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凉粉草中总黄酮的提取工艺研究



全 文 :北方药学 2012年第 9卷第 8期
·工艺制备·
凉粉草,又名仙人草、仙草,是一种重要的药食两用植物。
它所含有的黄酮类化合物具有多种生物活性和药理作用,可
作抗炎、抗菌、抗病毒和健胃消食类药物的主要成分;同时具
有抗氧化、抗衰老等功能;在食品加工中广泛用作食品的添加
剂[1,2]。据测定,凉粉草中黄酮类化合物的含量为 5.47~6.21%,
是提取黄酮的优质原料[3]。利用价格较低的凉粉草为原料提取
黄酮,可取得较好的经济效益和社会效益[4]。由于其用量大,所
以有必要进行总黄酮提取工艺的研究。本研究首先通过单因
素实验筛选出最佳提取条件,然后结合高效、经济原则,得出
最佳工艺条件。
1 材 料
1.1试药
凉粉草药材采于广东平远,经广州中医药大学刘梅副教
授鉴定为唇形科(Labiatae)凉粉草属(Mesona BI)植物凉粉草
(Mesona chinensis Benth),标本存放于广州中医药大学。
芦丁对照品(供含量测定用)由中国药品生物制品检定所
提供。其他试剂均为 AR级。
1.2仪器
E-IJ电子天平(沈阳龙腾电子量程仪器厂);Heλios γ紫
外分光光度计(Thermo Electron Corporation);EYELAM-1000
旋转蒸发仪(日本托普仪器有限公司);KQ3200DE型医用数控
超声波清洗器(江苏昆山市超声仪器有限公司);Sartorius
BP110S 电子天平(德国);Sartorius CP225D电子天平(德国)。
2 方法与结果
2.1测定方法的确定
取凉粉草粗粉(过二号筛)适量,用 50%乙醇回流提取
1.0h,取少许醇提液稀释成适当浓度,作为供试品溶液。取芦丁
对照品适量,用甲醇溶解,作为对照品溶液。NaNO2-Al(NO)3-
NaOH显色体系进行显色,随行试剂作空白,用紫外分光光度计
在 190~600nm范围内作全波长扫描,最大吸收波长为 510nm。
2.2标准曲线的制备
2.2.1对照品溶液的制备。精密称取 120℃干燥至恒重的芦丁
对照品 6.16mg,置 25mL容量瓶中,用甲醇定容,摇匀。
2.2.2标准曲线的制备。精密量取对照品溶液 1mL、2mL、3mL、
4mL、5mL、6mL,分别置于 25mL 容量瓶中,各加蒸馏水至
6mL,加 5%亚硝酸钠溶液 1mL,摇匀,放置 6min;然后加 10%
硝酸铝溶液 1mL,摇匀,放置 6min;最后加氢氧化钠试液
(1mol·L-1或 4%)10mL,再加蒸馏水定容至 25mL,摇匀,放置
15min,按照紫外-可见分光光度法(中华人民共和国药典 2010
版附录ⅤA),在 510nm的波长处测定吸光度,以浓度为横坐
标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线。结果显示芦丁标准品溶
液在 9.856μg·mL -1-59.136μg·mL -1 有良好现性关系,R2=
0.9995,见图 1。
图 1 芦丁标准曲线图
2.3提取工艺研究
2.3.1 溶剂浓度的考察。精密称取凉粉草粗粉(过二号筛)
5.00g,分别加入 20 BV的水、30%、50%、70%、80%、95%乙醇回
流提取一次,每次 2.0h,过滤,用少量相应乙醇洗涤药渣和容器,
滤液与洗涤液定容至 250mL容量瓶中。精密移取 1mL,按“2.1”
项下测定,并计算总黄酮在浸膏中的含量,结果见图 2。
图 2 总黄酮含量—醇浓度曲线图
由图 2 结果可知,50~70%乙醇提取的总黄酮浸出量最
高。
2.3.2提取时间考察。准确称取凉粉草粗粉(过二号筛)5.00g,
加入 20BV的 50%乙醇,分别提取 0.5h、1.0h、1.5h、2.0h、2.5h、
3.0h一次,过滤,用相应乙醇洗涤药渣和容器,滤液与洗涤液
定容至 250mL容量瓶中,精密移取 1mL,按“2.1”项下测定,并
计算总黄酮浸出率(%),结果见图 3。
凉粉草中总黄酮的提取工艺研究
张瑞霞 谢 敏(内蒙古乌海市蒙中医院 乌海 016000)
摘要:目的:研究凉粉草中总黄酮的最佳提取工艺。方法:以乙醇为提取剂,芦丁为对照品,NaNO2-Al(N0)3-Na0H显色体系进行
显色,测定波长 510nm,采用分光光度法测定仙人草中的总黄酮含量。实验设计以单因素实验为重点,考察了温度,浸提时间,浸提
次数,和溶媒倍量对总黄酮提取率的影响。结果:总黄酮最佳提取条件为:乙醇浓度 50%,提取温度 100℃,溶媒倍量 12倍,提取次
数 2次,每次 1.0h。结论:凉粉草总黄酮的提取率稳定,RSD为 0.52%,总黄酮含量平均值为 28.55%。该方法简便,重现性好。
关键词:凉粉草 总黄酮 提取工艺
中图分类号:R283 文献标识码:B 文章编号:1672-8351(2012)08-0037-02
Study on the Extractive Technology of Total Flavone from Mesona Herb
Zhang Ruixia Xie Min(Wuhai Mongolia Medical Hospital of Inner Mongolia,Wuhai 016000,China)
