝
炎 、咽喉炎 、白喉 、角膜云翳 、霉菌性阴道炎 、疖肿 、湿疹 、跌打
损伤等 ,为岭南常用中草药之一 [ 1] ;主要化学成分为黄酮类 、
鞣质类 、甾醇类等 [ 2] 。黄酮类化合物具有清除自由基 、抗氧
化 、抗肿瘤 、改善心血管系统 、抗病毒 、抗菌 、抗炎 、抗过敏 ,免
疫调节等生理活性 [ 3] 。笔者采用 UV法测定火炭母中有效
成分总黄酮的含量 ,以期为火炭母质量标准的建立提供
依据。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 仪器。UV2550紫外分光光度计(日本岛津公司);
B2200S-T型超声仪(上海必能信超声有限公司);BT224S电
子分析天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司);单道微量可
调移液枪(芬兰 ThermoFinnpipete);R-200旋转蒸发仪(瑞
士 BUCHI公司)。
1.1.2 试药。芦丁标准对照品(批号:10080-9705,中国药品
生物制品检定所),其余试剂均为分析纯 。
10种火炭母(均于秋季采收)采于广西 、广东 、福建 、浙
江 、云南等省 ,经广西中医学院韦松基教授鉴定 ,云南产药材
为蓼科植物粗毛火炭母(PolygonumchinenseL.var.hispidum
Hook.f.),其余均为火炭母(PolygonumchinenseL.)的干燥
全草。样品低温干燥后粉碎成粗粉 ,备用。
1.2 方法 [ 4]
1.2.1 测定波长的选择。取少量对照品和样品溶液 ,置于
25ml量瓶中 ,加 95%乙醇至 8 ml,再加入 1ml亚硝酸钠溶液
(50g/L),摇匀 ,放置 5 min;加入 1 ml硝酸铝溶液 (100
g/L),摇匀 ,放置 6min;加入 10 ml氢氧化钠溶液(40 g/L),
用蒸馏水定容至刻度 ,摇匀 ,放置 15 min显色 ,立即测定 。以
相应溶剂为空白 ,用紫外分光光度计在 200 ~ 800 nm波长范
围内进行扫描。结果表明 ,对照品和样品溶液均在 500 nm
处有最大吸收 ,因此选择 500nm为测定波长 。
1.2.2 标准曲线的制作。精密称定芦丁对照品 5.4 mg,置
25 ml量瓶中 ,加 95%乙醇至刻度 ,摇匀 ,即得 0.216 mg/ml
的对照品溶液。取对照品溶液 0、1、2、4、6、8ml,分别置 25 ml
容量瓶中 ,按 “1.2.1”方法自加 95%乙醇至显色后。以 0管
为空白 ,在 500 nm波长处测定吸光度 ,以吸光度 A为纵坐
标 、浓度 C(mg/ml)为横坐标绘制标准曲线。得标准曲线方
程为:A=13.65C-0.004 5(r=0.999 9),对照品溶液在
0.008 64 ~ 0.069 12 mg/ml范围内线性关系良好。
1.2.3 供试品溶液的制备。精密称定药材粉末 1 g,置于回
流装置中 ,加入 95%乙醇 100 ml,水浴回流 2h。提取液减压
浓缩至较小体积 ,置于 50 ml容量瓶中 ,冷却 ,加 95%乙醇定
容至刻度 ,摇匀 ,得供试品溶液 。测定时取 2ml供试品溶液 ,
按 “1.2.1”方法进行显色测定 。
1.2.4 方法学考察。
1.2.4.1 精密度试验 。取同一浓度对照品溶液 2 ml,依法
显色后连续测定 6次吸光度 ,计算 RSD。
1.2.4.2 稳定性试验。取同一供试品溶液 2 ml依法显色
后 ,每隔 0、5、10、15、20、25、30 min测定 1次吸光度 ,计算
RSD。
1.2.4.3 重复性试验。取同一样品约 1g,精密称定 6份 ,按
“1.2.3”供试品溶液制备 ”方法平行制备样品液 ,依法显色后
测定吸光度 ,计算总黄酮含量。
1.2.4.4 加样回收率试验 。取已知总黄酮含量的火炭母粉
末约 0.25g,精密称定 6份 ,均加入芦丁对照品约 4 mg,依法
测定各份样品中总黄酮的含量 ,计算其平均回收率。
1.2.5 样品总黄酮含量测定 。各样品按 “1.2.3”供试品溶
液的制备 ”方法平行制备 3份样品液 ,依法测定各供试品溶
液的吸光度 ,求得各样品中总黄酮的平均含量 。
2 结果与分析
2.1 精密度试验结果 6次测定结果的 RSD=0.27%,说明
安徽农业科学 , JournalofAnhuiAgri.Sci.2011, 39(6):3265-3266 责任编辑 常俊香 责任校对 卢瑶
仪器精密度良好。
2.2 稳定性试验结果 测定结果的 RSD=1.7%,说明在 30
min内样品较稳定 。
2.3 重复性试验结果 6份样品测定结果的 RSD=1.37%,
说明方法的重复性良好。
2.4 加样回收率试验结果 由表 1可知 ,总黄酮的平均加
样回收率为 100.3%, RSD=2.01%。
表 1 加样回收率试验结果(n=6)
Table1 Testresultsofrecoveryrateofaddition(n=6)
序号
Sequence
number
称样量∥g
Sampling
weight
样品中含量∥mg
Contentin
samples
加入量∥mg
Addition
测得量∥mg
Measured
amount
回收率∥%
Recovery
rate
平均回收率∥%
Average
recoveryrate
RSD∥%
1 0.250 1 4.202 4.1 8.400 102.4 100.3 2.01
2 0.254 5 4.276 4.5 8.723 98.8
3 0.249 4 4.190 4.3 8.405 98.0
4 0.248 9 4.182 3.8 8.091 102.9
5 0.251 1 4.218 3.9 8.135 100.4
6 0.250 5 4.208 4.4 8.563 99.0
2.5 样品总黄酮含量 由表 2可知 ,火炭母药材样品中总
黄酮的含量为 1.60%~ 3.74%。
表 2 不同产地火炭母总黄酮含量
Table2 ThecontentofgeneralflavoneinPolygonumchinenseL.in
differentproducingareas
产地
Producing
areas
总黄酮含量∥%
Thecontentof
generalflavone
产地
Producing
areas
总黄酮含量∥%
Thecontentof
generalflavone
广西桂林
GuangxiGuilin
1.68 浙江
Zhejiang
2.29
广西南宁
GuangxiNanning
2.68 广东佛山
GuangdongFoshan
1.60
广西梧州
GuangxiWuzhou
2.40 广东肇庆
GuangdongZhaoqing
2.96
广西柳州
GuangxiLiuzhou
1.76 广西贺州
GiangxiHezhou
2.84
福建莆田
FujianPutian
3.74 云南
Yunnan 3.73
3 讨论
(1)预试验中曾选用 60%、85%、95%乙醇和甲醇等 4种
溶剂提取总黄酮 ,结果表明 95%乙醇提取液澄明度好 ,吸收
值较高 ,故试验中采用 95%乙醇为溶剂进行提取。
(2)该试验结果表明 ,同季节 、不同产地火炭母总黄酮的
含量存在一定差异 ,其中福建莆田产药材总黄酮含量最高 ,
为 3.74%,这对今后药材质量评价具有一定的参考价值。
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3266 安徽农业科学 2011年