Abstract:Objective:To study the extraction method of the total flavonoids extracted out from Chinese Mesona herb. Methods: In the
present experiments,ethanol was used as extraction solvent,rutin was used as the standard,and NaNO2-Al(NO)3-Na0H color
system was performed for producing color, the detection wavelength was set at 510 nm to detect the total flavonoids by
spectrophotometry. Experimental design was focused on a single factor experimental design to investigate the effects of temperature,
extraction time,the solvent times,and the solvent volume on the cantents of total flavonoid extracted.Results: The optimum extraction
method was as follows: The herbal sample was extracted by 50% ethanol at a ratio of 1 ∶12 (w/v)separately twice at 100℃ for 1h.
Conclusions: The extraction rate of total flavonoid form Mesona herb is stable with RSD 0.52%,and the average content of total
flavonoid is 28.55%. The method is simple and reproducible.
Key word:Chinese Mesona herb Total flavonoid Extraction process
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北方药学 2012年第 9卷第 8期
图 3 总黄酮浸出率—提取时间的曲线图
由图 3结果表明,提取时间为 1.0h时总黄酮的浸出量和
浸出率最高。
2.3.3提取溶媒量的考察。准确称取凉粉草粗粉 5.00g,分别量取
6BV、8BV、10BV、12BV、14BV、16BV的 50%乙醇。提取 2次,每
次提取 1.0h,各次提取液分别用 50%乙醇定容于 250mL容量瓶
中,精密移取 1mL,按标准曲线的制备方法显色后于 510nm波
长处测定吸收值 A,计算总黄酮浸出率(%),结果见图 4。
图 4 总黄酮浸出率—溶媒倍量的曲线图
由图 4结果表明,12BV、14BV、16BV量的提取溶媒对总黄
酮浸出率最高,但对总黄酮的浸出率相差无几,因此选择 12BV。
3 验证实验
3.1最佳工艺的重现性考察
表 1 重现性考察结果(n=6)
准确称取凉粉草粗粉 5.00g,按单因素考察得出的最佳提
取工艺提取:加 12倍量 50%乙醇,提取温度为 100℃,提取 2
次,每次 1.0h,提取液定容于 250mL,再精密移取 1ml显色,按
标准曲线的制备方法显色后于 510nm波长处测定吸收值 A,
计算总黄酮浸出量。再精密移取 25mL于干燥至恒重的蒸发皿
中,浓缩至干,减压干燥至恒重,测总固物重。
由表 1可知:按选定的最佳工艺进行的验证试验结果显
示,凉粉草总黄酮的提取率稳定,RSD为 0.52%,总黄酮含量
平均值为 28.55%,表明该提取工艺稳定可行。
4 讨 论
在提取时间考察中,提取时间为 1.0h时总黄酮的浸出量
和浸出率最高,但再随着提取时间的延长,总黄酮的浸出量和
浸出率反而有所下降,这可能是凉粉草中的某些黄酮会因受
热时间延长而被分解破坏,从保留总黄酮方面考虑,选择提取
1.0h为最佳提取时间。
在溶剂浓度的考察中,50~70%乙醇提取的总黄酮浸出量
最高,考虑到高浓度的乙醇溶液对脂溶性物质有很好的溶解
性,会提取出较多的叶绿素等脂溶性杂质,因此确定凉粉草用
50%乙醇作为提取溶剂。
在溶媒倍量考察过程中,12BV、14BV、16BV 量的提取溶
媒对总黄酮浸出率相差无几,考虑到节约经济成本,最佳溶媒
量选择 12BV。不同倍量溶媒第一次提取的总黄酮占总浸出黄
酮的 88~93%,第二次提取占 5~9%以上,第三次提取占 1~3%,
考虑到成本,选择提取次数为 2次。
结合验证实验结果,最佳工艺条件为:乙醇浓度 50%,溶
媒倍量 12倍,提取时间 1.0h,提取次数 2次。且表明该提取工
艺稳定可行,方法简便,重现性好。
参考文献
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化学工业出版社,2002:181-190.
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究与开发,2005,26(6):139-141.
[3]秦立红,郭晓字,等.凉粉草中抗缺氧化学成分[J].沈阳药科
大学学报,2006,23(10):633.
[4]何明祥.凉粉草中黄酮的热水法提取[J].农产品加工,2008,
(8):43-48.
编号 药材重(g) 总黄酮浸出量(g) 总黄酮含量 X(%) x±s RSD(%)
1 5.0006 0.3243 28.56
2 5.0004 0.3246 28.49
3 5.0008 0.3234 28.32
28.55±0.14 0.52
4 5.0007 0.3254 28.67
5 5.0007 0.3246 28.53
6 5.0005 0.3259 28.73
分子印迹技术与药物合成
蒋青桃 曹长春 韩永红 杨 蒙 刘 斌 刘家秀(江苏淮阴卫生高等职业技术学校 淮安 223300)
摘要:分子印迹技术是新开发的一种分子识别技术,分子印迹聚合物具有选择性高、制备简单的特点。本文将阐述分子印迹技
术的原理、分子印迹聚合物的制备和其在药物合成中的应用。
关键词:分子印迹技术 固相萃取 手性拆分
中图分类号:R91 文献标识码:B 文章编号:1672-8351(2012)08-0038-02
1 引 言
分子印迹技术(molecular imprinting technique,MIT)是为
获得在空间结构和结合位点上与模板分子完全匹配的分子印
迹聚合物(molecular imprinting polymers,MIPs)而将多学科有
机结合的一种新型实验制备技术。MIT在手性拆分[1,2]和固相
萃取[3]中的应用与药物合成密切相关。
2 MIT的原理和 MIPs的制备
MIT的基本原理是通过印迹、聚合、洗脱三个过程获得能
“记忆”模板分子的空间结构并含多个作用位点的 MIPs来分
离提纯与模板分子结构相似的物质。
随着制备技术的发展,MIPs已从早期研究制备的块状发
展为无定型粉末、棒状、球形、膜等多种形态。MIPs的制备一般
为三步:一、模板分子与功能单体依靠官能团之间的共价或非
共价作用在一定溶剂中形成主客体配合物;二、加入交联剂后
通过引发剂引发进行光或热聚合在模板分子周围形成高交联
的刚性聚合物;三、将聚合物中的模板分子洗脱或解离出来,
MIPs中就留下了与模板分子相匹配的立体孔穴,这些孔穴含
有由功能单体提供的与模板分子官能团互补的功能基团[4]。具
体制备方法包括本体聚合法、分散聚合法和悬浮聚合法等[5]。
3 MIT在药物合成中的应用
3.1 MIT用于合成产物的手性拆分
手性化合物具有两个对映体,正如实物和镜像的关系,互
称对映异构体。由于药物和受体的作用存在立体选择性,手性
化合物的构型与药效有着紧密的联系。手性药物的一对对映
体在作用性质和强度上都可能有差别,它们的药理作用往往
不同甚至完全相反。手性化合物的获取方法主要有手性拆分
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